硫酸黏菌素對(duì)小鼠坐骨-脛神經(jīng)毒性作用的電生理表現(xiàn)

代重山，李繼昌，林巍，王鳳霞，孫美成，李健

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030;2.Facility for Anti-infective Drug Development and Innovation，Monash Institute of Pharmaceutical Sciences Monash University，Victoria 3052，Australia)

硫酸黏菌素對(duì)小鼠坐骨-脛神經(jīng)毒性作用的電生理表現(xiàn)

代重山1，李繼昌1，林巍1，王鳳霞1，孫美成1，李健2

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030;2.Facility for Anti-infective Drug Development and Innovation，Monash Institute of Pharmaceutical Sciences Monash University，Victoria 3052，Australia)

目的探討硫酸黏菌素對(duì)小鼠坐骨-脛神經(jīng)的毒性作用。方法昆明系雌性小鼠尾靜脈注射硫酸黏菌素7.5 mg·kg－1，每12 h 1次，按取材時(shí)間分為給藥1，3，7 d組及給藥7 d停藥7 d組。分別于第2和第4天給藥前、第8和第15天(以第1次給藥當(dāng)天為第1天計(jì))觀測(cè)小鼠的體質(zhì)量、步態(tài)、后肢支撐力、坐骨-脛神經(jīng)的復(fù)合動(dòng)作電位閾強(qiáng)度(TI)、最大刺激強(qiáng)度(MI)、潛伏期(CAPL)、波幅(CAPA)、時(shí)程(CAPD)、傳導(dǎo)速率(NCV)以及血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)的變化情況。結(jié)果與正常對(duì)照組相比，硫酸黏菌素給藥1 d組，血清Cre顯著升高，給藥3 d組，體質(zhì)量及BUN出現(xiàn)顯著性差異，給藥7 d組，步態(tài)、后肢支撐力出現(xiàn)顯著性差異。給藥1，3和7 d組，坐骨-脛神經(jīng)動(dòng)作電位各參數(shù)隨時(shí)間發(fā)生改變，TI顯著增加，分別為60%，60%，193%(P＜0.01);MI顯著增加，分別為4%，13%和100%(P＜0.05);CAPL顯著增加，分別為9.0%，9.0%和14.6%(P＜0.05)，CAPA降低，分別為0.92%，16.2%和47.6%(P＜0.01);CAPD顯著增加，分別為15.1%，11.5%和52.8%(P＜0.05);NCV顯著減低，分別為7.6%，7.5%和12.7%(P＜0.05);停藥7 d組，步態(tài)及后肢支撐力較正常對(duì)照組無明顯差異，電生理各參數(shù)均有所恢復(fù)，且只有CAPA較正常對(duì)照組差異顯著(P＜0.05)。結(jié)論硫酸黏菌素腎毒性較神經(jīng)毒性先發(fā)生，小鼠坐骨-脛神經(jīng)動(dòng)作電位隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)發(fā)生進(jìn)行性變化，且CAPA持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)。

硫酸黏桿菌素;坐骨-脛神經(jīng);神經(jīng)毒性

黏桿菌素(colistin)，也稱多黏菌素E，于1949年首次發(fā)現(xiàn)，由多黏芽孢桿菌黏菌素亞種(Bacillus polymyxa subsp.colistinus Koyama)代謝產(chǎn)生的堿性多肽類抗生素［1］。臨床上主要有甲磺酸鈉黏菌素和硫酸黏菌素兩種類型，其中硫酸黏菌素殺菌作用較強(qiáng)，但毒性作用較甲磺酸鈉黏菌素大［2］。20世紀(jì)70年代末，因神經(jīng)毒性及腎毒性僅允許用于多藥耐藥(multidrug-resistant，MDR)革蘭陰性細(xì)菌感染的纖維囊性肺炎重癥的治療［3］。近年來，由于世界范圍內(nèi)MDR革蘭陰性菌株的出現(xiàn)，特別是鮑曼不動(dòng)桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯菌的MDR的蔓延，已成為臨床治療的棘手問題，甚至引起爆發(fā)性播散感染，導(dǎo)致較高的死亡率，而新的抗生素的短缺，使得已被棄用20余年的黏菌素被重新評(píng)估和使用［4］。Lim等［5］預(yù)測(cè)，在未來5年，黏菌素將是臨床治療MDR革蘭陰性細(xì)菌感染的最佳選擇，也是最后的防線。

有關(guān)黏菌素的腎毒性機(jī)制研究較多，但其神經(jīng)毒性是由中樞神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)還是周圍神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)尚不清楚［6］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究發(fā)現(xiàn)，黏菌素可引起動(dòng)物或人四肢麻木、四肢無力、下肢疼痛、感覺異常、多發(fā)性周圍神經(jīng)炎，表明黏菌素可能直接或間接地對(duì)周圍神經(jīng)造成影響及損傷［7－10］。因此，本研究通過神經(jīng)電生理手段評(píng)價(jià)硫酸黏菌素對(duì)小鼠的周圍神經(jīng)毒性作用，分析坐骨神經(jīng)電生理變化與黏菌素神經(jīng)毒性作用之間的關(guān)系，為黏菌素神經(jīng)毒性的機(jī)制研究及臨床神經(jīng)毒性的早期診斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品和儀器

硫酸黏菌素原粉，美國Sigma公司產(chǎn)品，1 mg相當(dāng)于20 195黏菌素單位;BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn);756P紫外可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司生產(chǎn);TGL-16C臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn);肌酐(creatinine，Cre)檢測(cè)試劑盒(批號(hào):20110317)，尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)檢測(cè)試劑盒(批號(hào):20110318)，均購自南京建成生物研究所;戊巴比妥鈉，德國生產(chǎn)，北京生化試劑公司分裝(批號(hào):20101214)。

1.2 動(dòng)物、分組和給藥

健康雄性昆明系雌性小鼠80只，體質(zhì)量18～22 g，購于中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):黑B2-20070878。常規(guī)顆粒飼料飼養(yǎng)，自由飲水，溫度控制在20～24℃，濕度40%～60%，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照和硫酸黏菌素處理兩大組，每大組按照檢測(cè)時(shí)間分為給藥1，3，7 d和給藥7 d停藥7 d組。硫酸黏菌素臨床推薦劑量為1.5～3 mg·kg－1·d－1，分2～4次完成給藥，且用藥時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)不一，通常為3～28 d［11－12］，按體質(zhì)量50 kg計(jì)算，小鼠的使用劑量應(yīng)該為每天15～30 mg·kg－1，本文據(jù)此推算小鼠的劑量范圍，并依據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定實(shí)驗(yàn)組小鼠單次尾靜脈注射黏菌素7.5 mg·kg－1(10 ml·kg－1)，每12 h 1次，連續(xù)給藥7 d，正常對(duì)照組以同種方式注射生理鹽水。以給藥當(dāng)天為第1天，每大組分別按照第2天和第4天給藥前、第8和第15天時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)9～10只。

1.3 一般毒性觀察

每天給藥前及給藥后觀察小鼠精神狀態(tài)，毛發(fā)光澤度，飲食情況，活動(dòng)情況并記錄。

1.4 步態(tài)評(píng)分［13］

將小鼠放在空曠的地面上，使其自主行動(dòng)，觀察3 min。1分:正常步態(tài);2分:輕微異常步態(tài)(輕微的共濟(jì)失調(diào)，足張開，行動(dòng)吃力);3分:中度異常步態(tài)(明顯的共濟(jì)失調(diào)，足張開，移動(dòng)時(shí)肢外展);4分:重度異常步態(tài)(足張開，不能支持身體質(zhì)量，無法站立)。每組評(píng)分結(jié)果以平均值表示。

1.5 后肢支撐力變化［14］

使小鼠從距地面15 cm處自由落下，準(zhǔn)確測(cè)量著地時(shí)其后肢爪尖滑開的最遠(yuǎn)距離。每只測(cè)試3次，每次間隔30 min，取平均值。

1.6 坐骨-脛神經(jīng)電生理指標(biāo)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)過程中，控制室溫在23～27℃，ip給予0.4%戊巴比妥鈉40 mg·kg－1麻醉小鼠，使用加熱燈控制小鼠體溫。暴露小鼠左后肢坐骨神經(jīng)干，覆蓋溫?zé)崾炗停⑦B接鉤狀刺激電極，記錄針電極連接腳踝及小鼠第1趾間肌肉。接地電極連接刺激電極與記錄電極之間的皮膚上。所有神經(jīng)電項(xiàng)目在30 min內(nèi)完成。

1.6.1 神經(jīng)干閾刺激強(qiáng)度(threshold intensity，TI)和最大刺激強(qiáng)度(maximal intensity，MI)的測(cè)定

采用BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件“肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)”中“閾強(qiáng)度與動(dòng)作電位關(guān)系”模塊。刺激條件:延時(shí)1 ms，波寬0.1 ms，頻率10 Hz，初始值0 V，程控，刺激間隔1.0 s，增量25 mV。記錄條件:時(shí)間常數(shù)0.01 s，高頻濾波10 kHz。剛開始出現(xiàn)動(dòng)作電位波形時(shí)的刺激強(qiáng)度為TI;動(dòng)作電位波形達(dá)到最大時(shí)所對(duì)應(yīng)的刺激電位即為MI。

1.6.2 神經(jīng)干動(dòng)作電位的測(cè)定

采用BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件“肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)”中“神經(jīng)干動(dòng)作電位的引導(dǎo)”模塊，刺激條件:延時(shí)1 ms，波寬0.1 ms，頻率10 Hz。記錄條件:增益200倍，時(shí)間常數(shù)0.01 s，高頻濾波10 kHz。以超過最大刺激強(qiáng)度25%的刺激為刺激強(qiáng)度。在引導(dǎo)出的雙相動(dòng)作電位上，復(fù)合動(dòng)作電位波幅(compound action potential amplitude，CAPA)為波峰波谷的高度差，復(fù)合動(dòng)作電位時(shí)程(compound action potential duration，CAPD)為波長(zhǎng)，復(fù)合動(dòng)作電位潛伏期(latency of compound action potential，CAPL)為刺激偽跡起始部與動(dòng)作電位起始部之間的距離。

1.6.3 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(nerve conduction velocity，NCV)的測(cè)定

采用BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件“肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)”中“神經(jīng)干興奮傳導(dǎo)速度測(cè)定”模塊，刺激及記錄條件同動(dòng)作電位的測(cè)定。將動(dòng)物后足以自然肢體狀態(tài)與脊柱成45°夾角向斜后方拉直，沿坐骨神經(jīng)經(jīng)過部位和方向，在動(dòng)物體表準(zhǔn)確測(cè)定刺激電極到記錄電極之間的距離(s)，潛伏期為刺激偽跡起始部至動(dòng)作電位起始部之間的時(shí)間(t)根據(jù)v=s/t，計(jì)算NCV。

1.7 血清肌酐及尿素氮含量的測(cè)定

電生理指標(biāo)檢測(cè)完成后，對(duì)小鼠摘眼球取血，3000×g離心10 min，取血清置4℃冰箱備用。血清Cre及BUN含量的測(cè)定:按試劑盒說明進(jìn)行。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

步態(tài)評(píng)分、后肢支撐力、電生理各參數(shù)各時(shí)間點(diǎn)的正常對(duì)照組數(shù)據(jù)變化不大，為了便于計(jì)算和統(tǒng)計(jì)，取平均值作為正常對(duì)照組數(shù)值，數(shù)據(jù)結(jié)果用±s表示。對(duì)小鼠體質(zhì)量變化進(jìn)行t檢驗(yàn)，具體使用SPSS11.5 one-way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行齊次性檢驗(yàn)，當(dāng)方差齊次時(shí)，使用LSD多重比較，當(dāng)方差不齊次時(shí)，使用Dunnett T3檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 黏菌素對(duì)小鼠的一般毒性作用

小鼠每次給藥后表現(xiàn)出興奮不安，隨后逐漸呆滯不動(dòng)，此后腹式呼吸明顯，約10 min后呼吸基本恢復(fù)正常。在第4天第1次給藥后，1只小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重的抽搐，伏地不起，后緩慢恢復(fù)。從給藥后第4天起，大部分黏菌素組小鼠表現(xiàn)出精神抑郁，活動(dòng)減少，后肢無力，停藥3 d后，部分小鼠精神狀態(tài)逐漸開始恢復(fù)，停藥7 d時(shí)仍然有少數(shù)小鼠表現(xiàn)為精神抑郁，后肢無力。

2.2 黏菌素對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

正常對(duì)照組小鼠體質(zhì)量在15 d內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定地增長(zhǎng)，黏菌素組小鼠體質(zhì)量的增長(zhǎng)速度明顯低于正常對(duì)照組，給藥3 d后開始出現(xiàn)顯著性差異，較正常對(duì)照組下降了9.3%(P＜0.05)，給藥7 d和停藥7 d后體質(zhì)量分別下降了12.5%和11.3%(P＜0.01)(圖1)。

Fig.1 Effect of colistin sulphate on mouse body mass.Colistin sulphate 7.5 mg·kg－1was given iv，twice a day for 7 d and withdrawal 7 d.The measurement was taken while colistin sulphates were given for 1，3 and 7 d，and 7 d post administration.d 0:before drug.±s，n=9－10.*P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with corresponding normal control group.

2.3 黏菌素對(duì)小鼠步態(tài)的影響

與正常對(duì)照組步態(tài)評(píng)分1.0±0.0相比，給藥1和3 d組小鼠步態(tài)評(píng)分別為1.2±0.4，1.2±0.4，無明顯差異。給藥7 d組，步態(tài)評(píng)分為1.8±0.6，較正常對(duì)照組差異顯著增加(P＜0.05)，藥后7 d組步態(tài)評(píng)分為1.4±0.5，與正常對(duì)照組無明顯差異。所有步態(tài)異常的小鼠，僅有1只在給藥7 d后出現(xiàn)明顯的共濟(jì)失調(diào)，表現(xiàn)為足展開和移動(dòng)時(shí)肢外展，剩余均為輕度的步態(tài)異常。

2.4 黏菌素對(duì)小鼠后肢展開距離變化

與正常對(duì)照組后肢展開距離(3.5±0.1)cm相比，給藥1和3 d組小鼠后肢展開距離別為3.6±0.1和(3.5±0.1)cm，無明顯差異。給藥7 d組小鼠，步態(tài)展開距離為(3.7±0.1)cm，較正常對(duì)照組差異顯著增加(P＜0.05);藥后7 d組小鼠后肢展開距離(3.6±0.1)cm，與正常對(duì)照組無明顯差異。

2.5 黏菌素對(duì)小鼠坐骨神經(jīng)-脛神經(jīng)電生理的影響

2.5.1 波形

正常對(duì)照組波形正常，給藥1 d組，2只小鼠坐骨神經(jīng)-脛神經(jīng)出現(xiàn)重復(fù)性動(dòng)作電位，給藥3及7 d組，波形與對(duì)照組有所不同，出現(xiàn)三相動(dòng)作電位，但未見重復(fù)性動(dòng)作電位(圖2)。

Fig.2 Representative record of compound action potential(CAP)of sciatic-tibial nerves in mice treated with intravenous colistin sulphate.The mice were iv given colistin sulphate 7.5 mg·kg－1，twice a day for 1，3 and 7 d and grouped as colistin sulphate 1，3 and 7 d group，respectively.The mice of 7 d post colistin sulphate group were given colistin sulphate 7.5 mg·kg－1for 7 d and withdrawal 7 d.A:normal group;B，C，D and E:colistin sulphate 1，3，7 d and 7 d post colistin sulphate groups，respectively.

2.5.2 TI和MI

與正常對(duì)照組相比，給藥1，3，7 d及藥后7 d組小鼠TI參數(shù)呈逐漸增加趨勢(shì)，并且只有給藥7 d組為明顯增加，分別增加了60%，60%，192%(P＜0.01)和70%，MI分別增加了4%，13%，100%(P＜0.05)和29%(表1)。

2.5.3 CAPA，CAPL，CAPD和NCV

與正常對(duì)照組相比，給藥1，3，7 d及藥后7 d組，CAPA分別下降了0.9%，16.2%，47.6%(P＜0.01)和38.8%(P＜0.05)(圖2);CAPL分別增加了9.0%，9.0%，14.6%(P＜0.05)和11.2%;CAPD分別增加了15.1%，11.5%，52.8%(P＜0.05)和20.6%;NCV分別降低了7.6%，7.5%，12.7%(P＜0.05)和9.3%(表1，圖2)。

2.6 黏菌素對(duì)小鼠血清Cre和BUN濃度的影響

如表2所示，給藥1，3，7 d組和藥后7 d組，小鼠血清Cre均較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.05);BUN從給藥3 d開始明顯升高(P＜0.01)，藥后7 d組略高于正常對(duì)照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

Tab.1 Effect of intravenous colistin sulphate on mouse sciatic-tibial nerve electrophysiological indexes

Tab.2 Effect of colistin sulphate on creatinine(Cre)and blood urea nitrogen(BUN)of mice

3 討論

本實(shí)驗(yàn)在臨床等效推薦劑量范圍內(nèi)，對(duì)小鼠尾靜脈注射黏菌素，在給藥1 d，3 d，7 d及停藥后7 d后，對(duì)小鼠腎功能及神經(jīng)電生理、行為學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。小鼠初次給藥后表現(xiàn)出一定的急性毒性癥狀，與Xiao等［9］研究結(jié)果相似。小鼠步態(tài)評(píng)分趨勢(shì)、呼吸癥狀隨著給藥天數(shù)的增加而逐漸加重，在給藥7 d后較對(duì)照組差異顯著，可能與黏菌素在小鼠體內(nèi)的劑量累積及時(shí)間依賴性相關(guān)［4］。黏菌素在給藥3 d后發(fā)生明顯的腎毒性，并致使小鼠體質(zhì)量下降，并且可導(dǎo)致小鼠體內(nèi)的代謝障礙，在隨后4 d的給藥中，使得黏菌素在體內(nèi)進(jìn)一步的累積，致使在給藥7 d后，電生理參數(shù)及行為學(xué)出現(xiàn)異常變化［4，12，15－17］。停藥7 d后，小鼠毒性癥狀有所緩和，行為學(xué)指標(biāo)較對(duì)照組均無明顯變化，血清Cre及BUN變化也有所恢復(fù)，神經(jīng)電生理參數(shù)除CAPA與對(duì)照組相比差異顯著，其他參數(shù)與對(duì)照組相比均無顯著變化，可能與神經(jīng)組織的自我修復(fù)相關(guān)［4，9］，與Wahby等［10］報(bào)道相似，即黏菌素發(fā)生神經(jīng)中毒后停藥5 d對(duì)患者進(jìn)行神經(jīng)電生理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，患者肌肉CAPA顯著降低，而尺神經(jīng)CAPA也有所降低。

研究表明［18］，周圍神經(jīng)系統(tǒng)不像中樞神經(jīng)系統(tǒng)那樣有著血腦屏障的保護(hù)，因而更易產(chǎn)生毒性反應(yīng)。Bosso等［19］研究發(fā)現(xiàn)，靜脈注射黏菌素每天5.8～8 mg·kg－1后，29%的患者發(fā)生感覺異常、共濟(jì)失調(diào)。本研究結(jié)果表明，坐骨-脛神經(jīng)動(dòng)作電位各個(gè)參數(shù)隨時(shí)間延長(zhǎng)發(fā)生進(jìn)行性變化。NCV的減慢和CAPL的延長(zhǎng)可能與神經(jīng)脫髓鞘相關(guān)，CAPA可反映刺激觸發(fā)軸突的數(shù)量或神經(jīng)纖維的密度，而低CAPA的存在提示了周圍神經(jīng)軸突的損害或喪失，TI及MI的增大也能在一定程度上反映出神經(jīng)纖維的損傷［20］。在小鼠給藥7 d后，CAPA及MI變化程度最為明顯，說明黏菌素可能對(duì)軸突及小纖維的損傷較為嚴(yán)重。一般認(rèn)為，黏菌素誘發(fā)神經(jīng)毒性，可能與脂質(zhì)A基團(tuán)模式結(jié)構(gòu)，并攜帶游離陽離子氨基酸，可與高脂質(zhì)含量神經(jīng)元相互作用［8］。神經(jīng)髓鞘的膜性結(jié)構(gòu)含有大量的不飽和脂肪酸，黏菌素可能與其相會(huì)作用，致使脂質(zhì)過氧化損傷，使髓鞘不完整或缺失、軸突直徑發(fā)生變化，從而導(dǎo)致膜電容和阻抗改變，并使NCV減慢或CAPA降低;或者影響Na+，K+離子通道，致使電生理參數(shù)的變化［21］。此外，在小鼠給藥1 d后，部分小鼠出現(xiàn)重復(fù)性動(dòng)作電位，可能與臨床多發(fā)性神經(jīng)炎相關(guān)，但在隨后的神經(jīng)電生理未見此類現(xiàn)象，有待進(jìn)一步的證實(shí)。

本研究表明，黏菌素誘發(fā)腎毒性先于神經(jīng)毒性，對(duì)周圍神經(jīng)造成一定的損傷，坐骨-脛神經(jīng)電生理發(fā)生時(shí)效性變化，可為黏菌素的神經(jīng)毒性的機(jī)制研究提供一定的依據(jù)。

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Electrophysiological changes for toxic effect of colistin sulphate on sciatic-tibial nerves in mice

DAI Chong-shan1，LI Ji-chang1，LIN Wei1，WANG Feng-xia1，SUN Mei-cheng1，LI Jian2
(1.College of Veterinary Medicine，Northeast Agricultural University，Harbin150030，China;2.Facility for Anti-infective Drug Development and Innovation，Monash Institute of Pharmaceutical Sciences Monash University，Victoria3052，Australia)

OBJECTIVETo investigate the toxic actions of colistin sulphate on sciatic-tibial nerves of mice.METHODSColistin sulphate 7.5 mg·kg－1was iv administered to Kunming female mice，twice a day.The mice were divided into colistin sulphate 1，3，7 d and 7 d post colistin sulphate groups according the adminstration for 1，3 and 7 d，respectively.The body mass and gait observations were obtained first，followed by determinations of foot splay and the threshold intensity(TI)，maximal intensity(MI)，compound action potential duration(CAPD)，latency of compound action potential(CAPL)，compound action potential amplitude(peak to peak)(CAPA)，and nerve conduction velocity(NCV)of sciatic-tibial nerve.Serum creatinine(Cre)and urea nitrogen(BUN)concentrations were determined before the first dose on 2nd day(d 2)，d 4，d 8 and d 15(the day of the first dose as the first day).RESULTSCompared with normal control group，after colistin sulphate was given for 1 d，Cre showed significant difference(P＜0.05);and for 3 d，BUN and body mass showed significant difference，respectively(P＜0.05);after colistin sulphate was given for 7 d，the gait and the foot splay showed significant difference(both P＜0.05).Compared with normal control group，after colistin sulphate was given for 1，3 and 7 d，TI increased by 60%，60%and 192%(P＜0.01)，respectively;MI increased by 4%，13%and 100%(P＜0.05)，respectively;CAPD increased by 15.1%，11.5%and 52.8%(P＜0.05)，respectively;CAPL prolonged by 9.0%，9.0%and 14.6%(P＜0.05)，respectively;CAPA decreased 0.92%，16.2%and 47.6%(P＜0.01)，respectively;and NCV decreased by 7.6%，7.5%and 12.7%(P＜0.05)，respectively.After 7 d of stopping administration，the gait and the foot splay had no significant differences，and all electrophysiology indexes showed a recovery tendency and only CAPA was significantly different(P＜0.05).CONCLUTIONNephrotoxicity is earlier than neurotoxicity on mice treated with colistin sulphate，at the same time，the progressive changes in CAP characteristics of the sciatic-tibial nerves are dependent with the time of colistin sulphate administration and abnormal CAPA has the longest duration time.

colistin sulphate;sciatic-tibial nerve;neurotoxicity

The project supported by National Natural Science Foundation of China(31272613);Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars by Heilongjiang Province(LC201018);Ministry of Education of China(41);Returned Overseas Project by Technological Innovation of Special Funds in Harbin City(2012RFLXN005);and Science and Technology Project of Heilongjiang Provincial Bureau of Education(12521043)

LI Ji-chang，E-mail:Lijichang828@sina.com，Tel:13613660929

R978.1

A

1000-3002(2012)06-0847-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2012.06.012

國家自然科學(xué)基金(31272613);黑龍江省留學(xué)歸國科學(xué)基金(LC201018);教育部留學(xué)回國人員科研啟動(dòng)基金(41);哈爾濱市科技創(chuàng)新人才研究專項(xiàng)資金留學(xué)回國人員項(xiàng)目(2012RFLXN005);黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目(12521043)

代重山(1987－)，男，碩士研究生，主要從事藥理與毒理學(xué)研究;李繼昌(1967－)，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事藥理與毒理學(xué)研究。

李繼昌，E-mail:Lijichang828@sina.com，Tel:13613660929

2011-12-20接受日期:2012-07-24)

(本文編輯:喬虹)