p16和p53蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及與HPV16/18感染的關(guān)系

胡靜姿 王文慧 張寶燕

(1.空軍杭州航空醫(yī)學(xué)鑒定訓(xùn)練中心,浙江 杭州 310013;2.中國人民解放軍第117醫(yī)院,浙江 杭州 310013)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是婦科最常見的疾病之一,宮頸上皮從正常狀態(tài)經(jīng)由一系列演變過程最終發(fā)展為癌,期間可發(fā)生很多分子病理事件。p16是一重要的抑癌基因,直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控,p53是細(xì)胞生長分化的關(guān)鍵抑癌基因,已發(fā)現(xiàn)與一半以上人類癌癥相關(guān)。而臨床上不同級(jí)別的CIN處理方式不同,如何更準(zhǔn)確地判定CIN分級(jí)也是病理醫(yī)師經(jīng)常面臨的問題。本文擬通過免疫組化法觀察p16和p53蛋白在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá),以及與HPV16/18感染的關(guān)系,探討其在CIN演變過程中的作用和在CIN分級(jí)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 所有標(biāo)本取自于中國人民解放軍117醫(yī)院2010年1～12月宮頸LEEP刀手術(shù)切除標(biāo)本,共96例,其中CIN Ⅰ級(jí)12例,CIN Ⅱ級(jí)48例,CINⅢ級(jí)36例。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋,切成4μm厚度切片。同時(shí),統(tǒng)計(jì)患者HPV16/18-DNA感染情況。

1.2 試劑 單克隆鼠抗體p16和p53均選用maixin的超敏試劑盒,由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。HPV分型檢測試劑盒由亞能生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 方法 免疫組化染色采用鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化酶(S-P)法,HPV分型檢測采用基因芯片技術(shù)。免疫組化結(jié)果判定:結(jié)構(gòu)清晰,著色明顯高于背景,在相應(yīng)部位出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞,不著色或顯色強(qiáng)度與背景無差別者為陰性細(xì)胞。每例切片隨機(jī)選擇5～10個(gè)HPF,取其平均值。用已知陽性對(duì)照片為陽性對(duì)照,磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性表達(dá)(-),≥10%為陽性表達(dá),其中≤25%(+)、25%～50%(++)、＞50%(+++)。HPV分型檢測按試劑盒說明操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 p16和p53蛋白在CIN組織中的表達(dá) 結(jié)果顯示p16陽性顆粒主要出現(xiàn)在細(xì)胞漿,p53陽性顆粒主要出現(xiàn)在細(xì)胞核。瘤變旁正常鱗狀上皮p16、p53蛋白表達(dá)均為陰性或弱陽性,而在CIN中兩者均有較高表達(dá),且陽性率隨CIN級(jí)別升高而升高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表1。

2.2 p16和p53蛋白的表達(dá)與HPV16/18感染的關(guān)系 p16表達(dá)在HPV16/18陽性組中的陽性率高于HPV16/18陰性組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表2,而HPV16/18陽性組p53蛋白表達(dá)與HPV16/18陰性組相比,兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 不同級(jí)別CIN中p16和p53的表達(dá)

表2 p16和p53表達(dá)與HPV16/18感染的關(guān)系

3 討 論

p16是近年來發(fā)現(xiàn)第一個(gè)直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因,在絕大多數(shù)人類原發(fā)惡性腫瘤中存在較高頻率的p16基因及其產(chǎn)物的缺失[1-2]。本文結(jié)果顯示p16蛋白在正常宮頸上皮中較少表達(dá),但在CIN中高表達(dá),且隨CIN級(jí)別升高表達(dá)增強(qiáng),提示p16蛋白可能參與了CIN的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步研究還發(fā)現(xiàn)p16在HPV16/18型陽性組中的陽性率高于陰性組,提示高危型HPV感染可能導(dǎo)致p16的異常表達(dá)。有研究表明機(jī)制可能為高危型HPV所含有的E6、E7基因整合入宿主的基因組內(nèi),進(jìn)而分別使p53、Rb蛋白的功能失調(diào),使宮頸上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期發(fā)生紊亂,Rb通路失控,引起原本正常的p16蛋白反饋性高表達(dá)[3]。

p53是細(xì)胞生長分化的關(guān)鍵抑癌基因,已發(fā)現(xiàn)與一半以上人類癌癥相關(guān),分為野生型和突變型。野生型p53具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及凋亡雙重作用,一般免疫組化方法檢測出的p53蛋白均顯示為突變型[4]。本文結(jié)果顯示在病變宮頸組織中p53蛋白的表達(dá)明顯高于正常宮頸組織(P＜0.05),說明p53蛋白的高表達(dá)可能引起細(xì)胞失去對(duì)細(xì)胞增殖的抑制,是導(dǎo)致CIN發(fā)生的因素之一。至于p53蛋白的表達(dá)與HPV16/18感染的關(guān)系,目前尚無定論。有研究顯示高危型HPV(+)宮頸組織中p53蛋白表達(dá)減弱,推測機(jī)制可能為高危型HPV感染宮頸組織后,引起其E6癌基因蛋白表達(dá),并且在E6相關(guān)蛋白以及泛素化途徑相關(guān)酶蛋白E1、E2的參與下,誘導(dǎo)p53蛋白泛素化,再經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)的26S蛋白酶復(fù)合體作用,促使p53蛋白降解[5-6]。但陳利友等[7]研究結(jié)果顯示p53蛋白的表達(dá)與HPV16/18感染無關(guān)。本組研究結(jié)果與之相似,對(duì)此作者分析認(rèn)為p53蛋白的異常表達(dá)可能參與了CIN的發(fā)生,但不占主導(dǎo)地位,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展、檢測手段的改進(jìn)和人們健康意識(shí)的增強(qiáng),晚期宮頸癌的患病率已明顯下降,但早期宮頸癌和CIN的檢出率明顯上升,并呈年輕化趨勢。通過長期觀察隨訪表明[8],不同級(jí)別CIN的自然消退率不同,其中CIN I為 57%,CIN II為43%,CIN III為32%,所以臨床上不同級(jí)別的CIN處理方式不盡相同,如何更準(zhǔn)確地判定CIN分級(jí)是病理醫(yī)師經(jīng)常面臨的問題。本組結(jié)果顯示,p16和p53在CIN中均有較高表達(dá),且隨CIN級(jí)別升高而增強(qiáng),其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這與Klaes等[9]研究結(jié)果相似,提示p16和p53是CIN具有敏感性和特異性的腫瘤標(biāo)記物,可作為CIN分級(jí)的輔助診斷方法,具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

[1] 趙剛,周梅,趙峰,等.P16蛋白在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及臨床意義.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,33(2):166

[2] 黃海萍,葉學(xué)正,周琦,等.p53、p16在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及意義探討.腫瘤預(yù)防與治療,2008,21(2):136

[3] Tosun G,Sendag F,Zeybek B,et al.Immunohistochemical expressions of p16 and p53 proteins in cervical intraepithelial neoplasia and in benign cervical tissue.Eur JGynaecol Oncol,2010,31(6):627

[4] 馬宵.胃癌基礎(chǔ)與臨床.西安:西安交通大學(xué)出版社,1999:150

[5] Gao P,Zheng J.High-risk HPV E5-induced cell fusion:a critical initiating event in the early stage of HPV-associated cervical cancer.Virol J,2010,7:238

[6] Sun L,Zhang G,Li Z,et al.Cellular distribution of tumour suppressor protein p53 and high-risk human papillomavirus(HPV)-18 E6 fusion protein in wild-type p53 cell lines.JInt Med Res,2008,36(5):1015

[7] 陳利友,石一復(fù),周彩云,等.CIN和子宮頸鱗癌的HPV16/18感染與 p53、MDM2蛋白表達(dá)的關(guān)系.實(shí)用腫瘤雜志,2005,20(6):500

[8] Kurman RJ.Blaustein's pathology of the female genital tract.5th.New York:Springer-Verlag,2005:285

[9] Klaes R,Benner A,Friedrich T,et al.p16 INK4a immunohistochemistry improves interobserver agreement in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia.Am J Surg Pathol,2002,26(11):1389