高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定調(diào)味料中的8種合成著色劑

朱虹，佘曉麒，黃讓明

（廣東省汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東汕頭 515041）

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定調(diào)味料中的8種合成著色劑

朱虹，佘曉麒，黃讓明

（廣東省汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東汕頭 515041）

建立一種同時(shí)測(cè)定調(diào)味料中8種合成著色劑的高效液相色譜分析方法。樣品經(jīng)30%甲醇水溶液提取，采用Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6 mm），以甲醇-1.55 g／L乙酸銨為流動(dòng)相，在最佳梯度洗脫條件下對(duì)8種合成著色劑進(jìn)行分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。8種合成著色劑的線性范圍為0.5～10.0 μg／mL，回收率為95.0%～101%。對(duì)樣品進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定，峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.84%～3.51%(n=6)。

調(diào)味料；合成著色劑；高效液相色譜法

食品著色劑(食用色素)是以給食品著色為主要目的的添加劑。食用色素使食品具有悅目的色澤，對(duì)增加食品的嗜好性及刺激食欲有重要作用。著色劑按來(lái)源可分為人工合成著色劑和天然著色劑［1］。食用天然著色劑主要是指由動(dòng)、植物組織中提取的色素，包括微生物色素、動(dòng)物色素及無(wú)機(jī)色素。常用的天然著色劑有辣椒紅、甜菜紅、姜黃、梔子黃、胡蘿卜素、可可色素、焦糖色素等。天然著色劑色彩易受金屬離子、水質(zhì)、pH值、氧化、光照、溫度的影響，一般較難分散，染著性、著色劑間的相溶性較差，且價(jià)格較高。合成著色劑的原料主要是化工產(chǎn)品。我國(guó)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB 2760-2011）列入的合成色素有胭脂紅、莧菜紅、日落黃、赤蘚紅、檸檬黃、新紅、靛藍(lán)、亮藍(lán)等。與天然色素相比，合成色素顏色更加鮮艷，不易褪色，且價(jià)格較低。除了食用色素外，目前市面上還發(fā)現(xiàn)某些食品非法添加如酸性橙Ⅱ等非食用的著色劑，這些著色劑作為工業(yè)用途的化工產(chǎn)品，屬于食品中的禁用添加物質(zhì)。超劑量攝入合成著色劑，會(huì)對(duì)人體造成不同程度的危害。調(diào)味料用以食物調(diào)味，與日常生活息息相關(guān)，為使其色澤鮮亮誘人，常添加著色劑，如番茄醬通常添加日落黃和赤蘚紅為著色劑。調(diào)味料是餐桌上不可或缺的一類(lèi)產(chǎn)品，對(duì)其著色劑進(jìn)行監(jiān)控，對(duì)保障人民身體健康有著重要意義。

目前測(cè)定合成著色劑常見(jiàn)的方法包括高效液相色譜法、薄層色譜法、示波極譜法［1］和毛細(xì)管電泳法［2］等。為了滿(mǎn)足日常檢驗(yàn)的需要，筆者通過(guò)對(duì)樣品前處理和色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了一種測(cè)定調(diào)味品中檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、酸性橙Ⅱ等8種常見(jiàn)合成著色劑的高效液相色譜法，該方法操作簡(jiǎn)便、高效。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1200型，配有二極管陣列檢測(cè)器DAD，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

無(wú)機(jī)濾膜(聚醚砜)和有機(jī)濾膜（尼龍）：13 mm×0.45 μm，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

甲醇：色譜純；

檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度均為1.00 mg／mL，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；

赤蘚紅、酸性橙Ⅱ：德國(guó)Dr公司；

乙酸銨溶液：1.55 g／L；

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱(chēng)取100 mg赤蘚紅、酸性橙Ⅱ，用甲醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中，配制成1.0 mg／mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；

實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為乙酸銨溶液，洗脫條件見(jiàn)表1；流速：1.0 mL／min；后運(yùn)行：15 min；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254，610 nm ；進(jìn)樣量：10 μL。

表1 HPLC梯度洗脫條件

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用純水將各標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成濃度為50 μg／mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用純水稀釋成濃度為0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μg／mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，臨用前配制。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

將固態(tài)樣品粉碎，將半固態(tài)、液態(tài)樣品混勻。準(zhǔn)確稱(chēng)取5 g樣品（精確至0.001 g）于50 mL比色管中，用30%甲醇水溶液定容至50 mL，旋渦1 min，60℃水浴 15 min，冷卻，以 12 000 r／min 離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后，在1.2色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。采用保留時(shí)間識(shí)別各目標(biāo)組分，以外標(biāo)法確定相應(yīng)組分的濃度。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理?xiàng)l件的選擇

（1）提取溶劑

由于各種著色劑在水溶液及甲醇溶液中的溶解性能各不相同，分別用水、5%氨化甲醇、甲醇、30%甲醇溶液作為提取溶劑對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行前處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用水直接提取，樣品溶液混濁，過(guò)濾膜凈化較為困難，且回收率低；用5%氨化甲醇提取，操作繁瑣，且回收率低；用甲醇提取，回收率理想，但有機(jī)溶劑用量較大，不利于環(huán)保和節(jié)約成本；用30%甲醇水溶液提取，能達(dá)到較好的提取效果，且步驟簡(jiǎn)便，成本低。故選擇30%甲醇水溶液作為提取溶劑。

（2）提取方法

分別采用60℃水浴加熱和超聲萃取兩種方法對(duì)樣品進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在相同的提取時(shí)間下，60℃水浴加熱的提取效果比超聲萃取效果好，且在15 min時(shí)，提取濃度趨于穩(wěn)定。故選擇60℃水浴加熱15 min對(duì)樣品進(jìn)行提取。

2.2 色譜條件選擇

為保證各組分快速、有效地分離，采用梯度洗脫的方法，梯度洗脫條件見(jiàn)1.2。分別取各組分濃度為0.05 mg／mL的溶液，在200～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果顯示，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性橙Ⅱ、赤蘚紅分別在429，523，509，483，505，628，479，531 nm 處有強(qiáng)吸收，且檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性橙Ⅱ、赤蘚紅在254 nm處均有較強(qiáng)吸收。故采用多通道檢測(cè)，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性橙Ⅱ、赤蘚紅在254 nm處檢測(cè)，亮藍(lán)在610 nm處檢測(cè)。

2.3 色譜圖

在1.2設(shè)定的色譜條件下對(duì)8種著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行分析，得到了較好的分離效果，結(jié)果見(jiàn)圖1，其中圖1a和圖1b分別為254，610 nm處檢測(cè)所得色譜圖。

圖1 8種著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

2.4 線性方程和定量限

對(duì)1.3中系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以組分的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y），組分的含量為橫坐標(biāo)（x，μg／mL）進(jìn)行線性回歸，線性范圍為 0.5～10.0 μg／mL，按10S／N［4］計(jì)算各組分的定量限，回歸方程、定量限見(jiàn)表2。

表2 各組分線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及定量限

2.5 方法精密度和回收率

以具代表性的辣椒醬作為本底，在空白樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)樣品，按照1.4實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行預(yù)處理，在1.2設(shè)定的色譜條件下，做回收率和精密度試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，8種合成著色劑的加標(biāo)回收率在95.0%～101.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于4%，由此可見(jiàn)，該法測(cè)量結(jié)果可靠，重現(xiàn)性良好，符合檢測(cè)要求。

表3 回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

通過(guò)對(duì)樣品前處理方法和色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定調(diào)味料中檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、酸性橙Ⅱ8種合成著色劑的方法，用30%甲醇水溶液提取樣品，操作簡(jiǎn)便，節(jié)約成本，具有較高實(shí)用價(jià)值。

［1］洪國(guó)濤.怎樣使用食用著色劑［J］.應(yīng)用推廣，2012(1)： 29-30.

［2］GB／T 5009.35-2003 食品中合成著色劑的測(cè)定［S］.

［3］趙欣穎，賈麗，周曉晶，等.毛細(xì)管電泳法同時(shí)測(cè)定糖果中5種人工合成色素的含量［J］.現(xiàn)代儀器，2008(4)： 58-60.

［4］楊祖英，馬永健，常鳳啟.食品檢驗(yàn)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001： 119.

Simultaneous Determination of 8 Synthetic Colours in Condiment by High Performance Liquid Chromatography

Zhu Hong， She Xiaoqi， Huang Rangming
（Guangdong Shantou Institute of Supervision and Test of Quality and Metrology， Shantou 515041， China）

A high performance liquid chromatographic method was developed for the simultaneous determination of 8 synthetic colours in condiment. The sample was extracted with methanol water solution， separated on Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm) column with methanol-1.55 g／L ammonium acetate as mobile phase by gradient elution. The target compounds were confirmed by diode-array detection and quantified by the external standard method. The results showed that the linear range of 8 synthetic colours was 0.5-10.0 μg／mL and recovery was 95.0%-101.0%. The relative standard deviation of six times repeated measurements of the peak area was 0. 84%-3.51%(n=6).

condiment; synthetic colour; high performance liquid chromatography

O657.7

A

1008-6145(2012)04-0047-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2012.04.014

聯(lián)系人：朱虹；E-mail： zsuzhuhong@163.com

2012-03-19