黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌抑菌作用的初步研究*

邵世峰 劉雪萍 孫婉蓉 張麗霞 肖紅俠 張 妍 張 立 吳 琦

黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌抑菌作用的初步研究*

邵世峰 劉雪萍 孫婉蓉 張麗霞 肖紅俠 張 妍 張 立 吳 琦△

目的：通過體外抑菌試驗探討黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌的體外抑菌活性。方法：采用改良羅氏培養(yǎng)基絕對濃度法檢測黃芩苷對37株結(jié)核分枝桿菌的抑菌作用。結(jié)果：黃芩苷對37株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的最低抑菌濃度(MIC)最低為1.5 g/L，最高＞48 g/L，MIC90為12 g/L，MIC75和MIC50均為6 g/L。全敏感菌株在MIC為6 g/L時數(shù)量比例最大，隨著MIC值向兩側(cè)遞減；異煙肼(INH)低耐菌株的數(shù)量與MIC值無明顯關(guān)聯(lián)，乙胺丁醇(EMB)低耐菌株數(shù)量隨著MIC由低到高的變化而顯著增多；利福平(RFP)低耐菌株數(shù)量隨著MIC由低到高的變化而逐步減少。結(jié)論：黃芩苷在體外對結(jié)核分枝桿菌具有一定的抑菌作用。

分枝桿菌,結(jié)核 微生物敏感性試驗 異煙肼 乙胺丁醇 利福平 體外研究 黃芩苷

結(jié)核是一種慢性傳染病，我國是結(jié)核病高負擔(dān)國家之一，位居全球第二。目前治療結(jié)核病的新藥較少，臨床仍采用多種抗結(jié)核藥物聯(lián)合的化療方案。藥物不良反應(yīng)大，影響患者的依從性。中藥黃芩的提取物黃芩苷具有保護肝臟、抗菌消炎、抗病毒等作用。本文旨在研究黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌的抑菌作用，了解其治療結(jié)核病的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料 黃芩苷（C21H18O11），純度90.5%，購自山東省諸城市浩天藥業(yè)有限公司；37株結(jié)核分枝桿菌為天津海河醫(yī)院2009年1月—2010年1月結(jié)核患者標本培養(yǎng)所得菌株，經(jīng)鑒定為人型結(jié)核分枝桿菌；質(zhì)控菌為結(jié)核分枝桿菌標準菌株H37RV，購自中國藥品生物制品檢定所。其中對異煙肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）均敏感的19株，對INH低濃度耐藥（1 mg/L）的8株，對RFP低濃度耐藥（50 mg/L）的6株，對EMB低濃度耐藥（5 mg/L）的5株。其中同時耐INH和EMB的1株。

1.2 方法 按照參考文獻[1]中改良羅氏培養(yǎng)基的制作方法，配制濃度梯度為48、24、12、6、3、1.5、0.75及0.375 g/L的含黃芩苷培養(yǎng)基，將結(jié)核分枝桿菌菌懸液接種于不同濃度的含藥培養(yǎng)基，37℃溫箱孵育4周，觀察菌落生長情況。

1.3 觀察指標 以絕對濃度法判斷結(jié)果。以培養(yǎng)皿無菌落生長的最低藥物濃度為黃芩苷對該菌株的最低抑菌濃度（MIC）。計算藥物對90%菌株的MIC（MIC90）、MIC75和MIC50。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 利用SPSS16.0軟件進行分析。對不同耐藥類型菌在不同MIC值的數(shù)量分布采用三次方曲線擬合模型分析。

2 結(jié)果

2.1 各菌株的抑菌濃度實驗結(jié)果 黃芩苷對37株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的MIC90為12 g/L，MIC75和MIC50均為6 g/L。最低MIC為1.5 g/L，最高>48 g/L。37株結(jié)核分枝桿菌的黃芩苷抑菌實驗顯示，48、24、12、6、3、1.5、0.75及0.375 g/L MIC的菌株數(shù)（%）分別為1（2.7）、0、6（16.22）、15（40.54）、11（29.73）、4（10.81）、0及0株。

2.2 曲線擬合情況 全敏感菌株在MIC為6 g/L時數(shù)量比例最大，隨著MIC值向兩側(cè)遞減，見圖1A；INH低耐菌株組與MIC變化并明顯著關(guān)聯(lián)，見圖1B；EMB低耐菌株數(shù)量隨著MIC由低到高的變化而顯著增多，見圖1C；RFP低耐菌株數(shù)量隨著MIC由低到高的變化而逐步減少，見圖1D。37株結(jié)核分枝桿菌的黃芩苷抑菌實驗結(jié)果及不同耐藥類型菌的MIC分布和比例，見表1。

Figure 1 Fitting curve of MIC number distribution圖1 各菌株在不同MIC值的數(shù)量分布擬合曲線

Table 1 MIC distribution of drug sensitive and drug resistance of mycobacterium tuberculosis strain表1 全敏感及各耐藥組不同MIC值的數(shù)量分布 株（%）

3 討論

結(jié)核病是全球第二大僅因單個感染因素而導(dǎo)致死亡的疾病，已經(jīng)成為威脅公共衛(wèi)生的一項長期挑戰(zhàn)。隨著抗結(jié)核藥的廣泛使用，結(jié)核菌的耐藥現(xiàn)象越來越嚴重，耐多藥結(jié)核、廣泛耐藥結(jié)核給結(jié)核病的治療帶來了困難。我國第四次結(jié)核病流行發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌總耐藥率為27.8%，耐多藥率為10.7%[2]。硝基咪唑類化合物PA-824[3]、二芳基喹啉類化合物TMC207（R207910）[4]、吡咯類化合物BM212[5]等均有較好的抑制結(jié)核分枝桿菌的作用，但目前大多處于實驗研究階段，尚未能應(yīng)用于臨床。傳統(tǒng)的植物藥具有天然易獲取，不良反應(yīng)少等優(yōu)點，但這些植物提取物體對結(jié)核分枝桿菌的MIC差異較大，如一種杧果姜提取物對結(jié)核分枝桿菌的MIC為500 g/L[6]，3種細齒水蛇麻提取物對結(jié)核分枝桿菌的MIC分別為42、18及30 g/L[7]，瓊楠提取物對結(jié)核分枝桿菌的MIC50為28.9 g/L[8]，3種屏東花椒提取物對結(jié)核分枝桿菌的MIC分別為52.4、55.6和45.8 mg/L[9]。

研究已證實黃芩苷對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌以及葡萄球菌具有抑制作用[10]。本研究顯示，黃芩苷對37株臨床結(jié)核分枝桿菌均有抑制作用，最低MIC為1.5 g/L，最高>48 g/L。該結(jié)果與文獻[11]報道的黃芩苷對臨床常見病原菌的MIC范圍為0.1~50 g/L結(jié)果相近。擬合曲線關(guān)聯(lián)性研究顯示，INH低耐菌株的數(shù)量與MIC值無明顯關(guān)聯(lián)，而大多EMB低耐的菌株則需要較高濃度的黃芩苷才可抑制其生長，表明EMB的臨床抗性株對于黃芩苷也存在一定程度的抵抗作用，2種藥物的作用位點可能相同，或機制存在相似之處。RFP低耐菌株大多可以被較低濃度的黃芩苷抑制，表明RFP的臨床耐藥菌株對于黃芩苷較敏感，2種藥物的作用機制可能互不影響，也提示耐RFP的菌株可能較耐EMB的菌株對黃芩苷更敏感。

綜上所述，黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌具有一定的抑菌作用。其抗結(jié)核菌作用雖然不如化合物強，但如能與現(xiàn)有抗結(jié)核化療藥物聯(lián)合使用，將發(fā)揮其不良反應(yīng)小、并兼有保肝作用的優(yōu)勢。但本研究結(jié)論尚需更大樣本和增加抗結(jié)核化療藥聯(lián)合抑菌實驗的研究加以證實。

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Study of Antituberculosis of Baicalin on Mycobacterium Tuberculosis

SHAO Shifeng,LIU Xueping,SUN Wanrong,ZHANG Lixia,XIAO Hongxia,ZHANG Yan，ZHANG Li,WU Qi

Tianjin Haihe Hospital,Tianjin Respiratory Disease Research Institute,Tianjin 300350,China

Objective:To analyze the antituberculosis of baicalin on mycobacterium tuberculosis by antimicrobial sus?ceptibility testing in vitro.Methods:The bacteriostatic action of baicalin on mycobacterium tuberculosis was detected by ab?solute consistence method of Lowenstein-Jensen.Results:The minimum inhibitory concentration(MIC)of baicalin on 37 strains of mycobacterium tuberculosis was 1.5 g/L,and the maximum inhibitory concentration was＞48 g/L.MIC90 was 12 g/L.MIC75 and MIC50 were 6 g/L.The number of drug sensitive mycobacterium tuberculosis was most in 6 g/L MIC,and de?creased progressively with MIC value changed to both sides of the descending.There was not relevance between the strain number of mild drug resistance to mycobacterium tuberculosis and the MIC value.The number of ethambutal(EMB)mild re?sistance strain was increased progressively with MIC value changed from low to high.The number of rifampicin(RFP)mild re?sistance strain was decreased progressively with MIC changed from low to high.Conclusion:There is antituberculosis of ba?icalin on mycobacterium tuberculosis in vitra.

mycobacterium tuberculosis microbial sensitivity tests isoniazid ethambutol rifampin in vitro BAICALIN

10.3969/j.issn.0253-9896.2012.08.004

*天津市衛(wèi)生局科技攻關(guān)課題(項目編號：10KG217)

300350 天津市海河醫(yī)院、天津市呼吸疾病研究所（邵世峰，張麗霞，肖紅俠，張妍，張立，吳琦）；天津醫(yī)科大學(xué)(劉雪萍)；天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院（孫婉蓉）

△通訊作者 E-mail:wqw572004@yahoo.com.cn

（2012-01-17收稿 2012-03-01修回）

（本文編輯 陸榮展）