補(bǔ)肺通竅鼻噴劑對(duì)照曲安奈德鼻噴劑對(duì)變態(tài)反應(yīng)性鼻炎豚鼠模型過敏反應(yīng)行為學(xué)和紅細(xì)胞免疫功能的影響

田理 曾碇云

變應(yīng)性鼻炎(AR)屬IgE介導(dǎo)T細(xì)胞依賴、肥大細(xì)胞啟動(dòng)并以嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的呼吸道型變態(tài)反應(yīng)，其中嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子參與了這一復(fù)雜的反應(yīng)過程[1]。另一方面,從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度考慮，紅細(xì)胞免疫功能的紊亂或低下是多種免疫相關(guān)疾病發(fā)病的基礎(chǔ)。紅細(xì)胞免疫對(duì)淋巴細(xì)胞有免疫調(diào)控作用，對(duì)變應(yīng)性鼻炎中作用不容忽視[7]。同時(shí)大量臨床報(bào)道中醫(yī)藥治療變應(yīng)性鼻炎是一種有效治療方式，近年發(fā)現(xiàn)并證明了玉屏風(fēng)散在免疫系統(tǒng)中有廣泛的影響，而且對(duì)紅細(xì)胞免疫功能及神經(jīng)免疫也有增強(qiáng)及調(diào)整作用[7]。本研究從過敏反應(yīng)行為學(xué)和紅細(xì)胞免疫學(xué)角度觀察以加味玉屏風(fēng)散方劑基礎(chǔ)內(nèi)容的補(bǔ)肺通竅鼻噴劑對(duì)豚鼠變應(yīng)性鼻炎模型的影響，期望能為補(bǔ)肺通竅鼻噴劑臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康豚鼠70只，2月齡～3月齡，體重：248g～455g，雌36只雄34只，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供。成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度為24℃～29 ℃。

1.2藥品試劑

①補(bǔ)肺通竅鼻噴劑：由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供。主要含黃芪、防風(fēng)、白術(shù)和辛夷等藥物，藥液生藥含量約30%，分高中低3種濃度劑型。②曲安奈德鼻噴劑：昆明源瑞制藥有限公司生產(chǎn)。每1ml含曲安奈德1.1mg。生產(chǎn)批號(hào)：20050920 試劑：①2，4-甲苯二異氰酸酯(TDI)：成都科龍化學(xué)試劑廠提供，生產(chǎn)批號(hào)：20050703；②橄欖油：上?；瘜W(xué)試劑一廠提供，生產(chǎn)批號(hào)：試一2005-04-01。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1分組和建造動(dòng)物模型: 將70只豚鼠根據(jù)體重進(jìn)行評(píng)分，根據(jù)評(píng)分結(jié)果隨機(jī)分為6組。前5組12只，雌雄各半；第6組為10只，雄4雌6，進(jìn)行變應(yīng)性鼻炎模型造模。按照趙秀杰[2]報(bào)道的方法：將含有10%TDI的橄欖油溶液，用微量移液器滴入豚鼠雙側(cè)前鼻孔 (每側(cè)5ul)，每日一次，連續(xù)5天后改為隔日給藥(維持給藥期)19天，共24天，正常對(duì)照組予以生理鹽水滴鼻(每側(cè)5ul)，每日一次，直至試驗(yàn)結(jié)束。自第一次給藥致敏開始，依據(jù)鼻癢、噴嚏、流涕輕重程度、次數(shù)多少為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)并記錄，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)詳見下表[2]。造模成功判定標(biāo)準(zhǔn)：每只豚鼠鼻炎、噴嚏、流涕三種癥狀以疊加法記總分，總分≥5分者為造模成功，其癥狀觀察時(shí)間為每次予以致敏藥后30分鐘[2]

過敏反應(yīng)行為學(xué)評(píng)分表[2]

1.3.2治療階段研究方法:過敏性鼻炎模型建立后，將各組豚鼠隨機(jī)分組給藥:按補(bǔ)肺通竅鼻噴劑不同濃度劑型分為高劑量組，中劑量組，低劑量組，以及曲安奈德鼻噴劑陽性藥物對(duì)照組，每日3次鼻孔內(nèi)加樣器給補(bǔ)肺通竅鼻噴劑高、中、低濃度，每次每鼻孔5ul;曲安奈德組每日2次給曲安奈德噴劑，每次每鼻孔5ul;模型成功后，模型組橄欖油與10%TDI橄欖油溶液鼻內(nèi)給藥隔日一次交替進(jìn)行維持致敏，每次每鼻孔5ul;正常對(duì)照組僅鼻孔內(nèi)給橄欖油5ul，每日2次，上述各組用藥連續(xù)。

2 觀察指標(biāo)及方法

2.1鼻部癥狀觀察:采用癥狀積分迭加評(píng)分方法(見過敏行為學(xué)評(píng)分表)，比較組間差異。

2.2紅細(xì)胞免疫功能檢測(cè)：豚鼠于末次激發(fā)后30分鐘內(nèi)，放股動(dòng)脈血處死，收集股動(dòng)脈血，制作紅細(xì)胞懸液，用郭峰報(bào)道的紅細(xì)胞酵母菌混合花環(huán)法檢測(cè)[3]。紅細(xì)胞免疫檢測(cè)操作均由成都中醫(yī)藥大學(xué)免疫試驗(yàn)室進(jìn)行。

3 統(tǒng)計(jì)方法

4 結(jié)果

4.1變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型造模結(jié)果：過敏行為學(xué)分析

第一天造模給藥，豚鼠即出現(xiàn)典型的鼻部過敏癥狀：連續(xù)噴嚏、撓鼻不止、鼻涕多數(shù)為涕流滿面，過敏癥狀在給藥后15分鐘內(nèi)癥狀最為明顯，給藥30min后基本消失。維持致敏期頭三次連續(xù)激發(fā)，各組癥狀積分較基礎(chǔ)致敏階段有所下降，但均保持在7分以上，模型癥狀仍比較穩(wěn)定(見表1)。治療前，各治療組和模型組的鼻部癥狀計(jì)分，與正常對(duì)照組比較P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各治療組與模型組比較，P>0.1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明各組造模致敏程度均衡穩(wěn)定。

4.2給予藥物治療后，各治療組療效對(duì)比分析：

4.2.1過敏行為學(xué)

給予藥物治療后，藥物治療組(高中低劑量組)和曲安奈德治療組豚鼠在用藥期間激發(fā)時(shí)癥狀逐漸減輕，治療前后統(tǒng)計(jì)學(xué)比較P<0.05，但其積分大多數(shù)仍高于5分，未恢復(fù)到正常狀態(tài)。在不同組別間，其癥狀輕重和積分值不同(見表2)。

由表2可以看出，補(bǔ)肺通竅高劑量組及曲安奈德治療組的癥狀與模型組比較，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，補(bǔ)肺通竅低劑量組的癥狀與模型組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P< 0.01；撓鼻，高、中倍劑量組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05；噴嚏，各治療組與曲安奈德治療組比較，P>0.1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；涕流量，高、低倍劑量組與中劑量組比較，P<0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 豚鼠給藥前三次激發(fā)鼻部癥狀評(píng)分結(jié)果

注：與正常對(duì)照組相比，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表2 補(bǔ)肺通竅鼻噴劑治療期間各組癥狀得分對(duì)照

注：與正常對(duì)照組相比，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組相比，▲P<0.1，▲▲P<0.05，▲▲▲P<0.01

表3 給藥后各組豚鼠RBC-C3b受體花環(huán)率、RBC-IC花環(huán)率對(duì)比

注：與正常對(duì)照組相比，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

4.2．2RBC-C3b受體花環(huán)率、 RBC-IC花環(huán)率(見表3)

由表3可以看出，由于各組豚鼠RBC-C3b受體花環(huán)率及RBC-IC花環(huán)率均低于30%，其為偏態(tài)分布。模型組與正常對(duì)照組細(xì)胞免疫C3b受體花環(huán)率減少且均低于治療組。與高倍劑量組、曲安奈德治療組比較，P<0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與中、低倍劑量組比較，P>0.1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；曲安奈德治療組與補(bǔ)肺通竅高劑量組比較，P>0.1無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與補(bǔ)肺通竅中、低劑量組比較，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組均高于中、低倍劑量組P<0.01，中、低劑量組之間比較，P>0.1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

對(duì)于紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率：模型組較其他治療組數(shù)值均較低。與高、低劑量組比較，P<0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療各組均低于正常對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。高劑量組、低倍劑量組與曲安奈德治療組比較，P>0.1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與中倍劑量組比較，P<0.01差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5 討論

變應(yīng)性鼻炎(Allergic Rhinitis AR)是特應(yīng)性個(gè)體接觸致敏原后由IgE介導(dǎo)的介質(zhì)(主要是組胺)釋放并有多種免疫活性細(xì)胞和細(xì)胞因子等參與的鼻粘膜慢性炎癥反應(yīng)性疾病，以鼻癢、噴嚏、鼻分泌亢進(jìn)，鼻粘膜腫脹為主要特點(diǎn)，多有遺傳，易反復(fù)發(fā)作，遷延不愈。從中醫(yī)學(xué)角度，本病屬“鼻鼽”范疇。鼻鼽又名鼽涕、鼽鼻、鼽水，公元前就已有相關(guān)的記載，最早見于《五十二病方》。近年來由于空氣污染、飲食結(jié)構(gòu)改變、體質(zhì)改變等使本病的發(fā)病率有日趨增高的趨勢(shì)。據(jù)國(guó)外資料統(tǒng)計(jì)發(fā)病率為10%～40%[4]，大約每20年患病率就增加4倍，初步估計(jì)國(guó)內(nèi)每年約有2000萬人患本病[5]。其具有高流行率；影響患者生活質(zhì)量(如睡眠、工作和學(xué)習(xí)效率等)；增加患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)等特點(diǎn)；與支氣管哮喘、鼻竇炎和變應(yīng)性結(jié)膜炎有關(guān)，是哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一[6]，是目前研究的熱點(diǎn)之一。

傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為鼻通過經(jīng)絡(luò)與五臟六腑緊密聯(lián)系，其中與肺脾膽腎的生理病理的關(guān)系尤為密切，其病因病機(jī)歷代醫(yī)家多有論述。主要總結(jié)為內(nèi)、外因的影響：內(nèi)因多是臟腑功能失調(diào)，外因多為風(fēng)邪侵襲。臟腑功能的失調(diào)主要為肺、脾、腎三臟的虛損。其中肺氣虛弱，衛(wèi)陽不固，邪毒滯留是其基本病機(jī)，其病位在鼻，其本在肺，病性多屬虛屬寒，為本虛標(biāo)實(shí)之證。選用加味玉屏風(fēng)散為基礎(chǔ)制成的補(bǔ)肺通竅鼻噴劑做為治療藥物，益氣固表，扶正祛邪，正可謂切中病機(jī)。

由于變應(yīng)性鼻炎以陣發(fā)性噴嚏，大量清水樣涕或粘涕、鼻癢、鼻塞為主要癥狀。鼻癢和噴嚏是由炎癥介質(zhì)作用于感覺神經(jīng)末梢受體，感覺神經(jīng)敏感性增強(qiáng)引起；同時(shí)受炎癥刺激，副交感神經(jīng)興奮性增高，促進(jìn)腺體分泌，而出現(xiàn)涕流不止的現(xiàn)象。因此，能否減輕鼻部過敏癥狀是判斷變應(yīng)性鼻炎治療藥物療效的主要標(biāo)準(zhǔn)之一。補(bǔ)肺通竅鼻噴劑中黃芪、防風(fēng)、辛夷等藥理作用均有抗炎的功效，可減少炎性遞質(zhì)的直接或間接刺激，從而起到減輕鼻癢、流清涕、打噴嚏癥狀的作用。另一方面,從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度考慮，紅細(xì)胞免疫功能的紊亂或低下是多種免疫相關(guān)疾病發(fā)病的基礎(chǔ)。紅細(xì)胞免疫對(duì)淋巴細(xì)胞有免疫調(diào)控作用，它參與INF- γ，IL-2等的產(chǎn)生，IFN-γ是一種高活性多功能的誘生蛋白質(zhì)，能夠有效抑制T細(xì)胞的增生，并抑制B細(xì)胞合成IgE，從而控制了I型變態(tài)反應(yīng)發(fā)生，改善變應(yīng)性鼻炎患者的病情，因此紅細(xì)胞免疫在變應(yīng)性鼻炎中作用不容忽視。近年發(fā)現(xiàn)并證明了玉屏風(fēng)散在免疫系統(tǒng)中有廣泛的影響，作用肯定。不僅對(duì)體液免疫、單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的增強(qiáng)作用，而且對(duì)紅細(xì)胞免疫功能及神經(jīng)免疫也有增強(qiáng)及調(diào)整作用[7]。

現(xiàn)代藥理研究表明許多中藥藥材具有非特異性免疫調(diào)節(jié)作用，可改善機(jī)體內(nèi)外免疫平衡。同時(shí)根據(jù)“內(nèi)治之理，即外治之理…”，運(yùn)用補(bǔ)肺通竅鼻噴劑治療變應(yīng)性鼻炎符合中醫(yī)學(xué)所說的內(nèi)病外治的原則，以內(nèi)治的機(jī)理改變給藥途徑，利用經(jīng)鼻給藥可操作性強(qiáng)，使用優(yōu)勢(shì)。以此為基礎(chǔ)靈活運(yùn)用中醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)，利用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)、病理學(xué)等基礎(chǔ)研究，臨床局部診療和全身診療相參，進(jìn)行中醫(yī)辨證施治，為中醫(yī)治療的現(xiàn)代化科研提供學(xué)科支持。

本試驗(yàn)結(jié)果表明補(bǔ)肺通竅鼻噴劑可明顯減輕鼻部過敏癥狀，與對(duì)照藥物曲安奈德鼻噴劑療效無明顯差異，尤其低倍劑量組減輕鼻部過敏癥狀療效更明顯。同時(shí)觀察到，模型組紅細(xì)胞免疫功能低下，補(bǔ)肺通竅鼻噴劑高劑量組及曲安奈德治療組紅細(xì)胞免疫功能明顯增強(qiáng)，說明補(bǔ)肺通竅鼻噴劑可增強(qiáng)豚鼠紅細(xì)胞免疫功能，局部用藥的方式也可影響全身的免疫指標(biāo)。

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