自制糖化血紅蛋白質(zhì)控品及其性能評價(jià)

袁學(xué)進(jìn)，李全雙，鄧演超（.江蘇省海安縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科 6600；.江蘇省徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所 006）

目前臨床上測定糖化血紅蛋白（Hb Alc）的方法有很多，其中乳膠增強(qiáng)免疫比濁法可以在全自動(dòng)生化分析儀上簡便、快速操作，準(zhǔn)確性和精密度良好，受干擾因素少，與參考方法高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行結(jié)果比對的相關(guān)性良好，能滿足臨床應(yīng)用，該法已被很多醫(yī)院檢驗(yàn)科使用［1-5］。但是由于不同生產(chǎn)廠家試劑質(zhì)量不一，且開瓶后試劑的穩(wěn)定性不一，因此可靠的檢驗(yàn)結(jié)果必須有嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制作為基礎(chǔ)［6］。然而目前國內(nèi)并未有統(tǒng)一的質(zhì)控品生產(chǎn)銷售，而進(jìn)口的質(zhì)控品價(jià)格昂貴，不利于臨床工作的開展［7］。為了保證檢驗(yàn)質(zhì)量，降低運(yùn)行成本，本實(shí)驗(yàn)室自制溶血液作為Hb Alc室內(nèi)質(zhì)控品，對其性能進(jìn)行評價(jià)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器 試劑盒和定標(biāo)液均購自浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司，生產(chǎn)批號201008004。HbA1c質(zhì)控品購自Roche公司。儀器為HITACHI－7180全自動(dòng)生化分析儀。

1.2 檢測方法 肝素抗凝標(biāo)本1 000 r／min離心，吸取紅細(xì)胞層10μL與溶血液1 000μL按1∶100比例制備待測溶血液。檢測原理是用抗原抗體反應(yīng)直接測定Hb Alc的百分含量。按照試劑盒說明書操作，多點(diǎn)定標(biāo)曲線，由SPLINE處理，以測定管ΔA的變化值求得Hb Alc含量。

1.3 方法

1.3.1 低值、高值兩個(gè)水平溶血液的制備［8］

1.3.1.1 低值溶血液的制備 選 HbA1c在5.0%～6.0%的1份糖尿病患者肝素抗凝全血2 mL，無細(xì)菌污染，乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒陰性，無溶血、黃疸、脂濁，按試劑操作說明書比例制備測定用溶血液50 mL，充分溶解后，用一次性0.5 mL帶蓋塑料離心管分裝，每支約0.30 mL溶血液，標(biāo)注批號為當(dāng)天日期20110103，置－20℃存貯備用。

1.3.1.2 高值溶血液的制備 參照1.3.1.1制備方法，選HbA1c在9.0～10.0的1份糖尿病患者肝素抗凝血2 mL。

1.3.2 溶血液的使用方法 取出低值和高值兩個(gè)水平溶血液各1支放置37℃水浴中，溶解后輕輕搖動(dòng)，然后和當(dāng)天標(biāo)本一起檢測，用后丟棄。

1.3.3 性能評價(jià)方法 測試均是在儀器維護(hù)保養(yǎng)后，質(zhì)控品質(zhì)控良好情況下測定HbA1c。

1.3.3.1 不精密度測定 批內(nèi)不精密度測定：在1 d內(nèi)，對兩個(gè)水平的溶血液連續(xù)測定20次，分別計(jì)算平均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（CV）。批內(nèi)天間不精密度測定：對兩水平的溶血液每天各測定1次，連續(xù)測定20 d，分別計(jì)算、s、CV。

1.3.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 每個(gè)工作日測定溶血液1次，連續(xù)測定3個(gè)月，分別統(tǒng)計(jì)每個(gè)月的、s。

1.3.3.3 瓶間差異處理 隨機(jī)各取兩水平溶血液10支，每支檢測3次，分別計(jì)算、s、CV。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。多組比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

溶血液低值為5.73%±0.10%，高值為9.45%±0.15%，低、高值兩個(gè)標(biāo)本批內(nèi)不精密度分別是1.75%、1.59%，均小于2.5%。溶血液天間低值為 5.75%±0.25%，高值為9.47%±0.40%，天間批內(nèi)不精密度分別是4.35%、4.22%，均小于5%，符合檢驗(yàn)要求。－20℃保存穩(wěn)定期可以達(dá)到3個(gè)月，每個(gè)月之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。溶血液瓶間低值為5.70%±0.09%，高值為9.47%±0.14%，瓶間變異系數(shù)較小，分別為1.58%和1.48%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 溶血液保存3個(gè)月的穩(wěn)定性分析（，%）

表1 溶血液保存3個(gè)月的穩(wěn)定性分析（，%）

保存時(shí)間 低值 高值第1個(gè)月5.68±0.23 9.48±0.38第2個(gè)月 5.72±0.26 9.47±0.41第3個(gè)月5.70±0.24 9.51±0.39

3 討 論

Hb Alc是國際公認(rèn)的糖尿病監(jiān)控“金標(biāo)準(zhǔn)”，能反映糖尿病患者2～3個(gè)月內(nèi)糖代謝狀況，不受飲食、抽血時(shí)間、胰島素使用等因素影響。目前，我國糖尿病的發(fā)病率逐年升高，HbA1c的檢測質(zhì)量在糖尿病的診治中起著舉足輕重的作用，而我國Hb Alc檢測工作還處于起步階段［9］。有資料顯示，同一方法實(shí)驗(yàn)室間的變異系數(shù)在10%甚至20%以上，距離國際上5%的標(biāo)準(zhǔn)還有很大的差距，使得Hb Alc作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效檢測及預(yù)防慢性并發(fā)癥的絕對指標(biāo)大打折扣［10］。2007年上海地區(qū)第1次調(diào)查結(jié)果顯示臨床實(shí)驗(yàn)室HbA1c的檢測，情況令人擔(dān)憂［11］。HbA1c的檢測質(zhì)量對于糖尿病的管理有重要影響，故HbA1c的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制顯得尤為重要，而好的室內(nèi)質(zhì)控需要質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的質(zhì)控品。好的Hb Alc質(zhì)控品應(yīng)滿足：（1）消除質(zhì)控品的基質(zhì)效應(yīng)問題選擇近似人血基質(zhì)的樣本；（2）至少有正常和異常2個(gè)水平的濃度；（3）為消除瓶間差，盡量選擇液體質(zhì)控品，也方便操作者使用；（4）質(zhì)控品的穩(wěn)定期要較長；（5）無傳染性［9］。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測定Hb Alc時(shí)，須將標(biāo)本紅細(xì)胞做預(yù)處理，即加溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞徹底溶解，制成要求比例的溶血液，再上機(jī)檢測。本文探討用臨床標(biāo)本自制溶血液作為該法的室內(nèi)質(zhì)控品；評價(jià)低值和高值兩個(gè)水平溶血液的不精密度、穩(wěn)定性及瓶間差異。低、高值兩個(gè)水批內(nèi)不精密度分別是1.75%、1.59%，均小于2.5%，天間批內(nèi)不精密度分別是4.35%、4.22%，均小于5%，符合檢驗(yàn)要求［12］。－20 ℃保存穩(wěn)定期可以達(dá)到3個(gè)月（P＞0.05）。同時(shí)本研究結(jié)果還顯示，瓶間變異系數(shù)較小，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。自制兩個(gè)水平值的溶血液作為Hb Alc的室內(nèi)質(zhì)控品是可行的，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)控要求。另外，自制溶血液也可以應(yīng)用于使用該檢測方法的實(shí)驗(yàn)室室間現(xiàn)場質(zhì)量監(jiān)測。

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［2］鄭健彬，王翠霞，麥奇.糖化血紅蛋白測定膠乳凝集法在Beckman生化分析儀上的應(yīng)用及評價(jià)［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（5）：858－859.

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