羅漢果苷V提取條件優(yōu)化研究

李 倩 饒力群 王輔恒 楊 華 鄺瑋琦

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

羅漢果苷V提取條件優(yōu)化研究

李 倩 饒力群 王輔恒 楊 華 鄺瑋琦

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

建立羅漢果苷V的最佳提取工藝。采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察提取溶劑濃度、提取時(shí)間、提取溫度、料液比對(duì)羅漢苷V的影響。結(jié)果表明，羅漢果苷V的最佳提取工藝條件：以濃度為50%的乙醇溶液作為提取劑，回流時(shí)間為120min，物料比為1∶15（m∶V），回流溫度為60℃。該條件下羅漢果苷V的提取率可達(dá)到72%。

羅漢果；羅漢果苷V；最佳提取工藝；高效液相色譜

羅漢果（corsvenor momordica fruit）為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物羅漢果的果實(shí)，其干燥果實(shí)為圓形或長(zhǎng)圓形。羅漢果皂甙是其強(qiáng)甜味的非糖物質(zhì)三萜類成分之一，具有3個(gè)比較突出的特點(diǎn)：① 甜度高，熱量低，是糖尿病患者和肥胖者的理想的食品；② 具有較強(qiáng)的保健功能，如：提高免疫功能、保護(hù)肝臟、降血糖血脂、抗氧化等作用；③ 無(wú)毒性，安全系數(shù)高。迄今為止，研究者已從羅漢果果實(shí)中分離并鑒定出了幾種羅漢果單體皂苷，分別是：羅漢果苷Ⅳ（mogrosideⅣ）、羅漢果苷 V （mogroside V）、羅漢果苷Ⅲ （mogrosideⅢ）、羅漢果苷ⅡE（mogrosidⅡE）、羅漢果苷ⅢE（mogrosideⅢE）、羅漢果苷Ⅵ（mogrosideⅥ）、羅漢果苷 A （mogroside A）、羅漢果新苷（neomogroside）、賽門苷Ⅰ（siamensideⅠ）、11－氧化羅漢果甙（11－oxomogroside）、羅漢果二醇苯甲酸脂（mogroester）等葫蘆烷三萜苷類化合物［1］。其中羅漢果苷V是一種葫蘆烷四環(huán)三萜化合物，分子式為C60H102O29·2H2O，24位連接了5個(gè)糖基［2］，含量為1%，具有甜度高、熱量低、熱穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，可作為天然甜味劑開發(fā)的物質(zhì)之一［3－5］。

前人［6－8］曾采用水煮法、浸漬法和超聲波輔助提取法提取羅漢果總皂苷，但未見(jiàn)對(duì)羅漢果苷V進(jìn)行提取的相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)對(duì)羅漢果苷V的熱回流提取工藝進(jìn)行研究，以確定其最佳提取工藝。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

羅漢果干果：產(chǎn)于廣西桂林；

羅漢果苷V對(duì)照品：純度98%，西格瑪奧德里奇公司；

乙醇、正丁醇：分析級(jí)，天津市大茂化學(xué)試劑廠；

甲醇：色譜級(jí)，湖南化工研究院精細(xì)化工研究所；

乙腈：分析級(jí)，上海德正化工有限公司。

1.2 試驗(yàn)儀器與設(shè)備

電熱水浴鍋：WB－2000，上海浦東物理光學(xué)儀器廠；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RE－52AA，上海亞榮生化儀器廠；

高效液相色譜儀：Agilent 1100，安捷倫科技有限公司；

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 提取方法 稱取羅漢果干果粉末5.00g，放入圓底燒瓶中，用乙醇回流提取，提取液過(guò)濾除渣后濃縮至干，用少量水溶解后正丁醇萃取，減壓濃縮至浸膏狀，甲醇溶解并定容至50mL。

1.3.2 羅漢果苷V提取條件的單因素試驗(yàn)

（1）乙醇濃度對(duì)提取效果的影響：根據(jù)1.3.1方法，料液比為1∶20（m∶V），提取時(shí)間120min，提取溫度80℃，提取次數(shù)為2次，乙醇濃度分別設(shè)為50%，60%，70%，80%，90%。通過(guò)比較提取率，考察不同提取溶劑濃度對(duì)羅漢果苷V提取效果的影響。

（2）料液比對(duì)提取效果的影響：根據(jù)1.3.1方法，提取時(shí)間120min，提取溫度為80℃，乙醇濃度為70%，提取次數(shù)為2次，料液比設(shè)為1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30（m∶V）。通過(guò)比較提取率，考察不同料液比對(duì)羅漢果苷V提取效果的影響。

（3）提取溫度對(duì)提取效果的影響：根據(jù)1.3.1方法，料液比為1∶20（m∶V），乙醇濃度為70%，提取時(shí)間120min，提取次數(shù)為2次，提取溫度分別設(shè)為50，60，70，80，90℃。通過(guò)比較提取率，考察不同提取溫度對(duì)羅漢果苷V提取效果的影響。

（4）提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響：根據(jù)1.3.1方法，料液比為1∶20（m∶V），乙醇濃度為70%，提取溫度為80℃，提取次數(shù)為2次，提取時(shí)間分別為60，90，120，150，180min。通過(guò)比較提取率，考察不同提取時(shí)間對(duì)羅漢果苷V提取效果的影響。

1.3.3 羅漢果苷V提取條件的正交試驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以提取時(shí)間、乙醇濃度、料液比、提取溫度為試驗(yàn)因子，以羅漢果苷V提取率為考察指標(biāo)，優(yōu)化羅漢果苷V的提取工藝條件。

1.3.4 分析方法

（1）HPLC檢測(cè)條件：色譜柱為 Hypersil ODS柱（250mm ×416mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈∶水 （23∶77，V∶V）；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；流速為0.8mL／min，柱溫35℃。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：精密稱取羅漢果苷V對(duì)照品0.001g，置5mL容量瓶中用流動(dòng)相定容，配成濃度為0.2mg／mL的儲(chǔ)備液。分別稀釋成200，160，120，80，40，16，8mg／L，分別進(jìn)樣20μL，記錄相應(yīng)的峰面積。以峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)，羅漢果苷V進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）供試品中羅漢果苷V含量的測(cè)定：精密稱取5.000g羅漢果干燥粉末，置于圓底燒瓶中，100mL 50%乙醇回流提取1h，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮，流動(dòng)相定容至50mL。采用上述HPLC檢測(cè)條件，進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，羅漢果苷V的提取率按式（1）計(jì)算

式中：

y—— 提取率，%；

m樣品——粗提物中羅漢果苷V的含量，g；

m總——原材料中羅漢果V的含量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 羅漢果苷V的HPLC法測(cè)定結(jié)果

2.1.1 羅漢果苷V對(duì)照品含量測(cè)定 羅漢果苷V的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，其標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝191.24x（R2＝0.993 6）。線性考察結(jié)果表明，羅漢果苷V進(jìn)樣量在1.600～40.000μg范圍內(nèi)峰面積和進(jìn)樣量線性關(guān)系良好。如圖2所示，羅漢果苷V的出峰時(shí)間為10.039min。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Figure 1 The standard graph

圖2 羅漢果苷V對(duì)照品HPLC圖譜Figure 2 HPLC chromatogram of mogroside V standard simple

2.1.2 供試品中的羅漢果苷V的含量 由圖3可知，在10.097min處有一羅漢果苷V吸收峰，與圖2羅漢果苷V對(duì)照品出峰時(shí)間幾乎一致，峰型完整。利用面積外標(biāo)法得到羅漢果苷V的含量為0.096%。

圖3 羅漢果供試品溶液HPLC圖譜Figure 3 HPLC chromatogram of corsvenor momordica fruit extraction

2.2 提取條件對(duì)羅漢果苷V的影響

2.2.1 乙醇濃度 由表1可知，隨著乙醇濃度的增大，對(duì)羅漢果苷V的提取率也隨之升高，但濃度達(dá)到70%時(shí)，提取率開始下降，這說(shuō)明皂苷雖然易溶于乙醇，但并不是乙醇濃度越高越好。所以選擇50%，60%，70%的乙醇濃度為3個(gè)水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表1 乙醇濃度對(duì)羅漢果苷V提取率的影響Table 1 Effort of different concentration of alcohol on mogroside V extraction

2.2.2 料液比 由表2可知，隨著料液比的增加羅漢果苷V的提取率升高，當(dāng)大于1∶25（m∶V）時(shí)提取率開始下降。所以選擇1∶15，1∶20，1∶25（m∶V）為3個(gè)水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表2 料液比對(duì)羅漢果苷V提取率的影響Table 2 Effort of different material fluid ratio on mogroside V extraction

2.2.3 提取溫度 由表3可知，隨著提取溫度的升高，羅漢果苷V的提取率增加，這是由于溫度的增加加快了皂苷的溶解擴(kuò)散速度，增大了在溶劑中的溶解度。當(dāng)溫度達(dá)到80℃，提取率趨于平緩。繼續(xù)加溫，羅漢果苷V提取率略有下降。由于60℃ 和90℃ 提取效率相差不大，基于提取成本考慮，選擇60，70，80℃ 為3個(gè)水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.2.4 提取時(shí)間 由表4可知，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，羅漢果苷V的提取率增加。當(dāng)時(shí)間增加到120min后，提取率逐漸平穩(wěn)，這是由于隨著時(shí)間的增加，羅漢果苷V逐漸被提取出來(lái)，2h可將羅漢果苷V基本提取完全。因此選擇90，120，150min為3個(gè)水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.3 羅漢果苷V提取條件的正交試驗(yàn)結(jié)果

為了優(yōu)化羅漢果苷V的提取條件，本試驗(yàn)在上述單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行四因素三水平的正交試驗(yàn)，因素和水平見(jiàn)表5，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表3 提取溫度對(duì)羅漢果苷V提取率的影響Table 3 Effort of different temperature on mogroside V extraction

表4 提取時(shí)間對(duì)羅漢果苷V提取率的影響Table 4 Effort of different time on mogroside V extraction

表5 正交試驗(yàn)因素與水平表Table 5 Foctors and levels of orthodoxy

表6 羅漢果苷V提取的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)Table 6 Orthogonal design and result of the extraction of mogroside V

由表6可知，采用回流提取法提取羅漢果苷V，影響提取率的因素主次為A＞C＞B＞D，最優(yōu)組合為A2B1C1D1，即乙醇的濃度為50%，料液比為1∶15（m∶V），提取溫度為60℃，提取時(shí)間為120min。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定羅漢果干果中羅漢果苷V的含量，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠。采用有機(jī)溶劑乙醇回流提取的方法，通過(guò)對(duì)羅漢果干果的回流提取過(guò)程中影響有效成分的因素進(jìn)行考察，分別對(duì)乙醇濃度，料液比、提取溫度以及提取時(shí)間做單因素的水平試驗(yàn)，然后采用正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝條件進(jìn)行最優(yōu)化。試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳提取參數(shù)：采用回流提取，乙醇濃度50%，料液比1∶15（m∶V），提取溫度60℃，提取時(shí)間120min，在該條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明羅漢果苷V的提取率達(dá)到72%，說(shuō)明該提取條件有效可行。

1 李典鵬.廣西特產(chǎn)植物羅漢果的研究與應(yīng)用［J］.廣西植物，2000（20）：270～271.

2 Jakinovich W，Jr Moon，Choi Y H.Evaluation of plant extracts for sweetness using the Mongolian gerbil［J］.Natural Products，1990（53）：190～195.

3 黎海彬，王邕.羅漢果化學(xué)成分和應(yīng)用的研究［J］.食品研究與開發(fā)，2006，12（2）：85～87.

4 高山林，汪紅.羅漢果皂苷含量的檢測(cè)方法［J］.天然產(chǎn)物的研究與開發(fā)，2001，13（2）：36～39.

5 梁成欽，蘇小建，李俊.羅漢果苷V的薄層檢測(cè)研究［J］.飲料工業(yè)，2005，8（4）：44～66.

6 李俊，陸程，李殷青.用正交法對(duì)羅漢果糖甙提取的工藝研究［J］.化學(xué)世界，1999，40（2）：92～941

7 鞠偉，程云燕，張健.羅漢果研究概況綜述［J］.廣西輕工業(yè)，2001（4）：4～6.

8 楊祖金，鐘理，謝小霞，等.超聲波法強(qiáng)化提取羅漢果皂甙的工藝研究［J］.中國(guó)藥材，2007，30（8）：1 019～1 021.

Studies on the optimum extraction technology of mogroside V in corsvenor momordica fruit

LI Qian RAO Li－qun WANG Fu－h(huán)eng YANG Hua KUANG Wei－qi

（College of Bioscience and Biotechnology，Hunan Agriculture University，Changsha，Hunan410128，China）

Established the optimum extraction technology of mogrosideⅤ that was extracted from corsvenor momordica fruit.The effects of the alcohol concentration，extraction times，temperature，material－liquid ratio were investigated by oneway and orthogonal experiment.The optimum parameter of extraction had been determined that the concentration of ethanol is 50%，the multiple of ethanol to material is 1∶15（m∶V），extraction time is 120min and extraction temperature is 60℃.By this way，the rate of extraction was 72%.

corsvenor momordica fruit；mogroside V；optimum extraction technology；HPLC

10.3969／j.issn.1003－5788.2011.04.012

湖南省教育廳重點(diǎn)科技項(xiàng)目（編號(hào)：09A039）

李倩（1985－），女，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士研究生。E－mail：liqian1985116＠sina.com

饒力群

2011－04－16