棉花根醇提物與水提物的止咳祛痰抗炎作用研究

包淑云，喻麗珍，于禧龍，李永康

皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，蕪湖241002

棉花根醇提物與水提物的止咳祛痰抗炎作用研究

包淑云*，喻麗珍，于禧龍，李永康

皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，蕪湖241002

制備棉花根醇提物和水提物，止咳實(shí)驗(yàn)采用小鼠濃氨水引咳法，祛痰實(shí)驗(yàn)采用氣管酚紅排泌法，抗炎實(shí)驗(yàn)采用二甲苯致耳腫脹法，觀察棉花根醇提物和水提物的止咳祛痰抗炎作用。實(shí)驗(yàn)小鼠分正常對(duì)照組，醇提物與水提物高低劑量組及陽性藥物對(duì)照組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)棉花根醇提物、水提物均能延長小鼠的咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，均能增加氣管內(nèi)的酚紅排泌量，對(duì)二甲苯所致的耳腫脹均有顯著的抑制作用。

棉花根;醇提物;水提物;止咳;祛痰;抗炎

棉花根又名土黃芪，在《本草綱目》和《上海常用中草藥》均有收載，能提高患者機(jī)體免疫功能，補(bǔ)虛，平喘，調(diào)經(jīng);據(jù)《中藥藥理與應(yīng)用》記載，棉花根性溫，味甘，能補(bǔ)中益氣、止咳平喘，主要用于中氣下陷、脾氣虛弱、氣虛咳喘［1］，民間常用其治療咳嗽、哮喘、氣管炎［2，3］。本文對(duì)棉花根醇提物和水提物的止咳祛痰抗炎作用進(jìn)行比較研究，為臨床提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材

新鮮棉花根由李永康老師采收(于2008年10月采收于蕪湖近郊農(nóng)田)，洗凈泥沙，晾干后，切段，粉碎。稱取棉花根1 kg，以75%乙醇(固液比12∶1)超聲提取3次，每次60 min，過濾，合并濾液，濃縮后得浸膏，即為棉花根醇提物。稱取棉花根1 kg，以蒸餾水(固液比12∶1)煎煮3次，每次60 min，過濾，合并濾液，濃縮后得浸膏，即為棉花根水提物。

1.2 儀器和試劑

S-888E型超聲波霧化器(中外合資南京道芬電子有限公司);FA2004N型電子分析天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);UV-2550紫外可見分光光度計(jì)(Shimadzu);KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(EYELA，上海愛朗儀器有限公司)。

枸櫞酸噴托維林片(批號(hào):08032321，天津藥業(yè)焦作有限公司);鹽酸溴己新片(批號(hào):090225，浙江萬邦藥業(yè)有限公司);醋酸潑尼松(批號(hào): 090431470，河南天方藥業(yè)股份有限公司)。

無水乙醇(AR.天津百世化學(xué)試劑有限公司);氨水(AR.蚌埠化學(xué)試劑廠);苯酚紅(IND.南京化學(xué)試劑有限公司);碳酸氫鈉(AR.天津百世化工有限公司);氫氧化鈉(AR.無錫市展望化工試劑有限公司);二甲苯(AR.蚌埠化學(xué)試劑廠)。

1.3 動(dòng)物

健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，購于南京市江寧區(qū)青山動(dòng)物繁殖場。小鼠在實(shí)驗(yàn)期間自由飲水，普通飼料喂食。

2 方法

2.1 止咳作用［4］

在做止咳實(shí)驗(yàn)前，先取正常小鼠進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索適合的噴霧時(shí)間，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，以噴霧15 s～20 s較為合適，最終確定噴霧時(shí)間為18 s。在止咳預(yù)實(shí)驗(yàn)中有以下兩點(diǎn)體會(huì)，一是噴霧時(shí)間的確定，文獻(xiàn)中一般采用的噴霧時(shí)間為5 s，本文在開始的預(yù)實(shí)驗(yàn)中也采用5 s噴霧，發(fā)現(xiàn)預(yù)試的正常小鼠咳嗽潛伏期長甚至可達(dá)2 min，咳嗽次數(shù)少，后預(yù)試了幾次，發(fā)現(xiàn)噴霧15 s～20 s較為合適，這可能與噴霧器的噴霧量大小及氨水的質(zhì)量有關(guān)，所以噴霧時(shí)間需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果才能確定;二是預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)濃氨水的濃度隨噴霧次數(shù)的增加濃度會(huì)減小，對(duì)小鼠的誘咳作用會(huì)減弱，所以實(shí)驗(yàn)中更換組別的同時(shí)，將噴霧器中的剩余氨水廢棄，換用新的氨水，且每次保持相同的氨水量，在實(shí)驗(yàn)中盡量保持相同的條件。

取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，即空白對(duì)照組，棉花根醇提物高、低劑量組，棉花根水提物高、低劑量組，咳必清對(duì)照組，分別灌胃給予蒸餾水20 mL/kg、棉花根醇提物高劑量組23.4 g/kg生藥、棉花根醇提物低劑量組7.8 g/kg生藥、棉花根水提物高劑量組23.4 g/kg生藥、棉花根水提物低劑量組7.8 g/kg生藥和咳必清0.5 g/ kg。每日灌胃給藥2次，連續(xù)3 d，給藥體積為0.2 mL/10g。于末次給藥1 h后，將小鼠置于500 mL的玻璃鐘罩內(nèi)，用超聲波霧化器以最大流速噴霧氨水至玻璃鐘罩內(nèi)，噴霧18 s，取出小鼠，置于另一清潔鐘罩內(nèi)，觀察小鼠的典型咳嗽動(dòng)作(腹肌收縮，同時(shí)張大嘴，有時(shí)可有咳聲)者為有咳嗽，否則為無咳嗽，記錄潛伏期及2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)。

2.2 祛痰作用

2.2.1 酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取酚紅0.100 g，用5%NaHCO3溶液溶解，定容至1000 mL，搖勻，得100 μg/mL酚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。分別精密吸取酚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25，0.50，0.75，1.00，1.25，1.50，1.75，2.00 mL至10 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，用紫外分光光度計(jì)測定546 nm處的吸光度A。以吸光度為縱坐標(biāo)，酚紅濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并作線性回歸，得線性回歸方程為Y=0.1673X－0.0228，r=0.9999。

2.2.2 祛痰實(shí)驗(yàn)

取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，即空白對(duì)照組，棉花根醇提物高、低劑量組，棉花根水提物高、低劑量組，鹽酸溴己新對(duì)照組，分別灌胃給予蒸餾水20 mL/kg、棉花根醇提物高劑量組23.4 g/kg生藥、棉花根醇提物低劑量組7.8 g/ kg生藥、棉花根水提物高劑量組23.4 g/kg生藥、棉花根水提物低劑量組7.8 g/kg生藥、鹽酸溴己新36 mg/kg。每日灌胃給藥2次，連續(xù)3 d，給藥體積為0.2 mL/10 g。于末次給藥30 min后，各小鼠腹腔注射5%酚紅0.1 mL/10 g。給予酚紅30 min后，脫頸椎處死小鼠，剝?nèi)夤苤車M織，剪下自甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管，放進(jìn)盛有2 mL生理鹽水試管中，再加入1 mol/L NaOH 0.1 mL，以加有2 mL生理鹽水及0.1 mL 1 mol/L NaOH的溶液為空白，用分光光度計(jì)于波長546 nm處測定吸光度A，代入線性回歸方程，計(jì)算酚紅濃度。

2.3 抗炎作用

取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，即空白對(duì)照組，棉花根醇提物高、低劑量組，棉花根水提物高、低劑量組，醋酸潑尼松對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組及給藥組的給藥方法與2.1方法同，醋酸潑尼松對(duì)照組給予15.6 mg/kg，每日灌胃給藥2次，連續(xù)3 d，給藥體積為0.2 mL/10 g。于末次給藥30 min后用移液槍在小鼠的右耳內(nèi)外兩側(cè)均勻涂布80 μL二甲苯，左耳不做任何處理，1 h后脫頸椎處死小鼠，剪下雙耳，用直徑7 mm打孔器，在小鼠左右耳的同一部位打孔，打下的圓耳片用電子天平稱重。根據(jù)公式:［(致炎耳側(cè)圓耳片重－正常側(cè)圓耳片重)/正常側(cè)圓耳片重］×100%，計(jì)算耳腫脹率。

3 結(jié)果與討論

3.1 止咳作用

棉花根醇提物與水提物對(duì)濃氨水引咳實(shí)驗(yàn)的鎮(zhèn)咳作用結(jié)果見表1所示。

由表1可知，在延長咳嗽潛伏期上，醇提物高劑量組(P＜0.01)、低劑量組(P＜0.01)、水提物高劑量組(P＜0.05)和低劑量組(P＜0.05)與空白對(duì)照組相比有顯著性差異，在減少小鼠的咳嗽次數(shù)上，醇提物高劑量組(P＜0.01)、低劑量組(P＜0.01)、水提物高劑量組(P＜0.01)和低劑量組(P＜0.05)與空白對(duì)照組相比也有顯著性差異，表明棉花根醇提物與水提物均能延長小鼠的咳嗽潛伏期，減少2 min內(nèi)小鼠的咳嗽次數(shù)。

表1 棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠的止咳作用(±s)Table 1 Antitussive effect of ethanol extract and water extract from cotton root(±s)

表1 棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠的止咳作用(±s)Table 1 Antitussive effect of ethanol extract and water extract from cotton root(±s)

注:與空白組對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，下同。Note:Compared with blank group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，the same below.

2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)28.10±8.71 19.90±14.89醇提物高劑量組(23.4 g/kg生藥) 50.80±19.34＊＊ 5.30±2.79＊＊醇提物低劑量組(7.8 g/kg生藥) 49.60±21.04＊＊ 5.90±2.96＊＊水提物高劑量組(23.4 g/kg生藥) 44.45±19.23* 5.80±3.43＊＊水提物低劑量組(7.8 g/kg生藥) 42.00±17.77* 7.10±2.23*咳必清組(0.5 g/kg) 51.05±15.14＊＊＊ 5.20±2.30 Cough times in 2 min空白組蒸餾水(20 mL/kg)組別(劑量) Group(Dose)咳嗽潛伏期(s) Incubation period of cough(s)＊＊

3.2 祛痰作用

根據(jù)“2.2”方法測得吸光度A后，代入回歸方程即得酚紅濃度C(μg/mL)。棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠祛痰作用結(jié)果見表2。

表2 棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠的祛痰作用(±s)Table 2 Expectorant effect of ethanol extract and water extract from cotton root(±s)

表2 棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠的祛痰作用(±s)Table 2 Expectorant effect of ethanol extract and water extract from cotton root(±s)

酚紅排泌量(μg/mL) 0.088±0.037 0.6593±0.2209醇提物高劑量組(23.4 g/kg生藥) 0.237±0.067 1.5511±0.3988＊＊＊醇提物低劑量組(7.8 g/kg生藥) 0.188±0.060 1.2584±0.3587＊＊＊水提物高劑量組(23.4 g/kg生藥) 0.151±0.050 1.0371±0.3011＊＊水提物低劑量組(7.8 g/kg生藥) 0.139±0.037 0.9677±0.2225＊＊鹽酸溴己新(36 mg/kg) 0.356±0.083 2.2667±0.4980 Output content of phenol red空白組蒸餾水(20 mL/kg)組別(劑量) Group(Dose)吸光度(546 nm) A(546 nm)＊＊＊

表3 棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠耳腫脹的抑制作用(x ±s)Table 3 Inflammatory effect of ethanol extract and water extract from cotton root(±s)

表3 棉花根醇提物及水提物對(duì)小鼠耳腫脹的抑制作用(x ±s)Table 3 Inflammatory effect of ethanol extract and water extract from cotton root(±s)

組別(劑量) Group(Dose)抑制率Percentage inhibition(%) 118.22±21.98醇提物高劑量組(23.4 g/kg生藥) 54.94±22.33＊＊＊醇提物低劑量組(7.8 g/kg生藥) 74.13±20.42＊＊＊水提物高劑量組(23.4 g/kg生藥) 70.42±17.28＊＊＊水提物低劑量組(7.8 g/kg生藥) 81.79±12.08＊＊＊醋酸潑尼松組(15.6 mg/kg) 62.68±23.35空白組蒸餾水(20 mL/kg)＊＊＊

從表2可知，棉花根醇提物高劑量組(P＜0.001)、低劑量組(P＜0.001)、水提物高劑量組(P＜0.01)和低劑量組(P＜0.01)與空白對(duì)照組相比有顯著性差異，均能明顯增加小鼠氣管酚紅排泌量，可見棉花根醇提物與水提物均有祛痰作用。

3.3 抗炎作用

棉花根醇提物高、低劑量組及水提物高、低劑量組對(duì)二甲苯致耳腫脹的抑制率見表3所示。

從表3可知，棉花根醇提物高劑量組(P＜0.001)、低劑量組(P＜0.001)以及棉花根水提物高劑量組(P＜0.001)、低劑量組(P＜0.001)與空白對(duì)照組相比有顯著性差異，對(duì)二甲苯所致的耳腫脹均有顯著的抑制作用，表明棉花根醇提物及水提取物都有抗炎作用。

總體來說，棉花根醇提物與水提物均有止咳祛痰抗炎的作用，為臨床上用棉花根治療咳喘提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，棉花根醇提物較水提物有更強(qiáng)的效應(yīng)，這可能與醇提法比水煎法的提取效率更高，有效物質(zhì)的溶出度更大有關(guān)。另一方面，棉花根中含有棉酚，而棉酚的極性較小，醇提法比水煎法可能會(huì)將更多的棉酚溶解出來，因此還需進(jìn)一步考察比較兩種提取物的毒副作用。

1 Zhu XX(朱曉西)，Zhu SL(朱勝龍).Preparation of Health Granules from the Extract of Cotton Root.China，200610054825.7.2007-8-22.

2 Jia MH(賈美華).Clinical application of cotton seeds and root bark.Shanghai J Tradit Chin Med(上海中醫(yī)藥雜志)，1992，4:31-34.

3 Ma TY(馬鐵瑛).Sixty cases of senile chronic bronchitis treeted with cotton root.China's Naturopathy(中國民間療法)，2000，8:31-32.

4 Xu SY(徐叔云)，Bian RL(卞如廉)，Chen X(陳修).Methodology of Pharmacological Experiment(藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)).Beijing:People’s Medical Publishing House，2005.1363.

Antitussive，Expectorant and Anti-inflammatory Effects of Ethanol Extract and Water Extract from Cotton Root

BAO Shu-yun*，YU Li-zhen，YU Xi-long，LI Yong-kang
Department of Pharmacy，Wannan Medical College，Wuhu 241002，China

The antitussive，expectorant and anti-inflammatory effects of ethanol extract and water extract from cotton root were studied in this paper.Relieving cough and facilitating expectoration were observed by strong ammonia solution spray and phenol red execretion methods.The anti-inflammation was studied by ear swelling induced by xylene.Ethanol extract and water extract from cotton root both could significantly decrease cough times，prolong incubation period of cough，increase phenol red output in trachea and inhibit ear swelling.

cotton root;ethanol extract;water extract;antitussive;expectorant;anti-inflammatory

1001-6880(2011)04-0730-04

2010-03-10 接受日期:2010-07-21

安徽省教育廳自然科學(xué)基金一般項(xiàng)目(KJ2008B324);皖南醫(yī)學(xué)院中青年科研基金項(xiàng)目(WK200708)

*通訊作者 Tel:86-553-3932497;E-mail:bsyjx@163.com

R285.5

A