微透析與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用在藥物分析中的應(yīng)用

呂狄亞, 洪戰(zhàn)英, 婁子洋, 曹 巖, 董 昕, 柴逸峰

(第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院,上海 200433)

微透析與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用在藥物分析中的應(yīng)用

呂狄亞, 洪戰(zhàn)英, 婁子洋, 曹 巖, 董 昕, 柴逸峰

(第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院,上海 200433)

目的綜述微透析與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物體內(nèi)化學(xué)成分分析中的研究進(jìn)展。方法參閱近幾年國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，對微透析與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)及外源性物質(zhì)中的應(yīng)用進(jìn)行歸納與總結(jié)。結(jié)果與結(jié)論微透析與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用作為一種新型的分析技術(shù)，具有快速簡便、干擾少、前處理簡單等優(yōu)點(diǎn)。此項(xiàng)技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中得到了迅速推廣和應(yīng)用，特別在藥代動力學(xué)研究中顯示出其獨(dú)特的優(yōu)勢，具有十分廣闊的應(yīng)用前景。

微透析；液相色譜-質(zhì)譜

微透析是一種用于監(jiān)測動物和人類細(xì)胞外液、組織、大腦活性物質(zhì)的生理水平的活體取樣技術(shù)。最初應(yīng)用于研究腦脊髓液化學(xué)環(huán)境[1]，目前已廣泛應(yīng)用于諸如藥物透皮給藥研究[2]、組織藥代動力學(xué)研究[3]、組織藥物的局部代謝研究等領(lǐng)域[4，5]。

將微透析與多種分析技術(shù)聯(lián)用，微透析不僅可與分離技術(shù)如高效液相色譜(HPLC)[6]、毛細(xì)管電泳(CE)[7]等聯(lián)用，還能與檢測系統(tǒng)如質(zhì)譜測定(MS)、放射免疫測定(RIA)、電化學(xué)檢測(ECD)、熒光檢測等聯(lián)用。但與其他聯(lián)用技術(shù)相比，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用( liquid chromatography-Mass Spectrometry， LC-MS)技術(shù)是目前普遍適用于與微透析結(jié)合進(jìn)行分離、分析的技術(shù)。近年來，LC-MS在藥學(xué)、生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域也得到了廣泛的應(yīng)用。因此，本文綜述了近十年LC-MS在檢測透析液中的內(nèi)源性物質(zhì)(乙酰膽堿、生物胺、氨基酸及其他神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽類物質(zhì))和外源性物質(zhì)(藥物)中的應(yīng)用。

1 微透析

1.1微透析原理 微透析技術(shù)(microdialysis)是在非平衡條件(即流出的透析液中待測化合物的濃度低于它在探針膜周圍樣品基質(zhì)中濃度)下，灌注植入組織中的微透析探針，組織中待測化合物沿濃度梯度逆向擴(kuò)散進(jìn)入透析液，被連續(xù)不斷地帶出，從而達(dá)到從活體組織中取樣的目的[8]。

微透析取樣裝置主要由微量泵、微透析探頭、收集器、連接管及配套設(shè)備組成。微量泵以注射泵為佳，有利于減少恒流泵和蠕動泵的波動，流速一般為1～5 μl/min。在微透析系統(tǒng)中，探針是最關(guān)鍵的部分。

1.2微透析探針 微透析探針可以植入生物體的各個組織器官，包括肝臟[9，10]、心臟[11，12]、皮膚[5]、血液[13，14]、胎盤[15]、胃[16，17]和耳朵[18]等。探針的作用就像血管一樣，運(yùn)送物質(zhì)到特異部位或從特異部位將其移除，而不會有液體流失。微透析探頭通常是由一管式半透膜與不銹鋼、石英或塑料毛細(xì)管構(gòu)成雙層管道；長度一般為1～10 cm。半透膜由再生纖維素、聚碳酸酯或聚丙烯腈制成,載留分子量5～10 kD不等。實(shí)際應(yīng)用需根據(jù)具體組織和待測物選擇不同的微透析探頭。探針的主要類型分為同心圓探針、線性探針、柔性探針、分流探針。最常用的是同心圓探針(如圖1-A),主要用于神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的研究，這種類型的探針可以通過一個導(dǎo)管伸入大腦特定的區(qū)域，從而檢測神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。另外，線性探針(如圖1-C)主要應(yīng)用于軟組織，包括肝臟、肌肉、心臟和皮膚，故探針的表面積通常比用于腦的探針大一些。此類型的探針可把活性膜部分充分包埋在靶組織中，如腫瘤部位的取樣。柔性探針(如圖1-B)主要用于血液的取樣。這類探針是由Telting-Dia等[19]設(shè)計(jì)的，用于清醒動物的血液取樣時，由于此探針可彎曲，即使動物動彈也不會傷到其血管。分流探針(如圖1-D)主要用于清醒動物的膽汁取樣。此外，分流探針還可將蛋白樣品脫鹽后注入質(zhì)譜進(jìn)行分析。為了使大分子樣品分析成為可能，同時增加小分子樣品的回收率，發(fā)展了一種低流速、推拉灌注的探針。這種探針由充滿鹽的27-G不銹鋼套管組成。使用這種類型的探針，流速可達(dá)50 nl/min，回收率為100%[20]。

圖1[21] 四種探針的類型

由于微透析探針體積小，對動物本身不構(gòu)成傷害，使多種類型探針在同一動物身上測定血漿、腦、組織中藥物或內(nèi)源性物質(zhì)的濃度成為可能。Huff等[22]使用同心圓探針和柔性探針，通過靜脈給藥，運(yùn)用液相-電子電離源(LC-EI)檢測腦部和血漿中的藥物。但是，探針植入時間過長，會導(dǎo)致組織損傷，同時，纖維化或神經(jīng)膠質(zhì)增生也會在探針植入后數(shù)日出現(xiàn)。雖然細(xì)胞外水腫會增大探針和細(xì)胞外液的擴(kuò)散面積，但這個類似纖維化的聚合物會增大細(xì)胞周圍透析探針和細(xì)胞外液環(huán)境之間的物理屏障[23]。這些因素都會影響探針的回收率。因此，在基于局部腦血流(LCBF)和局部腦葡萄糖代謝(LCGM)的分離試驗(yàn)中，Benveniste等人提出探針植入后，回收的周期為24 h[24]，以避免上述因素的影響。

2 微透析與LC-MS聯(lián)用技術(shù)

微透析與LC-MS聯(lián)用技術(shù)包括離線、在線聯(lián)用。離線聯(lián)用技術(shù)主要用于解決樣品處理過程中提取或是透析液繁瑣的處理步驟[25]。然而，這樣的處理步驟有時會將樣品污染。相比于離線技術(shù)，在線聯(lián)用技術(shù)具有許多優(yōu)點(diǎn)，如簡單的樣品處理過程、自動化分析、結(jié)果自動反饋、減少了樣品流失以及處理過程中的污染物[25～27]?？傊?，無論是離線技術(shù)或是在線監(jiān)測技術(shù)，都需要匹配一個合適的監(jiān)測器。乙酰膽堿(ACh)在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起到重要的作用，因此許多傳統(tǒng)的離線分析方法如氣相、質(zhì)譜、放射酶促分析法等都用于乙酰膽堿的測定。然而，這些方法的不足在于樣品預(yù)處理繁瑣，監(jiān)測器靈敏度低。近年來，Hows等[28]將微透析與LC-MS/MS實(shí)現(xiàn)在線聯(lián)用,可以獲得對乙酰膽堿靈敏度更好的測定結(jié)果。

3 微透析與LC-MS聯(lián)用在內(nèi)源性物質(zhì)分析中的應(yīng)用

20世紀(jì)60年代，微透析技術(shù)首次用于動物腦中的氨基酸和其他電解質(zhì)研究的實(shí)驗(yàn)中[29]。由于收集到的細(xì)胞外神經(jīng)性物質(zhì)十分有限(<40 μl)，低靈敏度、低選擇性、樣品處理耗時的GC-MS[30]很難對其進(jìn)行分析和檢測。盡管液相色譜中常用的檢測器種類有很多，如熒光檢測器、紫外檢測器(UV)、質(zhì)譜檢測器(MS)，但只有質(zhì)譜檢測器具有直接、高靈敏度和高選擇性的優(yōu)點(diǎn)，同時，還可以通過保留時間和分子質(zhì)量對分析物進(jìn)行確定。趙先恩等[31]采用BCEOC作為柱前衍生試劑，LC-MS聯(lián)用技術(shù)實(shí)現(xiàn)了2種氨基酸類和3種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的同時完全衍生與檢測。

近年來，微透析已經(jīng)用于游離的內(nèi)源性物質(zhì)的檢測中，如兒茶酚胺、5-羥色胺、氨基酸類等物質(zhì)的研究中。Chengjie等[32]采用UPLC-MS/MS同時測定大鼠前額皮質(zhì)中一組單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，包括去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)以及異丙腎上腺素(ISO)，結(jié)果顯示靈敏度良好。Zhang等[33]采用LC-MS/MS同時檢測大鼠腦透析液中的乙酰膽堿、膽堿和異乙酰膽堿。經(jīng)過優(yōu)化的高靈敏度質(zhì)譜條件使檢測基底膽堿成為可能。

4 微透析與LC-MS聯(lián)用在外源性物質(zhì)分析中的應(yīng)用

隨著高靈敏度和高選擇性的MS/MS問世，逐步替代了紫外檢測器和熒光檢測器。微透析與LC-MS聯(lián)用已廣泛應(yīng)用于化合、中藥、重金屬等物質(zhì)的研究中。對于這些外源性物質(zhì)的機(jī)制研究發(fā)揮了很大的作用。

4.1微透析與LC-MS聯(lián)用在化學(xué)藥物分析中的應(yīng)用 化學(xué)藥物包括精神類藥物、抗生素、抗癌藥物、化合物等等。Lovenberg, Timothy等[34]應(yīng)用微透析結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)對諾氟西汀進(jìn)行大鼠藥動和藥效研究。結(jié)果顯示，諾氟西汀有助于5-HT的轉(zhuǎn)運(yùn)抑制作用。Guo,Ping等[35]采用微透析與LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)分析抗癌藥物甲氨蝶呤及其代謝產(chǎn)物7-羥基甲氨蝶呤在小鼠血漿及腦組織中的藥動學(xué)參數(shù)。該方法需要樣品量少，迅速，同時測定小鼠血漿及腦組織中的甲氨蝶呤及7-羥基甲氨蝶呤，得到了詳細(xì)的藥動學(xué)數(shù)據(jù)。

4.2微透析與LC-MS聯(lián)用在單味中藥分析中的應(yīng)用 中藥的化學(xué)成分是其發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，但是中藥化學(xué)成分復(fù)雜、有效成分不確定、含量低、難以檢測、類似物多樣等局限了中藥的研究。

LC-MS 既能同時分析一個樣品中的藥物及多種代謝物,也能分析單一動物給藥后同一樣品中的多個化合物,也可把含有不同化合物的樣品合并分析,可實(shí)現(xiàn)體內(nèi)和體外代謝研究的高通量分析。苦參素(OMT)和苦參堿(MT)是槐屬和苦參根中主要的喹啉聯(lián)啶生物堿[36]。臨床上主要用于治療病毒性肝炎、癌癥、心臟病和皮膚病(如銀屑病和濕疹)[36,37]。對苦參素(OMT)和苦參堿(MT)進(jìn)行分析的方法較多，例如，高效毛細(xì)管色譜法(HPCE)[38]、高效液相色譜法(HPLC)等等[39,40]。但當(dāng)這些方法的UV檢測在218 nm時，由于藥物本身在血漿中的濃度較低，并且可能存在內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，因此，在血漿中對其進(jìn)行定量十分困難。 Zheng等[41]采用微透析取樣，運(yùn)用高通量液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜(high-throughput LC-MS/MS)測定大鼠血液和表皮微透析液中苦參素及其代謝產(chǎn)物苦參堿。隨著微透析與LC/MS聯(lián)用技術(shù)的不斷發(fā)展,這一技術(shù)將會成為高通量快速篩選尋找先導(dǎo)化合物即新藥發(fā)現(xiàn)的首選工具之一。

4.3微透析與LC-MS聯(lián)用在中藥復(fù)方分析中的應(yīng)用 中藥通常經(jīng)配伍后服用，中藥復(fù)方制劑在藥效上可以發(fā)揮協(xié)同作用亦或拮抗作用[42]。因此，建立一個靈敏度高、選擇性好同時測定中藥活性成分的方法非常必要?，F(xiàn)在，常采用篩選和分析生物活性物質(zhì)中的復(fù)雜成分來研究中藥與生物系統(tǒng)(如DNA、蛋白、細(xì)胞等)的相互作用的特征[43,44]。有研究者采用活體細(xì)胞萃取與LC-MS[45]結(jié)合來篩選中藥復(fù)方配伍中潛在的活性物質(zhì)。鑒于微透析技術(shù)特有的優(yōu)勢， Wen等[46]采用微透析與HPLC-DAD-MS聯(lián)用分析復(fù)方，當(dāng)歸補(bǔ)血湯(CPDBD)中的生物活性物質(zhì)與蛋白相互作用。通過與化學(xué)對照品比較tR、MS值、UV譜，研究者從CPDBD中鑒定出九種化合物并對其定量分析。微透析-HPLC-DAD-MS成功應(yīng)用于中藥與蛋白相互作用的研究。

為了對生物樣品中的有效成分進(jìn)行定量分析，發(fā)展了許多HPLC-MS/MS的方法，然而，這些方法都有其局限性，如低靈敏度、保留時間長、產(chǎn)率低等。超高效液相色譜(ultra performance liquid chromatography，UPLC) 能顯著改善色譜峰的分離度和檢測靈敏度，同時大大縮短分析周期，是一種采用小顆粒填料色譜柱(粒徑小于2 μm)和超高壓系統(tǒng)(壓力大于105 kPa)的新型液相色譜技術(shù)，因此特別適用于微量復(fù)雜混合物的分離和高通量研究[47]。Huang等[14]將最新的取樣技術(shù)-微透析技術(shù)與先進(jìn)的分析方法，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用，同時測定大鼠腦和血漿中游離的黃芩苷。此方法的優(yōu)點(diǎn)在于快速定量。UPLC聯(lián)用技術(shù)結(jié)合微透析技術(shù)在中藥復(fù)雜體系分離中發(fā)揮了巨大的優(yōu)勢，為今后進(jìn)一步研究黃芩苷的藥代動力學(xué)奠定了基礎(chǔ)，可見此項(xiàng)技術(shù)具有卓越的分離性能和高通量的檢測水平，能夠充分適應(yīng)藥物代謝動力學(xué)的新發(fā)展，成為推動其進(jìn)步的動力之一。

5 結(jié)語

微透析與LC-MS聯(lián)用已廣泛應(yīng)用于藥物代謝和神經(jīng)生化分析等研究中。目前微透析與LC-MS聯(lián)用作為連續(xù)監(jiān)測和鑒定待測物已經(jīng)被越來越普遍地使用。盡管微透析有許多優(yōu)點(diǎn)，如活體取樣、動態(tài)觀察、定量分析、采樣量小、組織損傷輕等。對藥物代謝動力學(xué)的研究多采用測定血、尿、糞便、組織勻漿液中藥物及其代謝產(chǎn)物的濃度，而微透析的優(yōu)勢在于時間節(jié)點(diǎn)的可選擇性，避免了傳統(tǒng)藥物研究中處死動物，同時可以對同一動物收集大量的樣本進(jìn)行分析。但也有其不足之處，如探針回收率的好壞一直是微透析技術(shù)面臨的首要問題。筆者認(rèn)為微透析與LC-MS聯(lián)用技術(shù)，不僅可用于中藥活性成分的測定，也可用于化學(xué)藥物、生物制品分析，尤其在藥物代謝動力學(xué)研究中具有獨(dú)特優(yōu)勢。

[1] Bourne JA Intracerebral microdialysis: 30 years as a tool for the neuroscientist[J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2003, 30(1-2): 16.

[2] Holovics HJ, Anderson CR , Levine BS，etal. Investigation of drug delivery by iontophoresis in a surgical wound utilizing microdialysis[J]. Pharm Res, 2008, 25(8): 1762.

[3] Kim A, Suecof LA, Sutherland CA，etal. In vivo microdialysis study of the penetration of daptomycin into soft tissues in diabetic versus healthy volunteers[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2008, 52(11): 3941.

[4] Bielecka Grzela S, Klimowicz A. Application of cutaneous microdialysis to evaluate metronidazole and its main metabolite concentrations in the skin after a single oral dose[J]. J Clin Pharm Ther, 2003, 28(6): 465.

[5] Lanckmans K, Clinckers R, Van Eeckhaut A，etal. Use of microbore LC-MS/MS for the quantification of oxcarbazepine and its active metabolite in rat brain microdialysis samples[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2006, 831(1-2): 205.

[6] Mathy FX, Vroman B, Ntivunwa D，etal. On-line determination of fluconazole in blood and dermal rat microdialysates by microbore high-performance liquid chromatography[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2003, 787(2): 323.

[7] O'Brien KB, Esguerra M , Klug CT，etal. A high-throughput on-line microdialysis-capillary assay for D-serine[J]. Electrophoresis,2003, 24(7-8): 1227.

[8] 鄭 紅. 微透析與現(xiàn)代分析技術(shù)聯(lián)用的研究進(jìn)展[J]. 國外醫(yī)學(xué)：藥學(xué)分冊, 2005, 32(4): 275.

[9] Richards DA, Silva MA, Murphy N，etal. Extracellular amino acid levels in the human liver during transplantation: a microdialysis study from donor to recipient[J]. Amino Acids, 2007, 33(3): 429.

[10] Davies MI, Lunte CE. Simultaneous microdialysis sampling from multiple sites in the liver for the study of phenol metabolism[J]. Life Sci,1996, 59(12): 1001.

[11] Gilinsky MA, Faibushevish AA , Lunte CE. Determination of myocardial norepinephrine in freely moving rats using in vivo microdialysis sampling and liquid chromatography with dual-electrode amperometric detection[J]. J Pharm Biomed Anal, 2001, 24(5-6): 929.

[12] Price KE, Vandaveer SS, Lunte CE，etal. Tissue targeted metabonomics: metabolic profiling by microdialysis sampling and microcoil NMR[J]. J Pharm Biomed Anal, 2005, 38(5): 904.

[13] Lin LC, Hung LC, Tsai TH. Determination of (-)-epigallocatechin gallate in rat blood by microdialysis coupled with liquid chromatography[J]. J Chromatogr A, 2004, 1032(1-2): 125.

[14] Huang H, Zhang Y, Yang R，etal. Determination of baicalin in rat cerebrospinal fluid and blood using microdialysis coupled with ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2008, 874(1-2): 77.

[15] Ward KW, Pollack GM. Use of intrauterine microdialysis to investigate methanol-induced alterations in uteroplacental blood flow[J]. Toxicol Appl Pharmacol,1996, 140(2): 203.

[16] Woo KL, Lunte CE. The development of multiple probe microdialysis sampling in the stomach[J]. J Pharm Biomed Anal, 2008, 48(1): 20.

[17] Woo KL, Lunte CE. The direct comparison of health and ulcerated stomach tissue: a multiple probe microdialysis sampling approach[J]. J Pharm Biomed Anal, 2008, 48(1): 85.

[18] Zhu T, Cheung BW, Cartier LL,etal. Simultaneous intravenous and intramiddle-ear dosing to determine cefditoren influx and efflux clearances in middle ear fluid in freely moving chinchillas[J]. J Pharm Sci, 2003, 92(10): 1947.

[19] Ault JM, Riley CM, Meltzer NM，etal. Dermal microdialysis sampling in vivo[J]. Pharm Res, 1994, 11(11): 1631.

[20] Kottegoda S, Shaik I, Shippy SA. Demonstration of low flow push-pull perfusion[J]. J Neurosci Methods, 2002, 121(1): 93.

[21] 朱 林. 微透析取樣技術(shù)及其在藥代動力學(xué)中的應(yīng)用[J]. 國外醫(yī)學(xué)：藥學(xué)分冊, 2002, 29(5): 296.

[22] Huff JK, Davies MI. Microdialysis monitoring of methylphenidate in blood and brain correlated with changes in dopamine and rat activity[J]. J Pharm Biomed Anal,2002, 29(5): 767.

[23] Brunner M, Derendorf H. Clinical microdialysis: Current applications and potential use in drug development[J]. TrAC Trends in Analytical Chemistry, 2006, 25(7): 674.

[24] Benveniste H, Drejer J, Schousboe A，etal. Regional cerebral glucose phosphorylation and blood flow after insertion of a microdialysis fiber through the dorsal hippocampus in the rat[J]. J Neurochem, 1987, 49(3): 729.

[25] Jin G, Cheng Q, Feng J，etal. On-line microdialysis coupled to analytical systems[J]. J Chromatogr Sci, 2008, 46(3): 276.

[26] Tseng WC, Yang MH, Chen TP，etal. Automated, continuous, and dynamic speciation of urinary arsenic in the bladder of living organisms using microdialysis sampling coupled on-line with high performance liquid chromatography and hydride generation atomic absorption spectrometry[J]. Analyst, 2002, 127(4): 560.

[27] Yang CS, Tsai PJ, Chen WY，etal. On-line, continuous and automatic monitoring of extracellular malondialdehyde concentration in anesthetized rat brain cortex[J]. J Chromatogr B Biomed Sci Appl, 2001, 752(1): 33.

[28] Hows ME, Organ AJ, Murray S，etal. High-performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry assay for the rapid high sensitivity measurement of basal acetylcholine from microdialysates[J]. J Neurosci Methods, 2002, 121(1): 33.

[29] Bito L, Davson H, Levin E，etal. The concentrations of free amino acids and other electrolytes in cerebrospinal fluid, in vivo dialysate of brain, and blood plasma of the dog[J]. J Neurochem,1966, 13(11): 1057.

[30] Zhang MY, Beyer CE. Measurement of neurotransmitters from extracellular fluid in brain by in vivo microdialysis and chromatography-mass spectrometry[J]. J Pharm Biomed Anal, 2006, 40(3): 492.

[31] 趙先恩，索有瑞. 大鼠端腦中神經(jīng)遞質(zhì)的熒光衍生化高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法研究[J]. 分析化學(xué), 2008, 36(1): 12.

[32] Ji C, Li W, Ren XD，etal. Diethylation labeling combined with UPLC/MS/MS for simultaneous determination of a panel of monoamine neurotransmitters in rat prefrontal cortex microdialysates[J]. Anal Chem, 2008, 80(23): 9195.

[33] Zhang MY, Hughes ZA, Kerns EH，etal. Development of a liquid chromatography/tandem mass spectrometry method for the quantitation of acetylcholine and related neurotransmitters in brain microdialysis samples[J]. J Pharm Biomed Anal, 2007, 44(2): 586.

[34] Qu Y, Aluisio L, Lord B，etal. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of norfluoxetine in rats: Increasing extracellular serotonin level in the frontal cortex[J]. Pharmacol Biochem Behav, 2009, 92(3): 469.

[35] Guo P, Wang X, Liu L，etal. Determination of methotrexate and its major metabolite 7-hydroxymethotrexate in mouse plasma and brain tissue by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Pharm Biomed Anal, 2007, 43(5): 1789.

[36] 馬仁玲，周紅華，于喜水，等. 苦參注射液生物堿類成分指紋圖譜的研究[J]. 中國中藥雜志, 2003, 28(9): 817.

[37] 劉 梅，劉雪英，程建峰. 苦參堿的藥理研究進(jìn)展[J]. 中國中藥雜志, 2003, 28(9): 801.

[38] 陳亞飛，田頌九，孫曾培. 復(fù)方石韋片中生物堿的分離測定[J]. 藥物分析雜志, 2002, 22(2): 94.

[39] 祝德秋，施安國. 苦參素注射液的人體藥動學(xué)[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2003, 23(1): 21.

[40] 孟根達(dá)來，王 毅，賈福群. 反相離子對高效液相色譜法測定人血漿中苦參堿和氧化苦參堿[J]. 藥物分析雜志, 2003, 23(6): 440.

[41] Zheng H, Chen G, Shi L，etal. Determination of oxymatrine and its metabolite matrine in rat blood and dermal microdialysates by high throughput liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. J Pharm Biomed Anal, 2009, 49(2): 427.

[42] Ye G, Li YZ, Li YY，etal. SPE-HPLC method for the determination and pharmacokinetic studies on paeoniflorin in rat serum after oral administration of traditional Chinese medicinal preparation Guan-Xin-Er-Hao decoction[J]. J Pharm Biomed Anal, 2003, 33(3): 521.

[43] Guo M, Su X, Kong L，etal. Characterization of interaction property of multicomponents in Chinese Herb with protein by microdialysis combined with HPLC[J]. Anal Chim Acta, 2006, 556(1): 183.

[44] Su X, Kong L, Li X，etal. Screening and analysis of bioactive compounds with biofingerprinting chromatogram analysis of traditional Chinese medicines targeting DNA by microdialysis/HPLC[J]. J Chromatogr A, 2005, 1076(1-2): 118.

[45] Li SL, Li P, Sheng LH，etal. Live cell extraction and HPLC-MS analysis for predicting bioactive components of traditional Chinese medicines[J]. J Pharm Biomed Anal, 2006, 41(2): 576.

[46] Wen XD, Qi LW, Chen J，etal. Analysis of interaction property of bioactive components in Danggui Buxue Decoction with protein by microdialysis coupled with HPLC-DAD-MS[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2007, 852(1-2): 598.

[47] 艾 華, 王廣基, 顧 軼, 等. 超高效液相色譜在現(xiàn)代藥代動力學(xué)中的應(yīng)用[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 38(4): 294.

2010-09-26

[修回日期] 2010-12-30

Applicationofmicro-dialysis-LC/MSinpharmaceuticalanalysis

LV Di-ya, HONG Zhan-ying, LOU Zi-yang, CAO Yan, DONG Xing, CHAI Yi-feng

(School of Pharmacy, Second Military Medical University ,Shanghai 200433, China)

ObjectiveTo review the micro-dialysis coupled with chromatographic technologies in pharmaceutical analysisinvivo.MethodsThe relevant literatures were collected to make a summary of microdialysis coupled with chromatography technology in pharmaceutical analysisinvivo.ResultsandConclusionsAs a new sampling technology, microdialysis coupled with LC-MS had advantages of high sensitive, fast, simple, less interference, and no sample preparation. This technology had been rapidly promoted and applied, especially in the pharmacokinetic-pharmacodynamic studies which had broad application prospects.

microdialysis; LC-MS

國家自然科學(xué)基金資助委員會資助項(xiàng)目(30873196)；上海市科學(xué)技術(shù)委員會科研計(jì)劃項(xiàng)目(09dZ1975100).

呂狄亞(1984-)，女，碩士研究生. Tel: (021)81871337,E-mail:diyalv2008@yahoo.com.cn.

柴逸峰 . Tel: (021)81871201,E-mail:yfchai@smmu.edu.cn.

R917

A

1006-0111(2011)02-0093-05