• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同粒徑尿微晶的ζ電位、自相關(guān)曲線和聚集狀態(tài)

    2011-11-09 06:36:44李君君侯善華何節(jié)玉夏志月歐陽健明
    無機化學(xué)學(xué)報 2011年12期
    關(guān)鍵詞:微晶濾膜孔徑

    李君君 侯善華 何節(jié)玉 夏志月 歐陽健明

    (暨南大學(xué)生物礦化與結(jié)石病防治研究所,廣州 510632)

    不同粒徑尿微晶的ζ電位、自相關(guān)曲線和聚集狀態(tài)

    李君君 侯善華 何節(jié)玉 夏志月 歐陽健明*

    (暨南大學(xué)生物礦化與結(jié)石病防治研究所,廣州 510632)

    采用納米粒度儀和透射電子顯微鏡(TEM)比較研究了10例尿石癥患者和10例健康對照者的尿液經(jīng)不同孔徑濾膜(0.22、0.45、1.2、3.0、10 μm)過濾后,尿微晶平均粒徑(d)、粒度分布、自相關(guān)曲線、ζ電位和聚集狀態(tài)的變化。隨著濾膜孔徑由0.22 μm增至10 μm,患者尿微晶的d值由162 nm增至3 227 nm,自相關(guān)曲線平滑性變差,自相關(guān)時間(Ta)由1.92 ms增至 2100 ms,ζ由-2.65 mV減小至-9.21 mV,TEM顯示尿微晶尺寸差異大,部分尿微晶處于聚集狀態(tài)。而對照者尿微晶的d值僅由187 nm增加至1 010 nm,自相關(guān)曲線平滑,Ta由1.40 ms增加至6.67 ms,ζ平均值由-5.22 mV減小至-6.89 mV,TEM顯示尿微晶均勻分散,尺寸較小。上述結(jié)果表明:尿石患者的尿液體系不穩(wěn)定,其尿微晶聚集程度高,導(dǎo)致尿石癥形成的危險性增加。

    納米微晶;ζ電位;TEM;自相關(guān)曲線;聚集

    泌尿系結(jié)石(簡稱尿石)除含有少量(質(zhì)量百分?jǐn)?shù)<5%)的有機基質(zhì)(如蛋白質(zhì),類脂類等)外,主要組分為晶體物質(zhì),如草酸鈣(CaOxa)、尿酸、磷酸鈣等[1-2]。

    尿晶體與尿石的形成緊密相關(guān)。雖然對照者尿液中亦存在草酸鈣尿晶體[3],但尿石患者的草酸鈣尿晶體比對照者出現(xiàn)的頻率高,尺寸亦增大[3-4]。因此,在20世紀(jì)70年代曾經(jīng)把尿晶體作為尿石癥活躍程度的指數(shù)。但臨床實踐上,尿晶體的常規(guī)檢測并沒有得到廣泛的應(yīng)用[5-6]。

    尿微晶團聚和生長是結(jié)石長大的兩大主要因素。尿液過飽和導(dǎo)致了難溶鹽的成核(納米級,一般小于10 nm),然后晶核生長或聚集成病理尺寸的微晶(微米級,幾十微米),當(dāng)這些微晶滯留在尿道(自由粒子理論)或被尿道組織所固定(固定粒子理論)時,尿微晶將逐漸長大并最終形成尿石(毫米級,一般為幾毫米至幾厘米)[7]。

    前文[8-10]我們報道了尿石癥患者和健康對照者尿微晶的性質(zhì)差異及其放置不同時間后微晶的團聚程度差異。 本文采用不同孔徑(0.22、0.45、1.2、3.0和10 μm)的濾膜對10例CaOxa結(jié)石患者和10例對照者的尿液進行過濾,分別得到具有不同粒徑范圍的尿微晶,然后研究兩類尿液中不同尺寸范圍尿微晶的性質(zhì)差異和在成核、生長和聚集等方面存在的差異,這些性質(zhì)包括平均粒徑(從納米到微米)、粒度分布、自相關(guān)曲線、ζ電位和微晶相貌等。期望為闡明尿石癥的形成機制提供啟示。

    1 實驗部分

    1.1 試劑和儀器

    微孔濾膜 (孔徑:0.22、0.45、1.2、3.0 和 10 μm)(上海興亞公司)。常規(guī)化學(xué)試劑均為分析純試劑,所有玻璃器皿均用二次蒸餾水洗凈。

    1.2 尿液的收集與處理

    隨機收集暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院碎石中心10例草酸鈣結(jié)石患者和10例無結(jié)石病史對照者的空腹晨尿,參照前文[7]對尿液進行預(yù)處理,然后分別用0.22、0.45、1.2、3.0 和 10 μm 的微孔濾膜過濾,濾液備用。

    1.3 尿微晶的納米粒度儀檢測

    將上述經(jīng)不同孔徑過濾后的尿液超聲3 min后,用納米粒度儀立即檢測尿微晶的平均粒徑、粒度分布、自相關(guān)曲線和ζ電位。數(shù)據(jù)用x±s表示。

    1.4 尿微晶的TEM觀測

    上述備用尿液超聲3 min后,用微量進樣器取3 μL滴于銅網(wǎng)上,置于真空干燥器中干燥1 d,進行TEM觀測。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 尿石患者與對照者尿微晶的粒度分布差異

    2.明確區(qū)縣民宗僑臺等部門合署辦公的具體規(guī)定。厘清區(qū)縣黨委統(tǒng)戰(zhàn)部與民族宗教部門、臺辦、僑辦、外辦、僑聯(lián)等合署辦公的職責(zé)職能,對機構(gòu)設(shè)置、人員配備包括部門歸屬、科室設(shè)置、人員職數(shù)等作出具體規(guī)定。在區(qū)縣民族宗教部門同統(tǒng)戰(zhàn)部合署辦公后,應(yīng)明確將民族宗教部門保留在政府序列,并配足執(zhí)法人員,確保其執(zhí)法資格不受影響。

    10例尿石患者和10例健康對照者的尿樣經(jīng)不同孔徑濾膜過濾后,其尿微晶的粒度分布、平均粒徑、峰的數(shù)量分別具有相似性,代表性粒度分布圖如圖1a和1b所示??梢钥闯?,隨著濾膜孔徑由0.22 μm 增至 0.45、1.2、3.0 和 10 μm, 患者尿微晶的平均粒徑由165 nm依次增加至353、668、1 484和3 581 nm(圖1b);而對照者的平均粒徑由185 nm分別增加為 225、286、396 和 650 nm(圖 1a)。 可見,尿石患者尿液與對照者之間有明顯的差異性,且隨著濾膜孔徑從 0.22 μm 增加至 10 μm,尿石患者尿液中微晶的平均粒徑顯著增加,幅度為3 416 nm,而對照者的增加幅度較小,僅為465 nm。這說明患者尿液中大尺寸尿微晶的比例較對照者的大得多。

    經(jīng)不同孔徑濾膜(除 0.22 μm 外)過濾后,患者尿微晶的粒度分布或為單峰或大尺寸峰特強(圖1b),而健康對照者則為雙峰(圖1a)。這說明,對于尿石患者的尿微晶,在不同的粒徑范圍內(nèi),大粒徑的尿微晶在數(shù)量上均占絕對優(yōu)勢。而在健康對照者的尿微晶中,小尺寸尿微晶的數(shù)量較多,但也存在大尺寸的尿微晶,因此,在粒度分布圖上表現(xiàn)為雙峰。

    當(dāng)尿液用0.22 μm的濾膜過濾后,患者尿微晶的粒度分布圖為雙峰,其中較小的峰在10 nm以下(圖1b),這可能是該患者尿液中100~200 nm尿晶體的數(shù)量較少,而小于10 nm的微晶較多所致。而在對照者的尿樣中,100~200 nm的晶體含量較高,尿樣中40 nm以下的晶體數(shù)量所占比例較小,其表現(xiàn)的光散射強度相比100~200 nm的微晶很小,以至于檢測不出來,所以表現(xiàn)為單峰(圖1a)。因為圖1a和1b的縱坐標(biāo)均是光散射強度,而大尺寸微晶對光散射強度的貢獻遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于小尺寸顆粒。

    患者尿液中大尺寸微晶的高比例歸因于其存在的抑制劑較對照者少[11-12],導(dǎo)致在體內(nèi)相同的滯留時間內(nèi),患者尿微晶生長或聚集的程度較對照者的大得多。

    2.2 尿石患者與對照者尿微晶的平均粒徑差異

    隨著濾膜孔徑由 0.22 μm 增加至 0.45、1.2、3.0和10.0 μm,10例尿石癥患者尿微晶的平均粒徑(d)由 162±35 nm 依次增加至 (252±66)、(566±278)、(1164±460)和(3 227±875)nm(圖 2a)。 相比之下,10例健康對照者尿微晶的d由187±71 nm分別增加至(233±87)、(357±251)、(568±321)和(1010±554)nm??梢?,雖然尿微晶的粒徑均隨濾膜孔徑增大而增加,但均比相應(yīng)濾膜的孔徑要小得多。如經(jīng)孔徑10 μm的濾膜過濾后,尿微晶的d<4000 nm。這說明,經(jīng)孔徑10 μm的濾膜過濾時,5~10 μm的微晶很少能夠通過濾膜,這一結(jié)果有助于今后研究不同尺寸微晶的性質(zhì)時選擇合適孔徑的濾膜。

    2.3 尿石患者與對照者尿微晶的光強自相關(guān)函數(shù)差異

    尿微晶的光強自相關(guān)函數(shù)能夠反映微晶的大小和尿液的穩(wěn)定性[13]。例如,自相關(guān)曲線衰減越快,求得的自相關(guān)時間越短,表明尿微晶的粒徑越小。自相關(guān)曲線越平滑,表明尿液越穩(wěn)定;反之,自相關(guān)曲線上下波動則表明尿液不穩(wěn)定,尿微晶可能在逐步團聚[14]。

    圖1c和1d分別為對應(yīng)于圖1a和1b中兩類尿微晶的光強自相關(guān)曲線。隨著濾膜孔徑由0.22 μm增加至 0.45、1.2、3.0 和 10 μm, 患者尿微晶的自相關(guān)曲線變得越來越不平緩,衰減變化大(圖1d),其自相關(guān)時間由 1.92 ms增加至 4.09、20.5、147 和 2 100 ms,增幅顯著(214.53 ms·μm-1),表明這些尿樣不穩(wěn)定。而對照者尿微晶的自相關(guān)曲線都很平滑,衰減變化小(圖 1c),其自相關(guān)時間由1.40 ms分別增加至 1.62、2.41、4.65 和 6.67 ms,其增幅很小(0.53 ms·μm-1)。即:對于同一孔徑濾膜過濾的尿微晶,相比對照者,患者的自相關(guān)曲線衰減慢,曲線不平滑,波動性較大。這是由于患者尿液中的大尺寸尿微晶所占的比例大,且隨濾膜尺寸的增加而繼續(xù)增大,而粒子尺寸越大其光散射強度越大,因此,患者尿微晶的光散射強度和自相關(guān)時間均顯著大于對照者,且隨濾膜孔徑的增加而變化更加顯著。這說明患者尿液不穩(wěn)定,其尿微晶的生長或聚集速度較快,易形成結(jié)石。

    2.4 尿石患者與對照者的ζ電位差異

    尿液中尿微晶的生長是個緩慢的過程,而尿微晶的團聚可在短時間內(nèi)快速完成[15]。ζ電位的大小直接反映尿微晶之間的靜電排斥力。ζ電位絕對值越大,表明尿微晶之間的靜電排斥力也越大,尿微晶越難團聚。尿液的ζ電位與尿微晶表面電荷及其選擇性吸附的尿液中帶相反電荷的離子的濃度相關(guān)。

    圖3為兩類尿微晶經(jīng)不同孔徑濾膜過濾后的ζ電位變化。隨著濾膜孔徑由0.22 μm增加至0.45、1.2、3.0和10 μm,10例尿石患者尿微晶的ζ電位平均值由(-2.65±0.56)mV 分別減小至(-3.75±0.60)、(-4.63±0.69)、(-6.82±1.12)和(-9.21±2.11)mV(圖 3a),其變化幅度為6.56 mV。相比之下,對照者尿微晶的ζ電位平均值由(-5.22±0.96)mV依次減至(-5.34±0.82)、(-5.65±0.95)、(-6.61±0.91)和(-6.89±1.17)mV(圖3b),其變化幅度僅為1.67 mV,遠(yuǎn)小于患者的6.56 mV。

    從圖3還可以看出,尿液經(jīng)孔徑0.22、0.45和1.2 μm的濾膜過濾后,對照者尿微晶的ζ電位比患者的更負(fù);經(jīng)3.0 μm濾膜過濾后兩者差異不大;而經(jīng)10 μm濾膜過濾后,患者尿微晶的ζ電位(-9.21±2.11)mV比對照者(-6.89±1.17)mV更負(fù)。

    尿液為一膠體體系,尿液中微晶表面形成的雙電層導(dǎo)致了晶體表面與尿液之間存在電勢差,即ζ電位。ζ電位可近似表達為均勻帶電球形粒子的表面電勢[16]。式(1)中ζ為ζ電位,σ為粒子的表面電荷密度,ε為尿樣的介電常數(shù),κ為Debye-Hückel常數(shù)。尿微晶的ζ電位與粒子的表面電荷密度(σ)成正比。σ一方面與尿液中陰離子抑制劑的濃度有關(guān),另一方面與尿微晶吸附陰離子的能力有關(guān)。

    對照者尿液中小尺寸微晶的數(shù)量顯著多于患者(圖1a和1b)。由于此次所檢測的10例患者尿液均是CaOxa結(jié)石患者,CaOxa也是尿石的主要組分,而尿微晶與尿石組分之間存在相關(guān)性[17]。對于小尺寸的納米微晶,由于其存在的許多晶界和大量晶格缺陷[18],晶體表面電荷少,吸附陰離子的能力弱,ζ電位負(fù)值較小,此時陰離子濃度的影響對ζ電位起控制作用[19]。由于對照者尿液中含有比尿石患者尿液中種類更多、濃度更大或活性更強的抑制物質(zhì),如檸檬酸鹽、焦磷酸鹽等無機鹽和硫酸軟骨素、骨橋蛋白、腎鈣素、凝血酶原片斷Ⅰ等尿大分子[11-12],這些抑制劑大都帶負(fù)電荷。因此,當(dāng)尿液經(jīng)孔徑不大于1.2 μm的濾膜過濾后,測得的主要是小尺寸尿微晶的ζ電位,因而,對照者尿微晶的ζ電位比患者更負(fù)。

    患者尿液中微米級的大尺寸晶體數(shù)量顯著多于對照者。大尺寸尿微晶的表面晶格有序,結(jié)構(gòu)完整,晶體表面的晶化程度高,表面電荷多(如一水草酸鈣表面帶正電[20],但吸附陰離子后帶負(fù)電)。其吸附陰離子能力比小微晶的強得多,因此,雖然患者尿液中陰離子含量較對照者的低,但由于經(jīng)孔徑10 μm的濾膜過濾后,大尺寸尿微晶的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于小尺寸尿微晶,此時尿微晶吸附陰離子能力的差異對ζ電位的影響起控制作用。而患者尿液中大尺寸尿微晶的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照者,導(dǎo)致患者尿微晶的表面負(fù)電荷密度高,ζ電位絕對值大。

    由上可知,患者尿液中的小尺寸的亞微米尿微晶由于比對照者的所帶負(fù)電荷少,穩(wěn)定性差,易聚集長大形成微米晶體,從而為結(jié)石的形成埋下了隱患。

    2.5 尿石患者與健康對照者尿微晶的形貌差異

    采用TEM研究了尿石患者與對照者尿樣經(jīng)不同孔徑濾膜過濾后的形貌和尺寸,代表性TEM如圖4所示。

    尿石患者尿微晶的粒徑隨著濾膜孔徑的增加逐漸增大,粒度分布極不均勻。如經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾后,尿微晶粒徑從30 nm到300 nm不等(圖4a);而經(jīng)孔徑10 μm的濾膜過濾后,大多數(shù)尿微晶粒徑在 30~2700 nm 之間(圖 4b)。

    相比之下,對照者尿液經(jīng)孔徑0.45 μm的濾膜過濾后,大多數(shù)尿微晶粒徑在100~200 nm之間(圖4c);而經(jīng)孔徑10 μm的濾膜過濾后,大多數(shù)尿微晶粒徑在 50~1 000 nm 之間(圖 4d)。

    比較圖4a、4b與圖4c、4d可以看出,對照者尿微晶的聚集程度明顯小于尿石患者,這歸因于上面提到的對照者尿液中含有種類更多、濃度更大或活性更強的陰離子抑制物質(zhì),這些陰離子抑制劑在尿微晶特別是表面帶正電荷的草酸鈣晶體表面吸附后,使得微晶表面負(fù)電荷密度增加,其ζ電位變負(fù),晶體表面離子間斥力增加,從而抑制晶體聚集。因此,對照者尿液中的微晶分散性較好,而尿石患者尿液中的微晶發(fā)生了聚集,這增加了尿石癥形成的危險性。

    3 結(jié) 論

    隨著濾膜孔徑從 0.22 μm 增加至 10 μm,尿石患者尿微晶平均粒徑的增幅(~3 000 nm)顯著大于對照者 (~800 nm)。對照者的自相關(guān)曲線比患者平滑,自相關(guān)時間Ta隨孔徑增加而增大,但患者的Ta增幅(214.5 ms·μm-1)顯著大于對照者(0.33 ms·μm-1)。兩類尿微晶的平均ζ電位亦隨濾膜孔徑增加而變負(fù),當(dāng)濾膜孔徑不大于1.2 μm時,對照者的ζ電位絕對值比患者大,兩類尿液中的陰離子濃度差異為主要控制因素;而當(dāng)濾膜孔徑為10 μm時,患者的ζ電位絕對值比對照者大,兩類尿微晶的晶格完整程度差異為主要控制因素。尿石患者的尿微晶比對照者容易團聚。

    [1]Al-Atar U,Bokov A A,Marshall D,et al.Chem.Mater.,2010,22(4):1318-1329

    [2]Saw N K,Rao P N,Kavanagh J P.Urol.Res.,2008,36:11-15

    [3]Robertson W G.Physical Chemical Aspects of Calcium Stone Formation in the Urinary Tract.New York:Plenum Press,1976.

    [4]Werness P G,Bergert J H,Smith L H.J.Cryst.Growth,1981,53(1):166-181

    [5]Daudon M,Hennequin C,Boujelben G,et al.Kidney Int.,2005,67:1934-1943

    [6]Daudon M,Jungers P.Nephron.Physiol.,2004,98:31-36

    [7]He J Y,Deng S P,Ouyang J M.IEEE Trans.Nanobiosci.,2010,9(2):156-163

    [8]ZHAO Mei-Xia(趙美霞),XU Xiao-Jing(許小晶),OUYANG Jian-Ming(歐陽健明).J.Jinan Univ.:Nat.Sci.(Jinan Daxue Xuebao:Ziran Kexue Ban),2007,28(5):486-490

    [9]HUANG Zhi-Jie(黃志杰),LI Jun-Jun(李君君),HE Jie-Yu(何節(jié)玉),et al.Spectrosc,Spectr.Anal.(Guangpuxue Yu Guangpu Fenxi),2010,30(7):1913-917

    [10]LIU Yi-Ming(柳一鳴),HE Jie-Yu(何節(jié)玉),KUANG Li(鄺荔),et al.Chem.J.Chinese Universities(Gaodeng Xuexiao Huaxue Xuebao),2010,31(5):885-891

    [11]Koka R M,Huang E,Lieske J C.Am.J.Physiol.Renal.Physiol.,2000,278:989-998

    [12]Michelacci Y M,Glashan R Q,Schor N.Kidney Int.,1989,36(6):1022-1028

    [13]Gui B S,Huang Z J,Xu X J,et al.J.Nanosci.Nanotechnol.,2010,10(8):5232-5241

    [14]Frisken B J.Appl.Opt.,2001,40(24):4087-4091

    [15]He J Y,Ouyang J M,Yang Y E.Mater.Sci.Eng.C,2010,30:878-885

    [16]Pawar N,Bohidar H B.J.Chem.Phys.,2009,131(045103):1-7

    [17]Gui B S,Xie R,Yao X Q,et al.Bioinorg.Chem.Appl.,2009,925297:1-7

    [18]CHEN Quan(陳權(quán)),YUN Shou-Rong(惲壽榕).J.Synth.Crys.(Rengong Jingti Xuebao),2000,29(1):90-93

    [19]Sonavane G,Tomoda K,Makino K.Coll.Surf.B,2008,66(2):274-280

    [20]OUYANG Jian-Ming(歐陽健明),YAO Xiu-Qiong(姚秀瓊),SU Ze-Xuan(蘇澤軒),et al.Sci.China Ser.B(Zhongguo Kexue B),2003,33(1):14-19

    ζ Potential,Autocorrelation Curve and Agglomeration of Urinary Crystallites with Different Size

    LI Jun-Jun HOU Shan-Hua HE Jie-Yu XIA Zhi-Yue OUYANG Jian-Ming*
    (Institute of Biomineralization and Lithiasis Research,Jinan University,Guangzhou 510632,China)

    By means of nanoparticle size analyzer and transmission electron microscopy (TEM),the effect of membrane pore size on the properties of crystallites in urine of 10 lithogenic patients and 10 healthy subjects were comparatively investigated after urines were filtrated through microporous membrane with a size of 0.22,0.45,1.2,3.0,10 μm,respectively.These properties include average particle size(d),size distribution,intensityautocorrelation curve,ζ potential and aggregation state.With the increase of pore size from 0.22 μm to 10 μm,d value of the urinary crystallites in urine of lithogenic patients increased from 162 nm to 3 227 nm,the autocorrelation time(Ta)increased from 1.92 ms to 2 100 ms,the average value of ζ decreased from-2.65 mV to-9.21 mV,respectively;and the autocorrelation curves were of fluctuating and unsmooth,TEM showed that the size difference of the crystallites was large and some crystallites were in the aggregation state.However,for the crystallites in urine of healthy subjects,d increased only from 187 nm to 1010 nm,Taincreased from 1.40 ms to 6.67 ms,the average value of ζ decreased from-5.22 mV to-6.89 mV,the autocorrelation curves were of regular and smooth,TEM showed that the crystallites were well-dispersed with a smaller size.The above results demonstrated that the urinary system of lithogenic patients is unstable and the aggregation degree of their urinary ctystalllites is high.So the risk of urolithiasis formation of urinary crystallites of patients is larger than that of healthy subjects.

    nanocrystalline;ζ potential;TEM;autocorrelation curve;aggregation

    O614.23+1

    A

    1001-4861(2011)12-2425-06

    2011-04-01。收修改稿日期:2011-05-24。

    廣東省科技攻關(guān)項目(No.2009B030801236)和國家自然科學(xué)基金(No.30672103)資助項目。*

    。 E-mail:toyjm@jnu.edu.cn

    猜你喜歡
    微晶濾膜孔徑
    鋰鋁硅微晶玻璃不混溶及其析晶探討
    溶膠-凝膠法制備高性能ZrO2納濾膜
    A case report of acupuncture of dysphagia caused by herpes zoster virus infection
    不同滲透率巖芯孔徑分布與可動流體研究
    分布式孔徑相參合成雷達技術(shù)
    基于子孔徑斜率離散采樣的波前重構(gòu)
    Li2O加入量對Li2O-Al2O3-SiO2微晶玻璃結(jié)合劑性能的影響
    水熱法制備NaSm(MoO4)2-x(WO4)x固溶體微晶及其發(fā)光性能
    荷負(fù)電手性殼聚糖納復(fù)合濾膜的制備與性能研究
    大孔徑淺臺階控制爆破在重慶地區(qū)的應(yīng)用
    重慶建筑(2014年12期)2014-07-24 14:00:32
    亚洲片人在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 男人和女人高潮做爰伦理| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美3d第一页| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产av在哪里看| 男女床上黄色一级片免费看| 偷拍熟女少妇极品色| 18禁在线播放成人免费| 亚洲黑人精品在线| 中文字幕熟女人妻在线| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美黑人欧美精品刺激| 一二三四社区在线视频社区8| 成人特级av手机在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久99热这里只有精品18| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲美女黄片视频| 久久久久久久久大av| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 成人无遮挡网站| 国产成人aa在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| xxx96com| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲av五月六月丁香网| 国产视频一区二区在线看| 日韩欧美 国产精品| 国产三级在线视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 深夜精品福利| 国产成人福利小说| 狠狠狠狠99中文字幕| 最近最新免费中文字幕在线| 一本久久中文字幕| 午夜福利在线观看吧| 天美传媒精品一区二区| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美激情在线99| 午夜福利在线观看吧| 在线观看免费午夜福利视频| 国产中年淑女户外野战色| x7x7x7水蜜桃| 久久久国产成人精品二区| 日本在线视频免费播放| 高清在线国产一区| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品久久电影中文字幕| 99热这里只有精品一区| 久久久精品大字幕| 国产av麻豆久久久久久久| 搡老熟女国产l中国老女人| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲无线观看免费| 久久精品国产综合久久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| xxx96com| 国产伦精品一区二区三区四那| 窝窝影院91人妻| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产成人av教育| 最近在线观看免费完整版| 1024手机看黄色片| 午夜福利在线观看吧| 俺也久久电影网| 亚洲最大成人手机在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲七黄色美女视频| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲av电影在线进入| 久久久精品欧美日韩精品| 丰满乱子伦码专区| 色综合站精品国产| 国产三级黄色录像| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲18禁久久av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美性猛交黑人性爽| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av电影在线进入| or卡值多少钱| 90打野战视频偷拍视频| 九色成人免费人妻av| 国产成年人精品一区二区| 在线免费观看的www视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 少妇丰满av| 国产一区二区激情短视频| 亚洲av电影在线进入| 一二三四社区在线视频社区8| 18禁在线播放成人免费| 草草在线视频免费看| 色吧在线观看| 国产成人系列免费观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 好男人电影高清在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产精品av视频在线免费观看| 日韩欧美三级三区| 精品国产美女av久久久久小说| 免费av毛片视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 哪里可以看免费的av片| 88av欧美| 国产久久久一区二区三区| 国产69精品久久久久777片| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲精品456在线播放app | 少妇丰满av| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 偷拍熟女少妇极品色| 成人性生交大片免费视频hd| 成熟少妇高潮喷水视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 欧美中文综合在线视频| 午夜视频国产福利| 小说图片视频综合网站| 久久人人精品亚洲av| 一二三四社区在线视频社区8| 成人永久免费在线观看视频| 青草久久国产| 国产精品女同一区二区软件 | 色视频www国产| 国产伦人伦偷精品视频| 美女高潮的动态| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 很黄的视频免费| 真人做人爱边吃奶动态| 国产真人三级小视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 美女免费视频网站| 两个人视频免费观看高清| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产成+人综合+亚洲专区| 丁香欧美五月| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产成人a区在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av不卡在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 毛片女人毛片| 一本综合久久免费| 国产精品一及| 亚洲欧美激情综合另类| 在线观看66精品国产| 3wmmmm亚洲av在线观看| 色吧在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜福利在线在线| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 丝袜美腿在线中文| 亚洲最大成人手机在线| 91麻豆av在线| 日韩欧美国产在线观看| 91九色精品人成在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 热99在线观看视频| 午夜日韩欧美国产| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 可以在线观看毛片的网站| 激情在线观看视频在线高清| 久久久久免费精品人妻一区二区| 看黄色毛片网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美+日韩+精品| 久久精品91蜜桃| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国内揄拍国产精品人妻在线| 丰满乱子伦码专区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| xxxwww97欧美| 黑人欧美特级aaaaaa片| 无限看片的www在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 男人舔奶头视频| 久久这里只有精品中国| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 成人午夜高清在线视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲av不卡在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩欧美 国产精品| 国产主播在线观看一区二区| 久久香蕉国产精品| 久久6这里有精品| 99精品久久久久人妻精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩精品青青久久久久久| 国产欧美日韩一区二区三| 综合色av麻豆| 国产成人影院久久av| 国产中年淑女户外野战色| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 免费电影在线观看免费观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产私拍福利视频在线观看| 香蕉丝袜av| 久久九九热精品免费| 久久草成人影院| 丁香六月欧美| 1000部很黄的大片| 婷婷六月久久综合丁香| 在线观看午夜福利视频| 最新美女视频免费是黄的| av视频在线观看入口| 国产亚洲精品久久久com| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 免费看a级黄色片| 淫秽高清视频在线观看| 在线观看日韩欧美| 国产色婷婷99| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 男女床上黄色一级片免费看| 日本a在线网址| 美女高潮的动态| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜爽天天搞| 午夜福利成人在线免费观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| av天堂在线播放| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 精品一区二区三区视频在线 | 国产精品一及| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产在视频线在精品| 亚洲专区国产一区二区| 婷婷六月久久综合丁香| www.www免费av| 国产在视频线在精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 免费av毛片视频| 日韩高清综合在线| 日本一本二区三区精品| 亚洲色图av天堂| 男女午夜视频在线观看| 色综合站精品国产| 高清毛片免费观看视频网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 天堂√8在线中文| 最近在线观看免费完整版| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品色激情综合| 午夜精品在线福利| 欧美最黄视频在线播放免费| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲av熟女| 极品教师在线免费播放| 性欧美人与动物交配| 国产午夜精品论理片| 美女大奶头视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品亚洲一级av第二区| 18禁国产床啪视频网站| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲成av人片在线播放无| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久精品91无色码中文字幕| 在线播放国产精品三级| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 毛片女人毛片| 香蕉久久夜色| 少妇人妻一区二区三区视频| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产成+人综合+亚洲专区| 热99在线观看视频| 国产真实乱freesex| 人人妻人人看人人澡| 亚洲自拍偷在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久国产精品影院| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99热6这里只有精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久99热这里只有精品18| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久久久久久中文| 日韩欧美精品v在线| 中国美女看黄片| 国产色婷婷99| 2021天堂中文幕一二区在线观| а√天堂www在线а√下载| 午夜福利成人在线免费观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久国产精品麻豆| 性欧美人与动物交配| 可以在线观看毛片的网站| 国产一区二区三区视频了| 天堂动漫精品| 国产高清有码在线观看视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 老汉色∧v一级毛片| 综合色av麻豆| 色av中文字幕| 欧美三级亚洲精品| 欧美一区二区国产精品久久精品| e午夜精品久久久久久久| 国产乱人伦免费视频| 88av欧美| 亚洲成a人片在线一区二区| 99视频精品全部免费 在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 午夜福利成人在线免费观看| 黄色日韩在线| 亚洲av美国av| 欧美色视频一区免费| 9191精品国产免费久久| 欧美在线黄色| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 美女黄网站色视频| 国内精品久久久久久久电影| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久人妻av系列| 日本五十路高清| 十八禁人妻一区二区| 在线观看舔阴道视频| 美女黄网站色视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 女同久久另类99精品国产91| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 91在线观看av| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 全区人妻精品视频| 91在线精品国自产拍蜜月 | 色吧在线观看| 久久草成人影院| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 成人午夜高清在线视频| 麻豆一二三区av精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩有码中文字幕| 一个人看视频在线观看www免费 | 日韩欧美国产在线观看| av中文乱码字幕在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲午夜理论影院| 他把我摸到了高潮在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 激情在线观看视频在线高清| 久久久久久大精品| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产真实伦视频高清在线观看 | www日本黄色视频网| 成人av在线播放网站| 婷婷精品国产亚洲av| 成人特级av手机在线观看| 国产久久久一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品影院6| 国产精品 欧美亚洲| 国产av在哪里看| 男人的好看免费观看在线视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产激情偷乱视频一区二区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲中文日韩欧美视频| avwww免费| 国产成人aa在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 岛国视频午夜一区免费看| www国产在线视频色| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 在线免费观看的www视频| 亚洲人成网站在线播| 日韩欧美国产一区二区入口| 成年人黄色毛片网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久久久久久久久黄片| 国产97色在线日韩免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品国产三级普通话版| 国产美女午夜福利| 九九在线视频观看精品| 欧美日韩乱码在线| 99热精品在线国产| 午夜免费观看网址| 人妻久久中文字幕网| 成人国产一区最新在线观看| 欧美乱妇无乱码| 亚洲色图av天堂| 观看美女的网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美午夜高清在线| 99热6这里只有精品| 精品久久久久久久末码| 欧美大码av| www日本黄色视频网| aaaaa片日本免费| 不卡一级毛片| 国产精品久久视频播放| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产综合懂色| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美极品一区二区三区四区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲人成电影免费在线| 久久香蕉精品热| 一个人观看的视频www高清免费观看| 香蕉久久夜色| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产色爽女视频免费观看| 久久这里只有精品中国| 99久国产av精品| 亚洲自拍偷在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 俺也久久电影网| 免费av不卡在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品久久久久久久久免 | 久久草成人影院| 欧美三级亚洲精品| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久国产精品影院| 一夜夜www| 欧美高清成人免费视频www| 国产黄a三级三级三级人| 国产在线精品亚洲第一网站| 黄色女人牲交| www国产在线视频色| 嫩草影视91久久| 欧美色视频一区免费| 国产99白浆流出| 51午夜福利影视在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 久久精品综合一区二区三区| 观看免费一级毛片| av欧美777| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| h日本视频在线播放| 久久久精品大字幕| 国产一区二区在线观看日韩 | 搞女人的毛片| 欧美性感艳星| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 成人精品一区二区免费| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久久久久久午夜电影| 99久久精品一区二区三区| 成年女人永久免费观看视频| 国产探花在线观看一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲成人中文字幕在线播放| aaaaa片日本免费| 亚洲精品在线观看二区| 无人区码免费观看不卡| 久久久久久人人人人人| 1024手机看黄色片| 婷婷亚洲欧美| 久久6这里有精品| 亚洲av五月六月丁香网| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 一个人看视频在线观看www免费 | 欧美+日韩+精品| 超碰av人人做人人爽久久 | 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成人亚洲精品av一区二区| av欧美777| 99热这里只有精品一区| av欧美777| 日本三级黄在线观看| 99久久精品热视频| 国产久久久一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日本黄大片高清| 久久久国产成人免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 男女视频在线观看网站免费| 国产免费男女视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品野战在线观看| 波多野结衣高清作品| 国产激情欧美一区二区| 天堂√8在线中文| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲,欧美精品.| 午夜久久久久精精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品久久久久久,| 性欧美人与动物交配| 人人妻人人澡欧美一区二区| 热99re8久久精品国产| 老熟妇仑乱视频hdxx| 成年人黄色毛片网站| 国产极品精品免费视频能看的| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产毛片a区久久久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 又黄又粗又硬又大视频| 69人妻影院| 色老头精品视频在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 叶爱在线成人免费视频播放| 中文资源天堂在线| 淫秽高清视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 色综合站精品国产| 国产激情欧美一区二区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品,欧美在线| 午夜久久久久精精品| 国产91精品成人一区二区三区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久久成人免费电影| 精品久久久久久久久久久久久| 国产免费av片在线观看野外av| svipshipincom国产片| 99久久精品热视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| www.www免费av| 欧美三级亚洲精品| 欧美色视频一区免费| 97碰自拍视频| aaaaa片日本免费| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人a区在线观看| 成人特级av手机在线观看| 国产探花极品一区二区| 91久久精品国产一区二区成人 | 一区福利在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 99久久精品热视频| 国产综合懂色| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产精品电影一区二区三区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 午夜日韩欧美国产| 欧美一区二区亚洲| 亚洲欧美日韩东京热| 最近最新免费中文字幕在线| 久久国产精品影院| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产爱豆传媒在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 中文字幕av成人在线电影| 久久久久性生活片| 国产成人系列免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美中文综合在线视频| 亚洲激情在线av| xxx96com| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 搡老妇女老女人老熟妇| 网址你懂的国产日韩在线|