HPLC測定女貞子及其制劑益腎靈顆粒中紅景天苷的含量

李輝 張艷 徐漢斌 邵曉霞

中藥女貞子為木犀科植物女貞(Ligustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果實(shí)，是我國傳統(tǒng)的扶正固本藥物，含多種活性成分，其中紅景天苷亦為其成分之一［1］。紅景天苷具有擴(kuò)張阻力血管、抗心肌缺血［2］、抗纖維化等多種藥理作用［3］。但由于紅景天藥材資源匱乏，價(jià)格昂貴。女貞子藥材主產(chǎn)于江蘇、河南、山西、甘肅等地，極易得到，且價(jià)格便宜。如能對女貞子中的紅景天苷進(jìn)行有效利用，其開發(fā)價(jià)值不言而喻。益腎靈顆粒為《中國藥典》2010版一部品種［4］，含有梔子、女貞子等多味藥材。其中紅景天苷的TLC鑒別作為該品種錄入《中國藥典》2010版時(shí)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中新增的鑒別項(xiàng)目，由此可以看出女貞子中紅景天苷的成分正在逐漸被認(rèn)可。為此，我們對女貞子藥材和益腎靈顆粒中所含的紅景天苷進(jìn)行含量測定。

1 儀器、試劑與樣品

1.1 儀器 756-MC型分光光度計(jì)，KQ-50B型超聲波振蕩儀，F(xiàn)W80微型高速萬能粉碎機(jī)，島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，檢測器SPD-M10AVP。

1.2 試劑與樣品 紅景天苷對照品:購自中國藥品生物制品檢定所(編號(hào)110810-200404，供含量測定用);女貞子藥材、益腎靈顆粒樣品:南京中山制藥有限公司提供。試藥:均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm);流動(dòng)相:甲醇-水(15∶85);流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣量:10 μl;檢測波長:275 nm。

1.2 女貞子藥材供試品溶液的制備 取女貞子藥材粉成細(xì)粉，粉末過3號(hào)篩。精密稱取藥材粉末約2 g，加甲醇50 ml，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干后，殘?jiān)昧鲃?dòng)相使溶解，移至10 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為藥材供試品溶液。

1.3 益腎靈顆粒供試品溶液的制備 取本品粉成細(xì)粉，精密稱取粉末約20 g，按照“女貞子藥材供試品溶液的制備”方法制備，作為制劑供試品溶液。

1.4 對照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對照品適量，加流動(dòng)相制成1 ml含有0.1344 ml的紅景天苷的溶液，作為對照品溶液。見色譜圖1～3。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取紅景天苷上述對照品溶液1、3、5、6、7、9 ml至 10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。按上述色譜條件分析，每次進(jìn)樣10 μl，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y=295594X-20771，R2=0.9994(n=7)，紅景天苷在0.134～1.344 g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

1.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品溶液，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值，其RSD為1.7%。

1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取女貞子藥材樣品6份，分別按藥材供試品溶液的制備方法制備、測定，結(jié)果紅景天苷的含量分別為:0.424、0.426、0.432、0.441、0.431、0.444 mg/g，平均為0.432 mg/g，RSD為1.9%，證明該方法重現(xiàn)性良好。

1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一藥材供試液，按上述色譜條件測試5次，每次間隔2 h，測得峰面積積分值，其RSD為1.7%。證明該供試液8 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.9 回收率測定 精密稱取已知紅景天苷含量的女貞子藥材5份，分別加入一定量的紅景天苷對照品，照2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行供試品溶液的制備并如法測定，計(jì)算加樣回收率，測得紅景天苷的平均回收率為96.3%，RSD為1.5%。結(jié)果見表1。

圖1 紅景天苷對照品HPLC圖譜

圖2 女貞子藥材HPLC圖譜

圖3 益腎靈顆粒HPLC圖譜

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.10 女貞子藥材及益腎靈顆粒含量測定 分別取兩個(gè)產(chǎn)地的藥材樣品和3個(gè)批號(hào)的益腎靈顆粒樣品，按上述方法進(jìn)行含量測定，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

2 結(jié)果和討論

3.1 經(jīng)紫外分光光度計(jì)掃描，紅景天苷在275 nm處有最大吸收。

3.2 采用HPLC測定紅景天苷含量的方法在《中國藥典》2010年版已有收載［6］，但采用流動(dòng)相溶解樣品不但可以保證樣品含量的有效轉(zhuǎn)移，而且也有效地去除脂溶性的雜質(zhì)。不僅保證了樣品的分離效果，同時(shí)也有效地保護(hù)了色譜柱。

3.3 通過陰性試驗(yàn)，益腎靈顆粒樣品無干擾。

3.4 由于女貞子藥材樣品量較少，而且未能和益腎靈顆粒樣品進(jìn)行一一對應(yīng)，需要在后續(xù)的試驗(yàn)中不斷積累數(shù)據(jù)，以便確認(rèn)紅景天苷在益腎靈顆粒生產(chǎn)過程中的轉(zhuǎn)移率。

該法測定女貞子藥材和益腎靈顆粒中紅景天苷的含量，操作簡便，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于女貞子藥材和益腎靈顆粒的質(zhì)量控制。

［1］ 趙繼宵，楊瑾，董根玲，等.女貞子研究進(jìn)展.中華醫(yī)學(xué)寫作雜志，2004，11(18):1599-1601.

［2］ 胡敏.紅景天苷對心血管系統(tǒng)作用的研究.國外醫(yī)學(xué)心血管疾病分冊，2003，30(5):298-300.

［3］ 王曉東，劉永忠，劉永剛.紅景天苷體外抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2004，15(3):138-139.

［4］ 《中國藥典》一部.2010，1027-1028.