• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    固相轉(zhuǎn)染HPV16-siRNA對荷宮頸癌細(xì)胞SiHa小鼠瘤體體積及P53、P16表達(dá)的影響*

    2011-10-24 02:02:15廖百花馮亦軍曾祿賢肖小敏
    中國病理生理雜志 2011年3期
    關(guān)鍵詞:瘤體靶向宮頸癌

    廖百花, 馮亦軍, 曾祿賢, 肖小敏

    (1 廣東省第二人民醫(yī)院婦科, 廣東 廣州 510317;2暨南大學(xué)第一臨床學(xué)院婦產(chǎn)科, 廣東 廣州510633)

    固相轉(zhuǎn)染HPV16-siRNA對荷宮頸癌細(xì)胞SiHa小鼠瘤體體積及P53、P16表達(dá)的影響*

    廖百花1, 馮亦軍1, 曾祿賢1, 肖小敏2△

    (1廣東省第二人民醫(yī)院婦科, 廣東 廣州 510317;2暨南大學(xué)第一臨床學(xué)院婦產(chǎn)科, 廣東 廣州510633)

    目的觀察靶向基因治療后不同時點荷宮頸癌細(xì)胞小鼠HPV16-DNA、瘤體體積、P53及P16蛋白的變化,探討在體固相轉(zhuǎn)染HPV16-siRNA的有效性。方法采用 SiHa細(xì)胞皮下注射建立荷宮頸癌細(xì)胞SCID小鼠模型。制備HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝膠。將40只荷宮頸癌細(xì)胞SCID小鼠隨機(jī)分為對照組8只和研究組32只和研究組使用HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝膠進(jìn)行基因治療,對照組僅使用Lipo2000-卡波姆凝膠處理;分別于治療后4 d、8 d、12 d、16 d處死小鼠,每個時點研究組處死8只、對照組處死2只。PCR檢測兩組小鼠瘤體中HPV16-DNA滴度,測各時點的瘤體體積,常規(guī)病理切片檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài),免疫組化檢測P16及P53的表達(dá)。結(jié)果(1)研究組治療后8 d及12 d時點瘤體內(nèi)HPV16-DNA明顯降低,與對照組之間的差異顯著(P<0.05),4 d及16 d 2個時點與對照組之間的差異不顯著(P>0.05);(2)治療后12 d瘤體平均體積明顯縮小,與對照組之間的差異顯著(P<0.05);(3)轉(zhuǎn)染后12 d腫瘤細(xì)胞核異質(zhì)性較對照組減輕,核漿比例減??;(4)P16的表達(dá)強(qiáng)度在各時點研究組與對照組之間的差異不顯著(P>0.05);治療后8 d及12 d研究組P53 的表達(dá)強(qiáng)度明顯降低,與對照組之間的差異顯著(P<0.05)。結(jié)論SCID小鼠所荷宮頸癌細(xì)胞瘤體經(jīng)靶向轉(zhuǎn)染HPV16-siRNA后8 d及12 d時點瘤體內(nèi)HPV16-DNA和P53均較對照組明顯下降,12 d瘤體體積較對照組明顯下降;在體固相轉(zhuǎn)染siRNA可以在一定時段內(nèi)有效抑制HPV-DNA的復(fù)制及腫瘤的生長速度。

    宮頸腫瘤; RNA干擾; 人乳頭狀瘤病毒; P53蛋白; P16蛋白

    人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染與宮頸癌關(guān)系密切,但無有效臨床治療方法;近年來的研究發(fā)現(xiàn),RNA干擾(RNA interference,RNAi)能有效抑制HPV復(fù)制[1-3],為宮頸持續(xù)性HPV感染的治療提供了新的策略及理論依據(jù)。但目前眾多的研究均是在液相條件下對離體細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實驗,在體細(xì)胞進(jìn)行固相siRNA轉(zhuǎn)染的研究目前鮮見報道。前期我們設(shè)計了一種含HPV16 靶向siRNA的局部外用藥,并證實可以經(jīng)固相途徑轉(zhuǎn)染siRNA進(jìn)入宮頸上皮;利用該法對荷宮頸癌SCID小鼠瘤體進(jìn)行基因治療,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后7 d治療組小鼠瘤體組織中HPV 16-DNA的滴度較對照組明顯降低[4]。由于宮頸HPV感染動物模型目前尚未建立,同類研究多采用HPV陽性腫瘤細(xì)胞(如SiHa細(xì)胞)對SCID小鼠皮下注射建立荷宮頸癌模型進(jìn)行[5,6];本研究繼續(xù)利用荷宮頸癌細(xì)胞小鼠模型進(jìn)行固相轉(zhuǎn)染基因治療,檢測治療后不同時點(轉(zhuǎn)染后4 d、8 d、12 d、16 d)HPV16-DNA,結(jié)合宮頸癌瘤體體積、病理以及P16、P53的表達(dá)等情況,進(jìn)一步探討在體細(xì)胞固相轉(zhuǎn)染siRNA的有效性。

    P16是近年來發(fā)現(xiàn)的多種腫瘤抑制基因,參與細(xì)胞周期的調(diào)控,控制細(xì)胞的生長與分化,直接參與腫瘤的形成與進(jìn)展。有研究[7]探討了CIN及子宮頸癌中P16表達(dá)及其意義,結(jié)果顯示:P16陽性表達(dá)率從子宮頸正常組、CIN I組、CIN II組、CINⅢ組呈上升趨勢,與子宮頸正常組比較,P16的陽性表達(dá)率差異均顯著(P<0.01),提示P16的高表達(dá)是子宮頸正常組織向CIN、宮頸癌發(fā)生過程中的早期事件,研究者認(rèn)為P16蛋白表達(dá)異常可作為臨床評價腫瘤生物學(xué)行為及判斷預(yù)后的輔助指標(biāo)。P53基因是重要的抑癌基因,作為轉(zhuǎn)錄因子,通過阻止細(xì)胞復(fù)制和發(fā)動細(xì)胞凋亡保持基因組的穩(wěn)定性,維持細(xì)胞正常生長,抑制細(xì)胞惡性增殖,對生長起負(fù)調(diào)節(jié)作用。若該基因由于突變、丟失或重排而失活,細(xì)胞可能發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變;它的失活表現(xiàn)為突變型P53的過度表達(dá)。突變型P53蛋白不僅失去了正常的抑癌作用,而且具有促進(jìn)正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的作用[8,9]。所以,我們把P16及P53蛋白作為本次研究的檢測指標(biāo)之一。

    材 料 和 方 法

    1材料

    1.1siRNA的設(shè)計及標(biāo)記 siRNA由廣州銳博生物科技有限公司設(shè)計并合成(針對HPV16,設(shè)計長度為21nt),正義鏈5′-GAGGTATATGACTITGCTTdTdT-3′,反義鏈3′-AAGCAAAGTCATATACCTCdTdT-5′,批號為siL09330161940, 20 nmol/瓶, MV: 13797.91,-20 ℃密封保存。

    1.2材料 LipofectamineTM2000, Invitrogen產(chǎn)品(批號為534294;規(guī)格:1.5 mL/支,1 g/L;-20 ℃保存)。 三乙醇胺:天津市富宇精細(xì)化工有限公司(批號為 090407);卡波姆940為Mbchem產(chǎn)品(批號為 20080228)。 SiHa細(xì)胞由南方醫(yī)科大學(xué)婦產(chǎn)科教研室尹倩碩士饋贈。SCID純系小鼠40只,購自中山大學(xué)動物實驗中心,4-6周齡,雌性,按普通級清潔飼養(yǎng)(合格證號為2008A153)。單克隆小鼠抗人P16/P53蛋白Ⅰ抗、Ⅱ抗試劑均購自Dako。

    2方法

    2.1建立荷宮頸癌裸鼠模型[10]SiHa細(xì)胞于RPMI-1640全培養(yǎng)基中培養(yǎng), 其中含胎牛血清濃度為10%,青霉素1×105U/L, 鏈霉素100 mg/L,在恒溫培養(yǎng)箱中以5% CO2、37 ℃及飽和濕度條件下培養(yǎng)4-5 d,胰酶消化,用PBS重懸細(xì)胞并調(diào)細(xì)胞密度為5×1010cells/L,于SCID小鼠側(cè)肋部接種,接種量為0.1 mL,飼養(yǎng)21 d,制作宮頸癌裸鼠模型。成瘤期平均 18 d,成瘤率100%。

    2.2藥物配制 第1步:取6 μL LipofectamineTM2000加注射雙蒸水稀釋至100 μL。第2步: HPV16-siRNA加雙蒸水1 mL稀釋,稀釋后取50 μL HPV16-siRNA溶液加50 μL LipofectamineTM2000的溶液配成HPV16-siRNA-LipofectamineTM2000混合液。第3步: HPV16-siRNA-LipofectamineTM2000-卡波姆凝膠劑配制:取卡波姆940凝膠1 g,甘油10 g,置于研缽中研勻,并加適量蒸餾水,慢慢滴加三乙醇胺,邊加邊攪,使成凝膠, 加蒸餾水至20 g,剛好形成凝膠。取0.5 g凝膠,加人 10 μL HPV16-siRNA-脂質(zhì)體適量攪勻,配制成HPV16-siRNA-LipofectamineTM2000-卡波姆凝膠劑(每天治療前30 min配制好即可)。

    2.3方法 將40只荷瘤SCID小鼠隨機(jī)分為研究組(n=32)及對照組(n=8),以游標(biāo)卡尺分別測量瘤體的最長徑線(a)和最短徑線(b),并記錄相關(guān)數(shù)據(jù);研究組小鼠每天在瘤體表面涂HPV16-siRNA-LipofectamineTM2000-卡波姆凝膠劑0.5 mL,再以無菌輸液貼覆蓋瘤體,避免凝膠脫失,共7 d;對照組瘤體表面僅涂LipofectamineTM2000-卡波姆凝膠,每天1次,共7 d,方法同研究組。對照組與研究小鼠均隨機(jī)分為4組(研究組n=8、對照組n=2),分別于治療結(jié)束后4 d、8 d、12 d和16 d處死,按治療前方法測瘤體徑線后取瘤體組織,一部分石蠟包埋供免疫組化檢測P16、P53蛋白及常規(guī)病理檢查觀察細(xì)胞形態(tài),其余部分存-20℃冰箱待檢HPV-DNA。常規(guī)酚、氯仿法抽提組織DNA,PCR 檢測HPV16-DNA滴度,免疫組化檢測P16及P53表達(dá),圖像分析采用申洪[11]方法測陽性單位(PU值)。腫瘤體積 (tumor volume, TV)的計算公式為:TV=ab2/2[12]。

    3統(tǒng)計學(xué)處理

    結(jié) 果

    1治療后研究組與對照組不同時點宮頸癌瘤體內(nèi)HPV16-DNA的變化

    研究組小鼠瘤體內(nèi)HPV16-DNA在治療后8 d和12 d明顯下降,與對照組之間的差異顯著(P<0.01),見表1。

    表1研究組與對照組SCID小鼠治療后4d、8d、12d和16d瘤體內(nèi)HPV16-DNA的變化

    GroupHPV16-DNAsiRNAtransfection(4d)15.10±7.11siRNAtransfection(8d)3.23±3.86?siRNAtransfection(12d)6.00±4.37?siRNAtransfection(16d)10.80±7.58Control17.90±4.36

    *P<0.05vscontrol group.

    2對照組與研究組治療后4d、8d、12d和16d宮頸癌瘤體體積的變化

    研究組轉(zhuǎn)染siRNA后12 d瘤體平均體積縮小,與對照組之間差異顯著(P<0.05);轉(zhuǎn)染siRNA 8 d和16 d瘤體體積雖然也縮小,但與對照組之間無顯著差異,見表2。

    表2對照組與研究組治療后4d、8d、12d和16d宮頸癌瘤體體積的變化

    GroupBeforetreatmentAftertreatmentsiRNAtransfection(4d)404.15±17.26415.50±12.31siRNAtransfection(8d)412.01±15.11389.89±14.71siRNAtransfection(12d)399.22±21.18361.22±11.91?siRNAtransfection(16d)422.04±19.56382.49±24.16Control409.52±15.95443.21±43.33

    *P<0.05vscontrol group.

    3對照組與研究組治療后12d病理改變

    研究組轉(zhuǎn)染后12 d腫瘤細(xì)胞體積較對照組縮小,細(xì)胞核變小,核異質(zhì)性較對照組減輕,核漿比例減小,胞漿染色較對照組變淺, 見圖1。

    Figure 1. The dyskaryosis of tumor cells in experimental group became mild,and karyoplasmic ratio diminished at 12d after transfection (HE staining,×100). A: experimental group; B:control group.

    圖1轉(zhuǎn)染后12d研究組與對照組腫瘤細(xì)胞形態(tài)

    4治療后研究組和對照組宮頸癌瘤體內(nèi)P16和P53蛋白的表達(dá)

    P16的表達(dá)強(qiáng)度在各時點對照組與研究組之間均無顯著差異(P>0.05),研究組P53的表達(dá)強(qiáng)度在轉(zhuǎn)染后8 d和12 d較對照組明顯降低,差異顯著(P<0.05),見表3,圖2、3。

    表3研究組與對照組治療后不同時點宮頸癌瘤體內(nèi)P16和P53蛋白的表達(dá)

    GroupP16proteinP53proteinsiRNAtransfection(4d)28.56±5.5121.42±6.71siRNAtransfection(8d)27.57±3.0516.44±5.37?siRNAtransfection(12d)19.25±2.1915.97±8.83?siRNAtransfection(16d)20.66±2.1518.32±6.54Control28.52±5.9529.58±7.74

    *P<0.05vscontrol group.

    Figure 2. The expression of P16 proteins in cervical tumor of SCID mice in control group and experimental group(×400). A:4 d after siRNA transfection; B: 8 d after siRNA transfection; C: 12 d after siRNA transfection; D: 16 d after siRNA transfection; E: control group.

    圖2P16蛋白表達(dá)

    Figure 3. The expression of P53 protein in cervical tumor of SCID mice in control group and in experimental group(×400). A: control group; B:4 d after siRNA transfection; C: 8 d after siRNA transfection; E: 12 d after siRNA transfection; F: 16 d after siRNA transfection.

    圖3P53蛋白表達(dá)

    討 論

    RNA干擾可有效引起靶向基因沉默[13],液相離體細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA的許多研究[14,15]均已證實靶向轉(zhuǎn)染RNA可有效抑制HPV的復(fù)制,但目前在體固相轉(zhuǎn)染的研究報道不多見。

    我們前期的實驗[4]結(jié)果提示,siRNA可由固相經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入兔宮頸上皮組織中。本研究結(jié)果顯示,HPV-DNA的滴度在染后4 d開始下降,到8 d達(dá)到最低、持續(xù)到轉(zhuǎn)染后12 d開始回升,轉(zhuǎn)染后16 d達(dá)新高。轉(zhuǎn)染后8 d及12 d時瘤體內(nèi)HPV-DNA的滴度較對照組明顯降低,差異顯著,這與Jiang等[1]研究一致;說明經(jīng)基因治療后8 d可使HPV的復(fù)制明顯抑制、持續(xù)時間可達(dá)4 d。如果利用靶向siRNA技術(shù)對宮頸高危型HPV持續(xù)性感染的患者進(jìn)行基因治療,這段時間足以使病毒基因表達(dá)所抑制的細(xì)胞調(diào)節(jié)機(jī)制恢復(fù),有利于機(jī)體選擇性殺死病毒感染細(xì)胞,清除宮頸鱗-柱交界處的HPV。

    研究還顯示:隨瘤體內(nèi)HPV16復(fù)制活性的降低,治療后12 d宮頸癌瘤體體積較對照組明顯減??;常規(guī)病理檢查細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)研究組在治療后12 d腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性減輕、核漿比例減小。腫瘤體積是評價化學(xué)或生物治療腫瘤效應(yīng)的常用指標(biāo),我們的實驗結(jié)果顯示研究組轉(zhuǎn)染HPV16-siRNA后8 d、12 d、16 d時瘤體平均體積均較對照組縮?。黄渲修D(zhuǎn)染后12 d的瘤體平均體積與對照組之間差異顯著,說明固相轉(zhuǎn)染HPV16-siRNA可在一定時段內(nèi)有效抑制腫瘤生長。

    P53基因突變在多種惡性腫瘤常見,一般免疫組化方法檢測出的P53蛋白均顯示為突變型,它的結(jié)構(gòu)改變與表達(dá)異??赡苁悄[瘤發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)[16,17];我們研究顯示P53蛋白也在轉(zhuǎn)染靶向siRNA后8 d及12 d出現(xiàn)下降趨勢;上述指標(biāo)出現(xiàn)改變的時間與HPV16-DNA下降相一致。

    本研究發(fā)現(xiàn),P16蛋白的表達(dá)強(qiáng)度雖然在治療后隨HPV16-DNA的下降也出現(xiàn)降低趨勢,與Prowse等[18]在探討宮頸鱗癌高危HPV和P16表達(dá)關(guān)系中的發(fā)現(xiàn)一致,說明P16的過表達(dá)是繼發(fā)于HPV表達(dá)的事件。但其在治療后各個時點與對照組之間均無顯著差異,與Mulvany等[7]的研究不相一致,可能的原因還需進(jìn)一步研究;但從我們對P53蛋白的表達(dá)對比來看,P16蛋白作為臨床評價腫瘤生物學(xué)行為及判斷預(yù)后的輔助指標(biāo),其穩(wěn)定性還有待探討。

    總之,實驗證實固相轉(zhuǎn)染靶向HPV16-siRNA在一定的時段內(nèi)能有效抑制瘤體中HPV16的復(fù)制和瘤體的生長速度, 改善腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性,降低P53蛋白表達(dá),從側(cè)面證實了固相轉(zhuǎn)染靶向HPV16-siRNA的有效性??蔀榕R床使用RNA干擾治療宮頸持續(xù)性HPV感染,預(yù)防宮頸癌提供理論依據(jù)。

    (致謝:在本實驗進(jìn)行過程中,南方醫(yī)科大學(xué)病理教研室的申洪教授在百忙中給我們提供了諸多的幫助,在此表示衷心的感謝。)

    [1] Jiang M, Milner J. Selective silencing of viral gene exp-ression in HPV-positive human cervical carcinoma cells treated with siRNA, a primer of RNA interference [J].Oncogene, 2002, 21 (39): 6041-6048.

    [2] Bousarghin L, Touze A, Gaud G, et al. Inhibition of cervical cancer cell growth by human papillomavirus virus-like particles packaged with human papillomavirus oncoprotein short hairpin RNAs[J]. Mol Cancer Ther, 2009, 8(2): 357-365.

    [3] 官立麗, 彭芝蘭, 牛曉宇. HPV16 E6小干擾RNA對人宮頸癌裸鼠移植瘤的抑制作用[J]. 中華腫瘤雜志,2007, 29 (12): 894-897.

    [4] 廖百花,馮亦軍,肖小敏.兔宮頸固相轉(zhuǎn)染靶向HPV16 siRNA抑制荷宮頸癌SCID小鼠HPV的復(fù)制[J]. 中國病理生理雜志,2010, 26 (4): 695-699.

    [5] Bermúdez-Morales VH, Peralta-Zaragoza O, Guzmán-Olea E,et al. HPV 16 E2 protein induces apoptosis in human and murine HPV 16 transformed epithelial cells and has antitumoral effectsinvivo[J]. Tumor Biol,2009,30(2):61-72.

    [6] 趙艷忠,張為遠(yuǎn).人宮頸鱗狀細(xì)胞癌裸鼠移植模型的建立及分析[J]. 中國婦幼保健,2010,25(27):3970-3973.

    [7] Mulvany NJ,Mien DG,Wilson SM.Diagnostic utility of p16lNK4a:a reappraisal of its use in cervical biopsies[J].Pathology,2008,40(4):335-344.

    [8] Lung FW, Shu BC, Kao WT, et al. Association of DRD4 uVNTR and TP53 codon 72 polymorphisms with schizophrenia: a case-control study [J]. BMC Med Genet, 2009,10:147.

    [9] Michalak EM, Villunger A, Adams JM, et al. In several cell types tumor suppressor P53 induces apoptosis largely via Puma but Noxa can contribute [J]. Cell Death Differ, 2008, 15(6):1019-1029.

    [10]周堅紅, 陳懷增, 程 琪,等.HPV16 E7肽疫苗對人免疫重建荷人宮頸癌細(xì)胞株SiHa細(xì)胞SCID鼠免疫功能的影響[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2005,14(5):353-357.

    [11]申 洪.免疫組織化學(xué)染色定量方法研究(Ⅲ)[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,1995,4(1):89-92.

    [12]Park R, Chang CC, Liang YC,et al.Systemic treatment with tetra-O-methyl nordihydroguaiaretic acid suppresses the growth of human xenograft tumors[J]. Clin Cancer Res,2005,11(12):4601-4609.

    [13]Tijsteman M, Ketting RF, Okihara KL, et al. RNA heli-case MUT-14-dependent gene silencing triggered inC.elegansby short antisense RNAs[J]. Science, 2002, 295(5555): 694-697.

    [14]張美紅, 周克元. RNA干擾阻抑Bax inhibitor-1(bi-1)基因表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響[J]. 中國病理生理雜志, 2009, 25 (4):670-675.

    [15]練 兵, 王繼群, 金 琳. 靶向PCNA基因的小干擾RNA對鼻咽癌CNE2細(xì)胞周期的影響[J]. 中國病理生理雜志, 2009, 25 (8): 1533-1537.

    [16]Takimoto R,Wang W,Dicker DT,et al.The mutant P53-conformation modifying drug,CP-31398,can induce apoptosis of human cancer cells and can stabilize wild-type P53 protein[J].Cancer Biol Ther,2002,1(1):47-55.

    [17]朱鳳琴,鳳 林,胡向陽.P16、P53在宮頸上皮內(nèi)瘤變和浸潤性鱗癌中的表達(dá)及意義[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2009,44(2):201-204.

    [18]Prowse DM,Ktori EN,Chandrasekaran D,el al.Human papillomavirus-associated increase in p16lNK4Aexpression in penile lichen sclemsus and squamous cell carcinoma [J].Br J Dermatol,2008,158(2):261-265.

    siRNAinhibitsHPV16-DNAreplication,tumorvolumeandexpressionofP16andP53inSCIDmicewithSiHacellcervicalcarcinomainvivo

    LIAO Bai-hua1, FENG Yi-jun1, ZENG LU-xian1, XIAO Xiao-min2

    (1DepartmentofGynecology,GuangdongNo. 2ProvincialPeople’sHospital,Guangzhou510317,China;2DepartmentofGynecologyandObstetrics,TheFirstAffiliatedClinicalCollege,JinanUniversity,Guangzhou510632,China.E-mail:xiaoxiaomin55@hotmail.com)

    AIM: To investigate the effect of targeting gene therapy on mouse SiHa cell cervical carcinoma by transfecting siRNA into the tumor with solid-phase methodinvivo.METHODSA sense strand siRNA (21 nt) for human papilloma virus type 16 (HPV16) was designed. siRNA-Lipo2000-carbomer gum was prepared. Forty SCID mice with SiHa cell cervical carcinoma were divided into experimental group (n=32) and control group (n=8). The diameter and volume of the tumors were measured before treatment. The mice in experimental group were treated with siRNA-Lipo 2000-carbomer gum for 7 d. The control mice were treated with Lipo 2000-carbomer gum for 7 d. The mice in experimental group and control group were sacrificed at the time points of 4 d, 8 d, 12 d and 16 d after treatment. The diameter and volume of the tumors were measured again. The HPV16-DNA in the tumor tissues was measured by PCR. The protein levels of P16 and P53 in the tumors were determined by the method of immunohistochemistry.RESULTSCompared with control group, the titer of HPV16-DNA decreased significantly at the time points of 8 d and 12 d after transfection in experimental group (P<0.05). The protein expression of P16 in experimental group showed decreased tendency 8 d and 12 d after transfection, but without statistical difference. The protein expression of P53 significantly decreased 8 d and 12 d after transfection. The tumor volume in experimental group was significantly decreased as compared to that in control group at the time point of 12 d (P<0.05). Transfection of siRNA for 12 d resulted in attenuating dyskaryosis and karyoplasmic ratio of the tumor cells.CONCLUSIONSolid-phase transfaction of siRNAinvivoinhibits HPV-DNA replication and growth of SiHa cell cervical carcinoma.

    Cervix neoplasms; RNA interference; Human papilloma virus; Protein P53; Protein P16

    R737.33

    A

    1000-4718(2011)03-0509-05

    2010-10-01

    2011-01-19

    廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項目(No.A2008142)

    △通訊作者 Tel:020-38688607;E-mail: xiaoxiaomin55@hotmail.com

    10.3969/j.issn.1000-4718.2011.03.017

    猜你喜歡
    瘤體靶向宮頸癌
    腹主動脈瘤腔內(nèi)修復(fù)術(shù)后瘤體直徑及體積變化的隨訪研究
    如何判斷靶向治療耐藥
    中老年女性的宮頸癌預(yù)防
    中國臨床醫(yī)學(xué)影像雜志(2021年6期)2021-08-14 02:21:56
    毛必靜:靶向治療,你了解多少?
    肝博士(2020年5期)2021-01-18 02:50:18
    Hepsin及HMGB-1在宮頸癌組織中的表達(dá)與侵襲性相關(guān)性分析
    《牛陰莖乳頭狀瘤的外科治療》圖版
    體表軟組織巨大神經(jīng)纖維瘤的手術(shù)治療
    E-cadherin、Ezrin在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    食管疾病(2015年3期)2015-12-05 01:45:07
    靶向超聲造影劑在冠心病中的應(yīng)用
    亚洲人成伊人成综合网2020| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 在线看三级毛片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日本a在线网址| 老鸭窝网址在线观看| 露出奶头的视频| 国产精品av视频在线免费观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久久久久久午夜电影| eeuss影院久久| 黄色配什么色好看| 日本熟妇午夜| 国产综合懂色| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲av第一区精品v没综合| 在线免费观看的www视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 无人区码免费观看不卡| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久精品国产自在天天线| 亚洲成人久久性| 久久久久久久久久成人| 免费人成在线观看视频色| 国产精品日韩av在线免费观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 99热精品在线国产| 国产单亲对白刺激| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 免费av毛片视频| 日韩免费av在线播放| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲不卡免费看| 欧美色视频一区免费| 亚洲黑人精品在线| 两个人的视频大全免费| 亚洲精品在线美女| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产av不卡久久| 亚洲中文日韩欧美视频| x7x7x7水蜜桃| 国产精华一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 欧美乱色亚洲激情| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精华一区二区三区| 岛国在线免费视频观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产一区二区三区视频了| 不卡一级毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产一区二区三区视频了| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 黄色丝袜av网址大全| 午夜久久久久精精品| av在线老鸭窝| 亚洲成av人片在线播放无| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 在线观看午夜福利视频| 欧美3d第一页| 午夜福利在线观看吧| 亚洲av免费高清在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 脱女人内裤的视频| 婷婷亚洲欧美| 午夜福利在线在线| 亚洲精品色激情综合| 性色av乱码一区二区三区2| 一区二区三区免费毛片| 久久99热6这里只有精品| 久久久久久久久中文| 亚洲 国产 在线| 国产精品三级大全| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产欧美日韩精品一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 我要看日韩黄色一级片| 性欧美人与动物交配| 特级一级黄色大片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成人啪精品午夜网站| 看十八女毛片水多多多| 免费高清视频大片| 99热这里只有是精品在线观看 | www.999成人在线观看| 午夜免费激情av| 久久久精品大字幕| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美性猛交黑人性爽| aaaaa片日本免费| 两人在一起打扑克的视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产野战对白在线观看| a级毛片a级免费在线| 国产午夜福利久久久久久| 成人三级黄色视频| 我的女老师完整版在线观看| 成人午夜高清在线视频| 好男人在线观看高清免费视频| 国内精品久久久久久久电影| 如何舔出高潮| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品1区2区在线观看.| 日本五十路高清| 日韩欧美三级三区| 亚洲七黄色美女视频| 日韩有码中文字幕| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产视频一区二区在线看| 美女免费视频网站| 天堂动漫精品| 免费观看人在逋| 一级作爱视频免费观看| 精品久久久久久久久久久久久| 天天一区二区日本电影三级| 伊人久久精品亚洲午夜| 最近最新免费中文字幕在线| 国模一区二区三区四区视频| 美女 人体艺术 gogo| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 婷婷亚洲欧美| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 色吧在线观看| 色吧在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 久久伊人香网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 日韩免费av在线播放| 久久人人精品亚洲av| 色综合亚洲欧美另类图片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 免费在线观看亚洲国产| 怎么达到女性高潮| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产精品电影一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 日韩免费av在线播放| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 性色avwww在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩精品中文字幕看吧| 男人舔女人下体高潮全视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品日产1卡2卡| 少妇熟女aⅴ在线视频| 色在线成人网| 一区二区三区四区激情视频 | 婷婷精品国产亚洲av| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产高清有码在线观看视频| 中出人妻视频一区二区| 免费人成在线观看视频色| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 99国产极品粉嫩在线观看| av欧美777| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 99精品在免费线老司机午夜| 国产精品影院久久| www日本黄色视频网| or卡值多少钱| 在现免费观看毛片| 可以在线观看毛片的网站| 在线观看av片永久免费下载| АⅤ资源中文在线天堂| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲欧美清纯卡通| 人妻久久中文字幕网| 成人永久免费在线观看视频| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲av一区综合| 色av中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 色尼玛亚洲综合影院| 国产乱人伦免费视频| 国产免费av片在线观看野外av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产在视频线在精品| 亚洲中文字幕日韩| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久9热在线精品视频| 国内精品久久久久精免费| 亚洲国产高清在线一区二区三| 丁香欧美五月| 免费人成视频x8x8入口观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲成av人片在线播放无| 搞女人的毛片| 精品久久久久久久久亚洲 | 久久精品综合一区二区三区| 好男人在线观看高清免费视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久久精品欧美日韩精品| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 小说图片视频综合网站| 黄色一级大片看看| 久久久久久久久中文| 亚洲成人久久性| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美潮喷喷水| 此物有八面人人有两片| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产真实乱freesex| 国产伦精品一区二区三区四那| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品日韩av在线免费观看| 三级毛片av免费| 18+在线观看网站| 亚洲美女黄片视频| 日韩欧美免费精品| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美激情国产日韩精品一区| 深夜a级毛片| 91久久精品国产一区二区成人| 国产精品久久电影中文字幕| 日韩国内少妇激情av| 久久久久久九九精品二区国产| 久久久久久久午夜电影| 久久99热6这里只有精品| 国产在线男女| 亚洲精品在线观看二区| 国产精品精品国产色婷婷| 免费观看的影片在线观看| 赤兔流量卡办理| 国产精品影院久久| 露出奶头的视频| 欧美色视频一区免费| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产一区二区三区视频了| 国产三级黄色录像| x7x7x7水蜜桃| 在线观看舔阴道视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 久久久久国内视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 91久久精品电影网| 99国产综合亚洲精品| 又爽又黄无遮挡网站| 网址你懂的国产日韩在线| 久久亚洲精品不卡| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产综合懂色| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲av电影在线进入| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 99热精品在线国产| 一区福利在线观看| 51国产日韩欧美| 欧美区成人在线视频| 午夜亚洲福利在线播放| 91狼人影院| 天堂√8在线中文| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 午夜两性在线视频| 两个人视频免费观看高清| 18+在线观看网站| 波多野结衣高清作品| 成人亚洲精品av一区二区| 国产男靠女视频免费网站| 国产亚洲精品久久久com| 又黄又爽又免费观看的视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品影院久久| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产一区二区三区视频了| 一区二区三区免费毛片| .国产精品久久| 我要搜黄色片| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲av一区综合| 亚洲中文日韩欧美视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 午夜精品久久久久久毛片777| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 9191精品国产免费久久| 亚洲无线在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久久久久久久久黄片| 高清毛片免费观看视频网站| 香蕉av资源在线| 精品一区二区三区视频在线| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 99精品在免费线老司机午夜| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美成人a在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 十八禁人妻一区二区| 午夜视频国产福利| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 男女视频在线观看网站免费| 免费人成在线观看视频色| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美乱妇无乱码| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 香蕉av资源在线| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 91久久精品电影网| 亚洲成人久久爱视频| 1000部很黄的大片| 久99久视频精品免费| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产一区二区激情短视频| 国产探花在线观看一区二区| 午夜福利欧美成人| 欧美成人免费av一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 三级毛片av免费| 在线观看av片永久免费下载| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲 国产 在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 嫩草影视91久久| 午夜免费激情av| 熟女电影av网| 免费人成视频x8x8入口观看| av天堂中文字幕网| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品一区二区性色av| 午夜精品在线福利| 身体一侧抽搐| 好男人在线观看高清免费视频| 国产一区二区三区视频了| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 中亚洲国语对白在线视频| 免费av不卡在线播放| 久久午夜福利片| .国产精品久久| 久久午夜福利片| 久久国产精品影院| 91久久精品国产一区二区成人| 日韩精品中文字幕看吧| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品在线美女| 亚洲国产色片| 神马国产精品三级电影在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲成人免费电影在线观看| 最近在线观看免费完整版| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美色视频一区免费| 亚洲成人久久性| av女优亚洲男人天堂| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品一区二区三区视频在线| 男人舔奶头视频| 国产麻豆成人av免费视频| 男人舔奶头视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产三级中文精品| 又爽又黄无遮挡网站| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品日产1卡2卡| 一a级毛片在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| www日本黄色视频网| 中出人妻视频一区二区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 内地一区二区视频在线| 一进一出好大好爽视频| 一本精品99久久精品77| 宅男免费午夜| 国产色爽女视频免费观看| 黄片小视频在线播放| 男女那种视频在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 在线国产一区二区在线| 一级毛片久久久久久久久女| 少妇高潮的动态图| 亚洲五月婷婷丁香| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日韩有码中文字幕| 国产av在哪里看| 久久草成人影院| av欧美777| 日韩欧美国产在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 日韩欧美在线乱码| 一区二区三区四区激情视频 | 久久九九热精品免费| 国产高清视频在线播放一区| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产精品999在线| 国产精品伦人一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品久久久久久久电影| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜影院日韩av| 成熟少妇高潮喷水视频| 在线免费观看的www视频| 99热精品在线国产| 免费大片18禁| 亚洲专区国产一区二区| 久久久色成人| 最好的美女福利视频网| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久精品大字幕| 乱人视频在线观看| 看十八女毛片水多多多| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久久久九九精品二区国产| aaaaa片日本免费| 日韩中字成人| bbb黄色大片| 国产一区二区三区视频了| 日韩有码中文字幕| 深夜a级毛片| 久久精品国产亚洲av天美| 久久精品国产清高在天天线| 窝窝影院91人妻| 国产精品精品国产色婷婷| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一区二区三区免费毛片| 身体一侧抽搐| 久久99热6这里只有精品| 午夜福利欧美成人| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品久久久久久久久av| 搞女人的毛片| 日韩欧美精品免费久久 | 国产精品伦人一区二区| 一进一出好大好爽视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 日本免费a在线| 日韩精品中文字幕看吧| 久久九九热精品免费| 午夜福利在线在线| 国产成人啪精品午夜网站| 波多野结衣高清作品| 9191精品国产免费久久| 亚洲五月天丁香| 国产精品久久久久久久电影| 美女 人体艺术 gogo| 午夜福利欧美成人| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| av在线天堂中文字幕| 黄色日韩在线| 久9热在线精品视频| 日本与韩国留学比较| 两人在一起打扑克的视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美日韩综合久久久久久 | 老女人水多毛片| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲成人久久爱视频| 免费在线观看影片大全网站| 黄色配什么色好看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美潮喷喷水| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲av成人精品一区久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 91麻豆av在线| 最好的美女福利视频网| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 两个人的视频大全免费| 一边摸一边抽搐一进一小说| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲七黄色美女视频| 国产熟女xx| 90打野战视频偷拍视频| 麻豆一二三区av精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲第一电影网av| 少妇丰满av| 亚洲av不卡在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 女人被狂操c到高潮| 日韩欧美精品v在线| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产美女午夜福利| 日本五十路高清| 国产美女午夜福利| 国产爱豆传媒在线观看| 午夜免费激情av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 长腿黑丝高跟| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 黄片小视频在线播放| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品av视频在线免费观看| 久久久国产成人精品二区| 午夜福利18| 久久久国产成人精品二区| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲av不卡在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 长腿黑丝高跟| 在线国产一区二区在线| 麻豆国产97在线/欧美| 中文字幕av在线有码专区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 毛片一级片免费看久久久久 | 中文资源天堂在线| 一夜夜www| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 69av精品久久久久久| 少妇高潮的动态图| 嫩草影院入口| 日本黄色视频三级网站网址| 好男人在线观看高清免费视频| 悠悠久久av| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲精品一区av在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲精品456在线播放app | 久久人人精品亚洲av| 又爽又黄无遮挡网站| 少妇被粗大猛烈的视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 波多野结衣高清作品| 在线观看舔阴道视频| 免费搜索国产男女视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美一区二区国产精品久久精品| 丁香六月欧美| а√天堂www在线а√下载| 全区人妻精品视频| 久久久久国内视频| 91久久精品电影网| 免费看日本二区| 91麻豆精品激情在线观看国产| av专区在线播放| 国产精品女同一区二区软件 | 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品综合久久久久久久免费| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲片人在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲无线在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 午夜福利在线观看吧| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲精品456在线播放app | 美女黄网站色视频| 成人精品一区二区免费| 免费观看人在逋| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 成年人黄色毛片网站| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美黄色片欧美黄色片| netflix在线观看网站| 99久久无色码亚洲精品果冻| 女同久久另类99精品国产91| 日韩 亚洲 欧美在线| 精华霜和精华液先用哪个| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 午夜免费激情av| av在线蜜桃| 午夜福利视频1000在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美成狂野欧美在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品一及| 久久久久久久久中文| 91久久精品国产一区二区成人| 精品一区二区三区人妻视频| 性欧美人与动物交配| 国产精品,欧美在线| 欧美最黄视频在线播放免费|