高效液相色譜法測定吉祥草根莖中蘆丁的含量

王 倩 鄒 坤

（天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實驗室三峽大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,湖北 宜昌 443002）

吉祥草,又名玉帶草、觀音草、松壽蘭、小青膽等,為百合科吉祥草屬植物吉祥草（Reineckia Carnea（Andr.）Kunth.）的全草,以其全草入藥,具有潤肺止咳、接骨、平喘、祛風(fēng)除濕等功效,現(xiàn)代藥理研究表明吉祥草具有抗真菌[1]、溶血、止血、化痰、抗炎[2]、滅殺釘螺[3-5]及抑制磷酸二酯酶[6]等活性.吉祥草在民間用于抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有良好的療效,且副作用少,吉祥草已收錄為《湖北省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》品種.研究表明,吉祥草主要含甾體皂苷類和黃酮類[7-8].蘆丁為黃酮醇苷類化合物,具有廣泛的生理藥理活性,尤其是其抗炎、抗氧化活性已經(jīng)為大量學(xué)者證實.近年來國內(nèi)有采用高效液相色譜法測定吉祥草中凱提皂苷元的含量[9],但尚未見文獻(xiàn)報道測定吉祥草中黃酮類化合物的含量.文獻(xiàn)已有報道[10]從吉祥草中分離得到蘆丁,為了評價和控制吉祥草的品質(zhì),本實驗建立了用高效液相色譜測定吉祥草根莖中蘆丁含量的方法.該方法簡便快速,分離度好,準(zhǔn)確度高,可為吉祥草質(zhì)量控制提供參考.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Varian 210分析型高效液相色譜系統(tǒng)（210型二元梯度泵、210型紫外檢測器,美國Varian公司）；ME215S型十萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）；SZ-93自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；乙腈為色譜純（fisher公司）,水為二次蒸餾水（自制）.

吉祥草:采自中國湖北長陽；對照品:蘆丁,購自Sigma公司,純度≥98%,其它試劑均為分析純.

1.2 色譜條件

色譜柱Diamonsil C18（250mm×4.6mm.id.,5 μ m）；流動相:乙腈-0.1%磷酸水溶液（28∶72,v/v）；流速:1.0mL/min；進(jìn)樣量:20μ L；檢測波長:350nm；柱溫:25℃.在該色譜條件下待測組分可達(dá)到基線分離如圖1～2所示.

1.3 溶液的制備

對照品溶液:精密稱取蘆丁對照品13.0 mg置于25mL容量瓶中,配制成濃度為0.52mg/mL的蘆丁儲備液.

供試品溶液:曬干的吉祥草根莖,粉碎,取粉末1.0g,加95%乙醇10mL,密塞,70℃加熱回流提取5 h,冷卻至室溫,取適量用微孔濾膜（0.45 μ m）濾過即得.

2 方法與結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察

取上述貯備液適量,用甲醇稀釋,分別得濃度為0.13、0.26、0.40 、0.52、0.65 mg/mL 的蘆丁系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“1.2”項下色譜條件進(jìn)樣,記錄峰面積與保留時間,以蘆丁對照品濃度 x（mg/mL）為橫坐標(biāo),峰面積y為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明,蘆丁對照品進(jìn)樣量在0.13～0.65 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,其回歸方程為:y=64237900x+641601（r=0.9999）.

圖3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液進(jìn)樣,在 2、4、8、12、24 h后分別進(jìn)樣20μ L,結(jié)果蘆丁峰面積 RSD為1.25%（n=5）,表明供試品溶液室溫下放置24h基本穩(wěn)定.

2.3 精密度試驗

分別準(zhǔn)確吸取同一蘆丁對照品溶液20 μ L,進(jìn)樣5次,峰面積積分值RSD（n=5）為0.97%.

2.4 重復(fù)性試驗

取吉祥草粉末5份,分別按“1.3”項下供試品溶液測定方法測定,測得蘆丁的平均含量為0.26%,RSD為2.67%.

2.5 加樣回收試驗

精密稱定已知含量的供試品5份,分別加入與樣品含量相當(dāng)?shù)膶φ掌?按“1.3”項下供試品溶液測定方法,分別進(jìn)樣測定,結(jié)果見表1.

表1 蘆丁回收率測定結(jié)果（n=5）

2.6 樣品含量測定

取3份吉祥草粉末,每份約 1 g,精密稱定,按“1.3”項方法制備供試品溶液,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰面積,計算樣品中蘆丁的含量,計算公式為:y=64237900x+641601（r=0.9999）,結(jié)果見表2.

表2 樣品測定結(jié)果（n=3）

3 分析與討論

（1）實驗結(jié)果表明,吉祥草根莖中蘆丁的含量達(dá)到0.26%.采用色譜條件:乙睛-0.1%磷酸溶液（28∶72）；流速為:1.0mL/min；柱溫25℃；檢測波長為350 nm,蘆丁與其他組分分離度好.

（2）該研究表明,HPLC測定吉祥草根莖中蘆丁含量可行、穩(wěn)定、簡便、靈敏、準(zhǔn)確,為雙子葉植物藥百合科植物吉祥草的開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供一定的參考.

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