鐵椆與紅菇提取液抑菌作用的比較

劉英姿，甘耀坤，陳旭健，明庭會，曾獻瑩

(1.玉林師范學(xué)院化學(xué)與生物系，廣西 玉林 537000；2.廣西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣西 桂林 541004)

鐵椆與紅菇提取液抑菌作用的比較

劉英姿1,2，甘耀坤1,2，陳旭健1，明庭會1，曾獻瑩1

(1.玉林師范學(xué)院化學(xué)與生物系，廣西 玉林 537000；2.廣西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣西 桂林 541004)

研究鐵椆樹根、鐵椆果仁與紅菇子實體的抑菌效果。以80%乙醇為提取劑，運用超聲波技術(shù)分別制備鐵椆樹根、鐵椆果仁、紅菇子實體提取液，測定它們在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對大腸桿菌(Escherichia coli)、藤黃微球菌(Micrococcus lueus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產(chǎn)氣氣桿菌(Aerobacter aerogenns)、卡爾伯斯酵母(Karlperth yeast)、阿達青霉(Penicillium adametzi Zaleski)6種供試菌種的抑菌作用，并對其大小進行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在測試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，3種測試提取液對大腸桿菌、藤黃微球菌、卡爾伯斯酵母均有抑制作用，其中對大腸桿菌、藤黃微球菌抑制作用比較明顯，且隨質(zhì)量濃度升高抑菌作用增強；抑菌效果為鐵椆樹根>鐵椆果仁>紅菇子實體。研究表明，鐵椆樹根、鐵椆果仁和紅菇子實體3種提取液對不同菌種的抑菌作用有一定的選擇性，抑菌效果順序為鐵椆樹根最好、鐵椆果仁次之，且抑菌效果在2.0g/mL質(zhì)量濃度條件下較好。

鐵椆；紅菇；超聲波提?。灰志饔?/p>

紅菇(Russula)又名美麗紅菇，鱗蓋紅菇，營養(yǎng)豐富，鮮美可口，具有補血、滋陰、清涼解毒之功效，是一種野生名貴珍稀食用菌[1]。鐵椆(Cyclobalanopsis glauca)又名青岡櫟、青栲、鐵櫟，是紅菇的主要共生樹種，其種子含淀粉；樹皮、殼斗含鞣質(zhì)；種仁可用于止渴，止痢疾，破惡血，健行；樹皮有止產(chǎn)婦流血的功效；嫩葉可以治療臁瘡等[2-3]。近年來，不少學(xué)者研究了紅菇的抗菌、抗氧化、抗運動性疲勞作用和紅菇對血糖血脂的影響[4-7]，也對紅菇的共生樹種——鐵椆的抗氧化、抗運動性疲勞作用進行了探討[8-9]，了解到紅菇和鐵椆具有多種抗性機能且有相依性，但鐵椆是否具有抑菌機能？它和紅菇的抑菌作用有何異同？目前尚未見報道。本實驗擬采用超聲波技術(shù)分別制備鐵椆樹根、鐵椆果仁與紅菇子實體提取液，測定它們在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對大腸桿菌(Escherichia coli)、藤黃微球菌(Micrococcus lueus)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產(chǎn)氣氣桿菌(Aerobacter aerogenns)、卡爾伯斯酵母(Karlperth yeast)、阿達青霉(Penicillium adametzi Zaleski)6種供試菌種的抑菌作用，并對其大小進行比較，探討鐵椆與紅菇在抑菌方面的利用價值，為天然抑菌藥物的開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁由廣西容縣自良鄉(xiāng)紅菇基地提供。

1.2 供試菌種及培養(yǎng)基

1)細(xì)菌：大腸桿菌(Escherichia coli)、藤黃微球菌(Micrococcus lueus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產(chǎn)氣氣桿菌(Aerobacter aerogenns)；2)酵母菌：卡爾伯斯酵母(Karlperth yeast)；3)霉菌：阿達青霉(Penicillium adametzi Zaleski)，由玉林師范學(xué)院化學(xué)與生物系微生物學(xué)實驗室提供。

參照凌建亞等[10]的方法配制不同菌種培養(yǎng)基：1)葡萄糖-酵母汁-蛋白胨培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)酵母菌；2)牛肉膏-蛋白胨培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)細(xì)菌；3)沙氏瓊脂培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)霉菌。

1.3 抑菌提取液的制備

將紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁洗凈、烘干；然后分別使用萬能粉碎機粉碎得粉末；分別稱取一定量的粉末，加入80%乙醇溶劑，冰水浴超聲波提取[4]，離心(4000r/min，10min)后的上清液經(jīng)蒸發(fā)濃縮成一定濃度的粗提液；再根據(jù)需要分別將粗提液于80℃條件下蒸發(fā)濃縮成質(zhì)量濃度梯度為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、6.0g/mL的紅菇、鐵椆樹根、果仁提取液，滅菌后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 方法

1.4.1 不同濃度的紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁提取液對不同菌種抑制作用的測定

參照陸志科等[11]的方法并稍作改動。以80%乙醇和無菌的蒸餾水作對照(CK)，分別記為CK1和CK2。以紅菇子實體提取液為例，選擇質(zhì)量濃度為0.5、1.0、1.5、2.0g/mL 4種梯度提取液，將滅菌并干燥的濾紙片(直徑1.0cm)分別浸入這4種梯度質(zhì)量濃度提取液中，浸透(一般需浸泡5h以上)。用無菌鑷子將浸好的濾紙片夾起并分別貼在已制備好的接種培養(yǎng)基平板上，同時貼空白對照濾紙片，貼好濾紙片的平板置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。再分別用鐵椆樹根和果仁的提取液重復(fù)以上步驟。細(xì)菌于35～37℃培養(yǎng)18～24h，霉菌、酵母菌置于28℃條件下培養(yǎng)44～48h。

1.4.2 1.0g/mL的紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁提取液對大腸桿菌抑制作用的比較

將滅菌并干燥的濾紙片(直徑1.0cm)分別浸入1.0g/mL的紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁提取液中，浸透(一般需浸泡5h以上)。用無菌鑷子將浸好的濾紙片夾起并貼在已制備好的接種培養(yǎng)基平板上，同時貼上80%乙醇和無菌的蒸餾水空白對照濾紙片。貼好濾紙片的平板置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于35～37℃培養(yǎng)18～24h。

1.4.3 瓊脂稀釋法測定提取液最小抑菌濃度(MIC)

根據(jù)消毒技術(shù)規(guī)范(2002年版)[12]，在無菌超凈工作臺上，用滅菌的移液器吸取不同質(zhì)量濃度的3種測試提取液0.3mL分別加入到無菌培養(yǎng)皿中，倒入約20mL冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，混合均勻。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，用滅菌的移液器吸取0.01mL(含菌數(shù)約105個/mL)的菌懸液分別加入到上述平板培養(yǎng)基中，用涂布棒涂布均勻。每個平板做3個重復(fù)。將細(xì)菌于37℃恒溫培養(yǎng)24h、霉菌和酵母菌于28℃恒溫培養(yǎng)48h后進行觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的紅菇子實體、鐵椆樹根、果仁提取液對不同菌種的抑制作用

表1 不同質(zhì)量濃度提取液對不同菌種的抑菌圈直徑Table 1 Antibacterial ring diameters of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca with various concentrations cm

從表1可以看出，紅菇子實體、鐵椆樹根、果仁3種測試提取液在質(zhì)量濃度0.5、1.0、1.5、2.0g/mL條件下，對大腸桿菌和藤黃微球菌的抑制作用較明顯，對卡爾伯斯酵母的抑制作用次之，且3種測試提取液的抑菌圈隨著其質(zhì)量濃度的升高而變大，而對金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣氣桿菌和阿達青霉沒有抑制作用。

2.2 1.0g/mL的紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁提取液對大腸桿菌的抑制作用

圖1 1.0g/mL的紅菇子實體和鐵椆樹根、果仁提取液對大腸桿菌的抑制作用Fig.1 Bacteriostatic effects of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca roots and nut at a concentration of 1.0 g/mL on E. coli in comparison with sterile distilled water and 80% ethanol

由圖1可知，當(dāng)提取液的質(zhì)量濃度為1.0g/mL時，3種測試提取液對大腸桿菌均有抑菌效果，從其抑菌圈直徑的大小來看，鐵椆樹根提取液＞鐵椆果仁提取液＞紅菇子實體提取液。

2.3 瓊脂稀釋法測定提取液最小抑菌濃度(MIC)結(jié)果

表2 不同材料、不同質(zhì)量濃度的提取液最小抑菌濃度的測定結(jié)果Table 2 Minimum inhibitory concentrations of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca roots and nut at various concentrations

從表2可以看出，紅菇子實體對大腸桿菌的最小抑菌濃度為0.5g/mL，對藤黃微球菌的最小抑菌濃度為1.0g/mL，對卡爾伯斯酵母的最小抑菌濃度為3.0g/mL；鐵椆樹根對大腸桿菌的最小抑菌濃度為0.5g/mL，對藤黃微球菌的最小抑菌濃度為1.0g/mL，對卡爾伯斯酵母的最小抑菌濃度為2.0g/mL；鐵椆樹果仁對大腸桿菌和藤黃微球菌的最小抑菌濃度都為0.5g/mL，對卡爾伯斯酵母的最小抑菌濃度為1.5g/mL?？傮w上看，對不同菌種而言，最小抑菌濃度為大腸桿菌、藤黃微球菌的較小，卡爾伯斯酵母的較大；對不同的提取液而言，最小抑菌濃度為：鐵椆果仁＜鐵椆樹根＜紅菇子實體。

3 結(jié) 論

在濾紙圓片測試培養(yǎng)中，抑菌效果為鐵椆樹根提取液>鐵椆果仁提取液＞紅菇子實體提取液；在瓊脂稀釋法測定提取液最小抑菌濃度的結(jié)果中，最小抑菌濃度為鐵椆果仁提取液＜鐵椆樹根提取液＜紅菇子實體提取液?？偟膩碚f，3種測試提取液中，鐵椆樹根和果仁提取液的抑菌效果相當(dāng)，而紅菇子實體提取液的抑菌效果較差。至于抑菌成分和作用機理還有待進一步研究。

本實驗通過紅菇及其共生樹種鐵椆樹根和果仁對供試菌種的抑制作用比較，在一定程度上證明了鐵椆具有與紅菇子實體一樣的抑菌作用或抗菌活性，且效果相對較好，對紅菇子實體及其共生樹種的綜合開發(fā)，研制天然抑菌藥物、天然防腐抑菌劑具有重要的指導(dǎo)意義。

[1] 甘耀坤, 趙良發(fā), 戴盧, 等. 野生紅菇研究綜述[J]. 玉林師范學(xué)院學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2005, 26(3): 70-74.

[2] 韋仕巖, 莫天硯, 劉斌, 等. 廣西浦北六萬山錐林的紅菇及其生態(tài)環(huán)境的調(diào)查研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 1998, 17(1): 25-32.

[3] 李海鷹, 范嘉曄, 王桂文, 等. 廣西浦北鱗蓋紅菇的形態(tài)與生態(tài)環(huán)境[J]. 廣西科學(xué), 1995, 2(2): 33-35.

[4] 陳旭健, 甘耀坤, 羅應(yīng)棉. 紅菇子實體提取液抗菌性的研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 36(10): 4138-4139.

[5] 甘耀坤, 婁小華, 李巖, 等. 紅菇子實體抗氧化性能的初步研究[J].食用菌, 2007, 29(1): 57-59.

[6] 甘耀坤, 陳曉白, 曾詩媛, 等. 紅菇提取液抗運動性疲勞作用的研究[J]. 食用菌, 2010, 32(1): 66-67.

[7] 陳旭健, 甘耀坤, 吳慧慧, 等. 紅菇子實體對小鼠血糖、血脂的影響[J]. 食品科技, 2008(4): 237-239.

[8] 甘耀坤, 陳旭健, 韋巧春. 鐵椆抗氧化性能的初步研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 36(29): 12738-12740.

[9] 甘耀坤, 張原琪, 陳曉白, 等. 鐵椆抗運動性疲勞作用的初步研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 37(29): 14202-14204; 14209.

[10] 凌建亞, 秦紅敏, 張長愷. 濃香乳菇菌絲抗菌活性的研究[J]. 食品科學(xué), 2000, 21(4): 40-42.

[11] 陸志科, 謝碧霞, 李安平. 麻竹竹葉提取液的抗菌性能[J]. 中南林學(xué)院學(xué)報, 2005, 25(1): 56-59.

[12] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 消毒技術(shù)規(guī)范(2002年版)[M]．北京: 中華人民共和國衛(wèi)生部, 2002．

Comparison of Bacteriostatic Effects between Extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca

LIU Ying-zi1,2，GAN Yao-kun1,2，CHEN Xu-jian1，MING Ting-hui1，ZENG Xian-ying1
(1. Department of Chemistry and Biology, Yulin Normal University, Yulin 537000, China；2. College of Life Science, Guangxi Normal University, Guilin 541004, China)

The bacteriostatic effects of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca were studied in this paper. Russula roots and Cyclobalanopsis glauca roots and nut were subjected to solvent extraction with 80% ethanol under ultrasonic assistance,and the extracts from both plants were comparatively evaluated for their bacteriostatic effects on Escherichia coli, Micrococcus lueus, Staphylococcus aureus, Aerobacter aerogenns, Karlperth yeast, Penicillium adametzi Zaleski. Results indicated that three extracts had inhibitory effects on Escherichia coli, Micrococcus luteus, and Karlperth yeast. Meanwhile, the inhibitory effects of these extracts on Escherichia coli and Micrococcus luteus were more obvious and exhibited a concentration-dependent manner.Minimum inhibitory concentrations against Karlperth yeast increased in the following order: Cyclobalanopsis glauca root extract ＜Cyclobalanopsis glauca nut extract ＜ Russula extract. Moreover, the optimal inhibitory concentrations of these extracts were all 2.0 g/mL.

Cyclobalanopsis glauca；Russula；ultrasonic extraction； bacteriostatic effect

Q939.97

A

1002-6630(2011)05-0036-03

2010-06-16

廣西科技廳自然科學(xué)基金項目(桂科自0728250)；廣西教育廳科研項目(200709LX140)；

廣西教育廳科研項目(200810LX403)

劉英姿(1975—)，女，碩士，主要從事分子生態(tài)學(xué)研究。E-mail：lyz3377@126.com