通腑湯對急性肺損傷大鼠腸組織SP的影響

劉建秋 李竹英 王 玨 郅扶旻 隋博文 劉曉東 王雪慧

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040

急性肺損傷 (ALI)是指各種直接和間接嚴(yán)重肺內(nèi)、外致病因素導(dǎo)致的急性進(jìn)行性呼吸衰竭。其最終嚴(yán)重階段被定義為急性呼吸窘迫綜合征 (ARDS)。ALI當(dāng)屬中醫(yī)學(xué)“暴喘”、“上氣”等范疇。本實驗將通過ALI大鼠模型腸組織SP含量的變化，探討通腑湯對ALI的作用機(jī)制。同時，也為“肺與大腸相表里”提供有力的實驗依據(jù)。

1 實驗資料

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級Wistar大鼠180只，購自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院實驗動物中心，體重：200～250g。

1.1.2 主要試劑及藥品

(1)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附 (ELISA)法大鼠SP試劑盒; (2)凍干精制大腸桿菌內(nèi)毒素脂多糖 (LPS)L2880;(3)通腑湯：大黃、枳實、厚樸、杏仁、黃芩等組成。由筆者所在醫(yī)院藥劑科提供;(4)地塞米松磷酸鈉注射液;(5)0.9%生理鹽水。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物分組 將180只實驗大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、地塞米松組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組6組，30只/組。

1.2.2 動物模型的建立 將LPS用蒸餾水配成1mg/ml的溶液，正常對照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水 (2.5ml/kg)作為空白組。其余各組大鼠尾靜脈注射LPS溶液 (2.5ml/kg)復(fù)制ALI模型。

1.2.3 實驗動物給藥 造模后0.5h正常對照組、模型組用生理鹽水1ml/100g灌胃治療，其余各組分別予以各自藥物1ml/100g灌胃治療。本實驗大鼠給藥劑量是6.5g/kg。為方便灌胃，將藥物配成濃度分別為0.325g/ml、0.65g/ml、1.3g/ml的低、中、高濃度溶液。

1.2.4 實驗動物標(biāo)本采集及檢測指標(biāo) 制備腸組織勻漿，取大腸 (回腸末端1cm腸段)組織，備用組織勻漿，ELISA法測定組織中SP(操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±S)表示，組間比較用t檢驗，多組間比較用單因素方差分析。P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各時間點大鼠腸組織中SP含量 (pg/ml)(±S)

2 實驗結(jié)果

從表1可以看出：模型組腸組織SP含量在前6h內(nèi)隨時間的延長而降低。模型組SP含量低于正常對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)，說明實驗造模是成功的。地塞米松、中藥各劑量治療均有效。中藥低劑量組SP含量低于地塞米松組，說明中藥低劑量療效不如地塞米松。中藥中劑量組、中藥高劑量組SP含量與地塞米松組無差異，說明中藥中劑量、中藥高劑量與地塞米松療效相當(dāng)。△

3 討論

SP是一種神經(jīng)肽，具有多種生物活性，能增加胃腸蠕動，促進(jìn)胃腸激素及唾液的分泌。內(nèi)毒素血癥狀態(tài)下，空腸腸壁內(nèi)SP能神經(jīng)釋放耗竭，使空腸組織局部SP減少，局部SP的釋放為肌電復(fù)合，引起不規(guī)則峰電位活動，說明內(nèi)毒素血癥后腸道內(nèi)SP含量變化與腸運(yùn)動紊亂有關(guān)。研究表明，阻斷SP作用大鼠更容易受沙門氏菌感染[1]。SP可通過NK1R磷酸化和激活抗凋亡的Akt途徑，達(dá)到防止大腸炎過程中的進(jìn)一步的組織損害及挽救結(jié)腸細(xì)胞的凋亡。作為一種免疫保護(hù)因子和抗應(yīng)激因子SP逐漸受到人們的重視。SP在炎性反應(yīng)中具有雙向調(diào)節(jié)作用，既參與促進(jìn)炎性反應(yīng)，也在抗炎性反應(yīng)中發(fā)揮作用。近年研究表明：SP是ALI病理過程中重要的因子[3]。SP在胰腺和肺均高表達(dá)，NEP(SP降解酶)抑制劑能明顯上調(diào)SP的表達(dá)并加重肺損傷[4]。有人認(rèn)為SP在異氟烷誘發(fā)脊髓損傷大鼠神經(jīng)源性肺水腫中有重要作用[5]。實驗結(jié)果顯示在腸組織中，SP介導(dǎo)的抗炎反應(yīng)占優(yōu)勢，可能通過包括促進(jìn)免疫球蛋白分泌等方式保護(hù)腸粘膜，而對機(jī)體產(chǎn)生正面影響。

腸源性感染及腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生是增加SIRS/MODS病死率的最危險的因素[3]。近年來，對于ALI的病機(jī)中“二次打擊”學(xué)說受到重視，內(nèi)毒素血癥和細(xì)菌易位為因果、協(xié)同作用，導(dǎo)致機(jī)體器官功能損傷。通過本實驗我們推斷通腑湯可能通過促進(jìn)胃腸運(yùn)動，蕩滌胃腸積滯，暢通氣機(jī)，改善腸道微循環(huán)，促進(jìn)sIgA分泌，保護(hù)腸道免疫屏障，減少細(xì)菌和內(nèi)毒素異位，調(diào)節(jié)促炎因子和抗炎因子平衡，減輕SIRS，保護(hù)臟器功能。它通過降低肺組織中SP，減輕呼吸道炎性反應(yīng)，減輕病理損害，同時糾正內(nèi)毒素血癥后腸道功能紊亂，SP能神經(jīng)釋放耗竭，上調(diào)SP，控制細(xì)菌易位，從而減輕肺損傷。通腑湯治療后，使肺氣得升，腑氣得降，相輔相成，相得益彰，陰平陽秘，共成雙向調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，通腑湯對內(nèi)毒素血癥后急性肺損傷有一定的治療作用，為中醫(yī)“肺病治腸理論”提供了依據(jù)。它從整體上調(diào)節(jié)人體免疫機(jī)制，平衡促炎反應(yīng)與抗炎反應(yīng)，改善微循環(huán)，糾正機(jī)體內(nèi)環(huán)境紊亂，從而減輕肺損傷，保護(hù)全身各個臟器，使疾病“向愈”發(fā)展。

[1] Pascual DW.Ther ole of tachykinins on bacterial infections.Front Biosci，2004，9：3209-3217.

[2] Bhatia M，Moochhala S.Role of inflammatory mediators in the pathophysiolo-gy of acute respiratory distress syndrome.JPathol.2004，202(2)：145～156.

[3]馬春蕾.P物質(zhì)在大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷中的作用[D].天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文集，2007：21.

[4]張劭博，鄒最，石學(xué)銀.P物質(zhì)在異氟烷誘發(fā)脊髓損傷大鼠神經(jīng)源性肺水腫中的作用[J].中國矯形外科雜志，2009，17(10)：774～776.