活血舒筋貼膏劑的質(zhì)量標準研究Δ

張麗芬，劉志承，索 娟，劉紀青，李曙光（深圳市中醫(yī)院，深圳市 518033）

活血舒筋貼膏劑的質(zhì)量標準研究Δ

張麗芬＊，劉志承，索 娟，劉紀青，李曙光（深圳市中醫(yī)院，深圳市 518033）

目的：建立活血舒筋貼膏劑的質(zhì)量標準。方法：采用薄層色譜（TLC）法對沒藥揮發(fā)油進行鑒別；采用高效液相色譜法對制劑中紫丁香苷進行含量測定。結(jié)果：TLC斑點清晰，分離度好；紫丁香苷進樣量在0.138～0.690 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.9999），平均回收率為98.50%，RSD＝3.04%（n＝6）。結(jié)論：所建標準可用于活血舒筋貼膏劑的質(zhì)量控制。

活血舒筋貼膏劑；質(zhì)量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法

活血舒筋貼膏劑系根據(jù)我院的傳統(tǒng)驗方活血舒筋熏洗劑劑型改革而成，該方具有活血散瘀、舒筋通絡(luò)、消腫止痛的功效，臨床用于治療跌打損傷、積瘀腫痛、傷筋骨折、局部腫痛等證。筆者將其劑型改為巴布貼膏劑。因其質(zhì)量標準欠完善，不利于控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，故筆者通過薄層色譜（TLC）法對方中沒藥所含揮發(fā)油進行鑒別，根據(jù)文獻[1，2]采用高效液相色譜（HPLC）法測定方中主藥救必應(yīng)的主要成分紫丁香苷的含量，為活血舒筋貼膏劑的質(zhì)量標準建立提供參考。

1 儀器與試藥

KQ2200DE醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；LC-10AD HPLC儀，包括Shim-pack CLC-ODS色譜柱、C-R4A數(shù)據(jù)處理器（日本島津公司）。

紫丁香苷對照品（批號：11574-200701，供含量測定用）、沒藥對照藥材（批號：967-200202）均購自中國藥品生物制品檢定所；活血舒筋貼膏劑（本院自制，批號：20100301、20100302、20100303）；沒藥、救必應(yīng)、乳香、三棱、莪術(shù)、艾葉、花椒、桂枝等藥材均購自廣州康美藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)深圳市中醫(yī)院藥學部劉紀青主任中藥師鑒定符合藥典規(guī)定；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 活血舒筋貼膏的制備

按處方比例稱取沒藥、乳香、三棱、莪術(shù)、艾葉、花椒、桂枝等，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，β-環(huán)糊精包合得揮發(fā)油包合物，藥渣與救必應(yīng)、制草烏、制川烏、透骨草、威靈仙、海桐皮藥材粗粉，加6倍量90%乙醇加熱回流提取2次，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.15（20～30℃）的浸膏。揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物加入浸膏混勻于貼膏基質(zhì)（聚丙烯酸鈉（PANA）∶甘油∶檸檬酸∶氫氧化鋁＝1.25∶2.5∶0.26∶0.12）中，涂于背襯材料上，制得活血舒筋貼膏劑。

2.2 沒藥揮發(fā)油的TLC鑒別

取活血舒筋貼膏1片，剪碎，置錐形瓶中，加入環(huán)己烷20 mL溶解，密閉，超聲提取30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液；取沒藥對照藥材10 g，粉碎，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，加入環(huán)己烷10 mL，制得沒藥對照藥材溶液；按處方比例稱取缺沒藥的其他藥材，按制備工藝制備陰性樣品，照上法方法制備缺沒藥的陰性對照溶液。照TLC法[3]試驗，分別吸取上述溶液各10 μL點于同一塊硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙醚（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。沒藥的TLC見圖1。

圖1 沒藥的TLCFig 1 TCL of Myrrha

2.3 紫丁香苷的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Shimpack CLC-ODS（150 mm×6.0 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（1∶9）；流速：1.0 mL· min-1；檢測波長：265 nm；柱溫：常溫；進樣量：20 μL。理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算不低于3000。色譜見圖2。

圖2 高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatograms

2.3.2 對照品溶液的制備精密稱取已干燥至恒重的紫丁香苷對照品適量，加水溶解，制成每1 mL含69 μg的溶液，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備 取樣品1片，除去蓋襯，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇150 mL，密塞，超聲處理30 min，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至200 mL量瓶中，殘渣加50%甲醇洗滌2次，每次20 mL，洗滌液濾過，加50%甲醇至刻度，搖勻，取適量過0.45 μL濾膜，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3.4 救必應(yīng)藥材溶液的制備 稱取適量救必應(yīng)藥材，按“2.3.3”項下方法制備，即得。

2.3.5 缺救必應(yīng)陰性對照溶液的制備 按處方比例稱取缺救必應(yīng)的其他藥材，照制備工藝制備陰性樣品，按“2.3.3”項下方法制備缺救必應(yīng)的陰性對照溶液。

2.3.6 標準曲線的制備 精密吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。精密吸取上述對照品溶液各20 μL，分別注入色譜儀中，依法測定。以紫丁香苷的進樣量（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝871901X+739（r＝0.9999）。結(jié)果表明，紫丁香苷的進樣量在0.138～0.690 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.3.7 精密度試驗 取對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)測定6次。結(jié)果，平均峰面積為359831，RSD＝0.66%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、30、60、120、180、240 min依法測定。結(jié)果，平均含量為6.94 mg·g-1，RSD＝0.6%（n＝6），表明供試品溶液在240 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.9 重復性試驗 取同批號樣品6份，分別按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果，紫丁香苷平均含量為6.84 mg·g-1，RSD＝3.3%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.3.10 加樣回收率試驗 精密稱取已測定紫丁香苷含量的同批樣品約0.50 g共6份，分別精密加入紫丁香苷對照品溶液10 mL（精密稱取已干燥至恒重的紫丁香苷對照品適量，加水溶解，制成0.305 mg·mL-1的溶液），按“2.3.3”項下方法制成供試品溶液，并測定含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.3.11 樣品含量測定 取不同批次活血舒筋貼膏樣品，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，并測定貼膏中紫丁香苷含量。結(jié)果，3批（批號：20100301、20100302、20100303）樣品含量分別為6.84、6.81、6.86 mg·g-1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

3 討論

活血舒筋貼膏在保持該品種原有療效的前提下，將薰洗劑改進為巴布貼膏劑，克服了原制劑的缺點。為更好地控制該制劑質(zhì)量，保證臨床療效，本研究制定了沒藥揮發(fā)油的TLC鑒別法，方法簡便、可行；并對主藥救必應(yīng)中的有效成分紫丁香苷的含量采用HPLC法測定，方法簡便、專屬性強、重復性好，可有效地控制活血舒筋貼膏劑的質(zhì)量。

[1] 羅集鵬，畢培曦.救必應(yīng)的形態(tài)組織學與高效液相色譜法鑒別[J].中藥材，1992，15（12）：24.

[2] 林 彤，梁廣華.高效液相色譜法測定救必應(yīng)及其制劑中紫丁香苷的含量[J].中國中藥雜志，2000，25（11）：671.

[3] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學工業(yè)出版社，2005：附錄31.

Quality Standard of Huoxue Shujin Plaster

ZHANG Li-fen，LIU Zhi-cheng，SUO Juan，LIU Ji-qing，LI Shu-guang（Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen 518033，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Huoxue shujin plaster.METHODS：The volatile oil of Commiphora Myrrha was identified by TLC and the content syringin was determined by HPLC.RESULTS：The TLC spots were clear and well-separated.The linear range of syringin in Huoxue shujin plaster was 0.138-0.690 μg（r＝0.9999）with an average recovery of 98.50%（RSD＝3.04%，n＝6）.CONCLUSION：The method was reproducible for the quality control of Huoxue shujin plaster.

Huoxue shujin plaster；Quality standard；TLC；HPLC

R284.2；R283.621

A

1001-0408（2011）11-1012-03

＊副主任藥師，碩士。研究方向：中藥材和中藥制劑的質(zhì)量標準。電話：027-85332366。E-mail：linshihe1974@tom.com

2010-11-03

2011-01-28）