不同穴位簡易穴位埋線對哮喘大鼠肺組織ICAM-1和NF-κB表達的影響*

陳盼碧，崔 瑾，楊孝芳

貴陽中醫(yī)學(xué)院針灸推拿系貴陽550002

(2011-01-04收稿 責(zé)任編輯 王 曼)

哮喘一證，大多病在肺，其本在腎。作者通過臨床觀察及治療經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)，哮喘患者無論臨床有無腎虛之證，皆存在隱藏性腎虛。已證實［1］簡易穴位埋線可抑制哮喘大鼠氣道炎癥，其機制可能與抑制哮喘大鼠核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear transcription factorκB，NF-κB)活性和下調(diào)受 NF-κB 調(diào)控的細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)的表達，從而減少肺組織中炎性細(xì)胞的募集、浸潤有關(guān)。但是簡易穴位埋線對于哮喘的防治是從標(biāo)治療效果好還是從本治療效果好或者標(biāo)本兼治效果更好，還不清楚。作者從標(biāo)、從本、從標(biāo)本兼治不同角度選取穴位觀察簡易穴位埋線對哮喘模型大鼠肺組織ICAM-1和NF-κB表達的影響，為進一步研究和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 ①試劑:卵蛋白(GradeⅡ，美國Sigma公司)，地塞米松磷酸鈉注射液(批號0509302，貴州光正制藥有限責(zé)任公司)，兔抗鼠NF-κB、兔抗人 ICAM-1、SP試劑盒、DAB 顯色劑等(武漢博士德生物工程有限公司)。②儀器:AR2140型電子分析天平(美國奧豪斯有限公司)，BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司)，生物顯微鏡(日本OLYMPUS光學(xué)儀器有限公司)，402型超聲霧化器(上海四菱醫(yī)療器械廠)。

1.2 動物及分組 Wistar雄性大鼠48只，質(zhì)量(300±50)g，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物研究中心提供(合格證號:0003474)。隨機分為肺俞膻中組、腎俞組、肺俞膻中腎俞組、地塞米松組、模型組、對照組，每組8只。除對照組外，其余各組大鼠參照文獻［2］復(fù)制哮喘模型:于實驗第1天和第8天分別腹腔注射111 g/L卵蛋白和氫氧化鋁溶液1 mL致敏，于實驗第15天起開始霧化吸入11 g/L卵蛋白溶液20 min誘喘，霧化流量3 mL/min，1次/d，連續(xù)2周。對照組用注射用水代替卵蛋白液進行注射和霧化吸入。地塞米松組、模型組分別于實驗第15天起腹腔注射地塞米松1.5 mg/kg、注射用水20 mg/kg，1次/d，連續(xù)2周。對照組不作任何處理。余3組進行埋線處理。

1.3 簡易穴位埋線 依據(jù)文獻［3］，肺俞膻中組選取“肺俞”、“膻中”，腎俞組選取“腎俞”，肺俞膻中腎俞組選取“肺俞”、“膻中”、“腎俞”進行簡易穴位埋線。具體操作:實驗第1天埋線直到實驗結(jié)束。先將羊腸線置于消毒彎盤中，倒入生理鹽水沖洗，并剪成0.3～0.5 cm小段若干。將腸線從無菌9號注射針針尖穿入，再將預(yù)先剪去針尖的毫針從注射針針尾部穿入，組成一套。埋線時一穴一針，兩人配合，一人左手捉拿大鼠，右手牽拉大鼠后肢，另一人穿刺埋線。先用乙醚霧化吸入麻醉大鼠，碘伏、乙醇消毒埋線穴區(qū)皮膚，“肺俞”、“腎俞”直刺6 mm，“膻中”平刺6 mm。右手拇指抵住毫針針尾作注射狀，緩慢將腸線擠入穴內(nèi)，覺注射針內(nèi)有空虛感時方可出針，并確認(rèn)腸線已埋入鼠體內(nèi)，埋線完后，大鼠穴區(qū)無需任何處理。

1.4 肺組織NF-κB、ICAM-1檢測 在末次誘喘后2～4 h內(nèi)股動脈放血處死大鼠，開胸，結(jié)扎右肺，常規(guī)留取右肺中下葉組織，多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋和切片(片厚4μm)。采用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測肺組織 NF-κB、ICAM-1。肺組織切片脫蠟，熱抗原修復(fù)。NF-κB、ICAM-1一抗均按1-150稀釋，按SP試劑盒說明書操作。每張切片隨機選取結(jié)構(gòu)較完整的支氣管壁，采用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)檢測支氣管上皮陽性細(xì)胞的平均光密度值，分別代表NF-κB、ICAM-1的相對表達量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.5進行統(tǒng)計學(xué)處理，6組大鼠肺組織NF-κB、ICAM-1相對表達量的比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 6組大鼠肺組織ICAM-1蛋白的表達 見圖1、表1。ICAM-1陽性表達在胞質(zhì)。對照組大鼠支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞、肺小血管內(nèi)皮細(xì)胞等有少量ICAM-1表達，平滑肌細(xì)胞未見其表達;模型組大鼠肺組織上述各部位呈強陽性表達;4個治療組ICAM-1表達較模型組減少，尤以地塞米松組、肺俞膻中腎俞組、肺俞膻中組最明顯。

2.2 6組大鼠肺組織NF-κB的表達 見圖2、表1。NF-κB陽性表達在胞核。對照組大鼠氣道壁可見少許NF-κB表達;模型組氣道壁NF-κB表達顯著增高;地塞米松組、肺俞膻中腎俞組、腎俞組NF-κB表達均較模型組降低，而肺俞膻中組與模型組間無差異性。

表1 6組大鼠肺組織ICAM-1和NF-κB相對表達量

3 討論

支氣管哮喘是臨床常見病、多發(fā)病，也是一種難治病。歷代醫(yī)家認(rèn)為，該病病理變化的主要臟器以肺為主，涉及脾、腎，后期累及心臟。因此，哮喘一證，大多病在肺，其本在腎。而根據(jù)作者的臨床觀察及治療經(jīng)驗發(fā)現(xiàn):哮喘患者無論臨床有無腎虛之證，皆存在隱藏性腎虛。從查閱到的文獻資料［4］中也證實了這一觀點。

作者從目前國內(nèi)現(xiàn)存有關(guān)哮喘病并能檢索出針灸處方文獻的中醫(yī)古籍共81部中，檢索出針灸處方文獻991條，其中單穴處方503條，多穴處方488條。哮喘古代針灸處方中腧穴、天突、膻中、肺俞、足三里、氣海、俞府、太淵、期門、昆侖、腎俞、廉泉、中腕、璇璣及華蓋頻次均＞42次。而在對查閱到的近代穴位埋藏療法治療哮喘的近50多篇相關(guān)文章進行統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)，選用率最高的是定喘、膻中以及肺俞。肺俞、膻中所處的節(jié)段位置正好與肺相應(yīng)，并前后呼應(yīng);從穴位的功能、主治來看:肺俞是肺的背俞穴，能疏風(fēng)解表，宣肺理氣，是調(diào)理肺臟功能，治療肺臟疾病的首選穴。針刺肺俞等穴，無論吸氣或呼氣階段的氣道阻力，都從增高狀態(tài)明顯下降，特別是呼氣時的氣道阻力下降最為明顯［5］。膻中穴為人身之氣所匯之處，是氣會，又為任脈穴，并通過列缺與手太陰肺相通，具有寬胸利膈、清肺降氣之功效。在臨床中作者也發(fā)現(xiàn)哮喘患者膻中穴處有明顯壓痛。但只肺俞、膻中兩穴配用意在驅(qū)邪為主，主治肺，故為治標(biāo)之法。腎俞所處的節(jié)段位置也正好與腎相應(yīng)，是腎臟原氣輸注的部位，具有益腎助陽，強腰利水之功，是治療腎臟疾病的首選穴位，且可補一身之元氣。但單用腎俞旨在扶正為主，主治腎，故為治本之法。臨床上治療哮喘一般宜先祛邪后扶正，但不能只顧標(biāo)而不顧本，或者只扶正而不及標(biāo)，由于哮喘患者無論臨床有無腎虛之證，皆存在隱藏性腎虛，因此治療必須標(biāo)本兼顧。

該研究中肺俞膻中腎俞組既有肺俞、膻中的治標(biāo)之法，又集腎俞治本之法于其中，故為標(biāo)本兼治之法的組合。實驗結(jié)果顯示:肺俞膻中腎俞穴位埋線可降低哮喘大鼠肺組織ICAM-1、NF-κB的表達且作用強于腎俞組、肺俞膻中組，與地塞米松效果相似。提示標(biāo)本兼治，諸穴合用，前后呼應(yīng)，且補腎納氣、培土化元、調(diào)理肺氣、扶正祛邪，使“正氣存內(nèi)，邪不可干”，哮喘得以控制。故而得出結(jié)論:集標(biāo)本兼治于一體的肺俞膻中腎俞簡易穴位埋線對于哮喘大鼠的治療效果較好。

［1］崔瑾，陳盼碧，楊孝芳，等.簡易穴位埋線對哮喘大鼠ICAM-1和NF-κB表達及氣道炎癥的影響［J］.中國針灸，2010，3(2):141

［2］王妍，金先橋.支氣管哮喘實驗?zāi)Ｐ偷难芯窟M展［J］.國際呼吸雜志，2006，26(1):70

［3］李忠仁.實驗針灸學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2003:326

［4］許得盛.“溫陽片”防治支氣管哮喘遠期療效觀察［J］.上海中醫(yī)藥雜志，1989(12):4

［5］賀志光.中醫(yī)學(xué)［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1995:500