白附子生品和不同炮制品對(duì)小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用的比較研究

劉筱清，薛雯，梁雪琰，陳專，吳靜，李艷鳳

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

白附子為天南星科植物獨(dú)角蓮(Typhonium giganteum Engl.)的干燥塊莖。辛、溫，有毒;歸胃、肝經(jīng)。具有祛風(fēng)痰，定驚搐，解毒散結(jié)止痛之功效［1］。艾鳳偉［2］等人研究證明，白附子水提物對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤有一定的抑制作用，且能明顯提高S180肉瘤荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。同時(shí)，李艷鳳等［3］對(duì)白附子炮制進(jìn)行了綜述。本實(shí)驗(yàn)就白附子生品和不同炮制品體內(nèi)抗腫瘤作用進(jìn)行了比較研究。

1 動(dòng)物及瘤株

昆明種小鼠，雄性，18～22g，購(gòu)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):SCXK黑2008004;小鼠S180實(shí)體瘤，購(gòu)于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)腫瘤防治研究所。

2 實(shí)驗(yàn)藥物

白附子生品購(gòu)于黑龍江省五常市(人工種植)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)都曉偉教授鑒定為天南星科植物獨(dú)角蓮(Typhonium giganteum Engl.)的干燥塊莖。

2.1 白附子藥品炮制

2.1.1 藥典法

取凈白附子，大小分檔，浸泡，每日換水2～3次，數(shù)日后如起粘沫，換水后加白礬(每100kg白附子用白礬2kg)泡1日后再換水，至口嘗微有麻舌感為度，取出。將生姜片、白礬粉置鍋內(nèi)加適量水，煮沸后，倒入白附子共煮至無白心，撈出，除去生姜片，晾至6～7成干。切厚片，干燥。每100kg白附子，用生姜、白礬各12.50kg［1］。

2.1.2 礬制

取凈白附子，大小分檔，分別用清水浸泡，每日換水2～3次，浸泡數(shù)日至內(nèi)無生心為度，將鍋內(nèi)放入清水及白礬，加熱至沸，取泡好的白附子置鍋內(nèi)同煮，不斷翻動(dòng)，約煮4～5h切開內(nèi)無白心，以口嘗稍有麻辣感為度，撈出晾至6成干，燜潤(rùn)至內(nèi)外軟硬適宜，切片，曬干或烘干。每100kg白附子，用白礬10kg。

2.2 實(shí)驗(yàn)藥物的提取

分別取白附子生品、藥典法炮制品、礬制法炮制品飲片各150g，水提3次，合并濾液，濃縮至稠膏，于水浴加熱干燥，得粉末狀提取物。用蒸餾水配制成0.75g/ml和1.50g/ml的混懸液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 實(shí)體瘤模型建立［4］

取傳代接種后7天S180瘤源小鼠，無菌條件下從腹腔抽出瘤液，用滅菌生理鹽水稀釋至細(xì)胞計(jì)數(shù)約為1×107個(gè)/ml，取質(zhì)量18～22g清潔級(jí)昆明種小鼠，每鼠右腋皮下接種0.2mL。制成實(shí)體瘤型荷瘤小鼠模型。

3.2 動(dòng)物分組及給藥方法

將接種腫瘤后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為7組，分別記為藥典高劑量組、藥典低劑量組、礬制高劑量組、礬制低劑量組、生品高劑量組、生品低劑量組、空白組，每組12～13只。每天灌胃給藥1次，每次0.4ml?？瞻捉M給予相同劑量的生理鹽水。

各組給藥11天后，將小鼠脫臼處死，剖取腫瘤稱重，計(jì)算抑瘤率。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

白附子生品、藥典炮制品、礬制品水提物分別給予S180肉瘤小鼠，以瘤重、抑瘤率為考察指標(biāo)，經(jīng)SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，結(jié)果與空白組比較，各給藥組瘤重均低于空白組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P≤0.05);生品高劑量組和藥典低劑量組抑瘤率分別為46.72%和34.10%，有顯著性差異(P≤0.05)，其他各給藥組之間，抑瘤率無顯著性差異(P≥0.05)，但生品高劑量組瘤重均低于其他各組。結(jié)果詳見表1。

5 討論

5.1 本實(shí)驗(yàn)首次證明，不同濃度的白附子生品、藥典炮制品、礬制品水提物均有一定的抗腫瘤作用，且生品高劑量對(duì)S180肉瘤抑制作用最強(qiáng)。

5.2 白附子的毒性主要表現(xiàn)為對(duì)眼結(jié)膜、胃黏膜及皮膚的局部刺激作用。吳連英［5］等報(bào)道，白附子混懸液給小鼠灌胃1次用量達(dá)成人用量100倍以上時(shí)，未見有明顯的毒性反應(yīng)。生品冷浸液腹腔注射15g/kg(相當(dāng)口服計(jì)量的125倍)，結(jié)果呈明顯的毒性反應(yīng)。故白附子生品用于抗腫瘤時(shí)，建議口服給藥。

表1 白附子生品和不同炮制品對(duì)小鼠S180肉瘤抑瘤率

5.3 白附子抗腫瘤的機(jī)理尚不十分明確，張振凌［6］、單保恩［7］等人認(rèn)為，可能與增加免疫器官質(zhì)量、提高免疫機(jī)能有關(guān)。朱耀寰［8］等人認(rèn)為，白附子能降低小鼠瘤組織中突變型p53基因的表達(dá)，抑制瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。李艷鳳［9］等實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為，白附子可體外抑制胃癌SGC－7901細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)Bcl－2、Bax凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能是其抗腫瘤的重要作用機(jī)制之一。馬英麗［10］等人實(shí)驗(yàn)研究表明，白附子木質(zhì)素類化合物抗腫瘤作用機(jī)制可能與上調(diào)TRAIL及其受體TRAIL－R1和TRAIL－R2有關(guān)。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:70.

［2］ 艾鳳偉，李艷鳳，王佳瑜，等.白附子抗腫瘤藥理作用研究［J］.吉林中醫(yī)藥，2010，30(5):442 －443.

［3］ 李艷鳳，馬英麗.白附子炮制的歷史沿革與現(xiàn)代研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(4):105 －106.

［4］ 徐叔云，卞如鐮，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1786.

［5］ 吳連英，仝燕，程麗萍，等.白附子不同炮制品毒性比較研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1992，7(11):13.

［6］ 張振凌，趙麗娜，張紅偉，等.中藥白附子炮制前后對(duì)小鼠抗腫瘤作用的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2010，25(7):1009 －1011.

［7］ 單保恩，張金艷，李巧霞，等.禹白附對(duì)人T細(xì)胞和單核細(xì)胞的調(diào)節(jié)活性［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，21(10):768 －770.

［8］ 朱耀寰，遲相林.白附子抗腫瘤作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2006，22(3):122 －123.

［9］ 李艷鳳，唐麗萍，馬超，等.白附子提取物抑制人胃癌SGC－7901細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2010，44(16):1237－1240.

［10］ 馬英麗，李艷鳳，唐麗萍，等.白附子木脂素化合物調(diào)節(jié)人胃癌SGC－7901細(xì)胞TRAIL及其受體的表達(dá)［J］.中國(guó)新藥雜志，2010，19(3):225 －228.