蓬子菜有效部位總黃酮的急性毒性實驗研究

崔明宇，孫志偉，王艷，馬英麗

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江中醫(yī)藥大學北藥基礎與應用研究省部共建教育部重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040)

蓬子菜(Galium verum L.)為茜草科(Rubiaceae)拉拉藤(Galium)屬植物蓬子菜的干燥全草，又名雞腸草、黃牛尾、黃花米等。在我國東北地區(qū)分布廣泛，資源豐富。蓬子菜在東北民間有廣泛的藥用基礎，性溫，味苦、甘，具有清熱解毒、行血、利濕止癢之功效，即可內(nèi)服又可外用，用于治療肝炎、稻田皮炎、跌打損傷、蕁麻疹、婦女血氣痛等。臨床用其治療周圍血管病取得良好療效［1］。研究表明，蓬子菜總黃酮為治療周圍血管病的有效部位，為保證臨床用藥的安全性，為新制劑的開發(fā)提供可靠的安全性資料，本實驗對蓬子菜總黃酮灌胃給藥的急性毒性進行評價。

1 材料

1.1 藥品

蓬子菜總黃酮提取物(本實驗室自提，總黃酮含量57%)，以0.5%CMC溶液配制成最大給藥濃度(約含蓬子菜總黃酮0.50g/mL)。

1.2 實驗動物

昆明種小鼠80只，雌雄各半，5～6周齡，體質(zhì)量18～22g，購自黑龍江中醫(yī)藥大學藥物安全評價中心，動物合格證號:SYXK黑2008001。雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠5只，自由飲水和進食，室溫18～20℃，相對濕度50%，實驗室觀察1周。

2 方法與結(jié)果［2－3］

2.1 預實驗

昆明種小鼠20只，雌雄各半，實驗前禁食不禁水12h，分設實驗組與對照組，實驗組以最大給藥濃度、最大給藥劑量(0.3mL/10g)一次灌胃蓬子菜總黃酮，給藥后立即觀察動物中毒癥狀，連續(xù)觀察7天，期間觀察小鼠死亡數(shù)和一般情況。對照組灌胃等量0.5%CMC溶液，余同給藥組。

2.2 最大耐受量的測定

昆明種小鼠60只，實驗前禁食不禁水12h，按性別和體質(zhì)量隨機分成3組，雌雄各半，每組20只。分別設對照組、實驗一組、實驗二組，對照組給予同量0.5%CMC溶液，實驗組以最大給藥濃度、最大給藥劑量(0.3mL/10g)灌胃，其中實驗一組每日灌胃1次，實驗二組每日灌胃2次(間隔8h)，灌胃1日。連續(xù)觀察7日，詳細觀察與記錄對照組、實驗組體重、飲食、精神狀態(tài)、大便和皮膚毛色變化情況。實驗結(jié)束時，將全部動物處死、解剖、尸檢，肉眼檢查主要臟器組織有無異常病變情況，計算最大耐受量(MTD)。

2.3 結(jié)果

在預實驗中，小鼠以最大給藥濃度和最大給藥劑量灌胃后，觀察1周，無1例死亡，小鼠活動和飲食狀況良好，因此測不出LD50，故進行最大耐受量(MTD)測定。以最大給藥濃度和最大給藥劑量分別進行灌胃給予蓬子菜總黃酮提取物，實驗中發(fā)現(xiàn)，小鼠在第1次灌胃后均無異?，F(xiàn)象，而在第2次灌胃后有部分小鼠出現(xiàn)自主活動減少現(xiàn)象，但無豎毛、抽搐、驚厥、翻倒等異?，F(xiàn)象，且在灌胃后1～4h后活動恢復正常。灌胃后的小鼠連續(xù)觀察7日，小鼠灌胃后的體質(zhì)量、四肢活動、精神、毛發(fā)、飲水、糞便、尿液情況見表1，2。7日后處死受試小鼠并解剖、尸檢，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，外觀未見異常改變。結(jié)果，小鼠口服蓬子菜總黃酮MTD為30g/kg/d。

表1 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗小鼠體質(zhì)量變化(g，±s，n=10)

表1 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗小鼠體質(zhì)量變化(g，±s，n=10)

組別 性別 實驗前 第1天 第3天 第5天 第7天對照組 雌 20.76 ±1.61 20.9 ±1.62 22.1 ±1.76 22.58 ±1.58 23.16 ±1.59雄 20.38 ±1.1120.78 ±1.1321.38 ±1.2122.06 ±1.26 22.86 ±1.22實驗 雌 21.99 ±1.5722.21 ±1.6122.77 ±1.6623.31 ±1.55 23.81 ±1.67一組 雄 21.05 ±1.7221.31 ±1.7321.92 ±1.5922.44 ±1.62 23.01 ±1.60實驗 雌 21.80 ±1.5722.01 ±1.5822.44 ±1.6322.82 ±1.66 23.23 ±1.64二組 雄 21.76 ±1.5921.95 ±1.5822.39 ±1.5722.89 ±1.54 23.31 ±1.45

3 討論

由表1可以看出，實驗組小鼠體質(zhì)量的增加比對照組略少，可能為灌胃操作刺激或藥物本身對小鼠食欲造成一定影響，應通過長期毒性試驗做進一步考察。

由表2可知，小鼠灌胃后的四肢活動、精神、飲水、尿液情況均正常，但灌胃后前3日糞便顏色加深，3～4日后轉(zhuǎn)為正常，應該為藥物排泄所致。

小鼠灌胃后，對照組與雄性實驗組毛發(fā)正常，但雌性實驗組在灌胃后，毛發(fā)更為整齊和光亮，提示蓬子菜總黃酮提取物可能具有雌激素樣作用，此項藥理作用還有待進一步通過實驗對其進行驗證。

表2 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗小鼠反應情況(±s)

表2 蓬子菜總黃酮急性毒性試驗小鼠反應情況(±s)

組別 四肢活動 精神 毛發(fā) 飲水 尿液 糞便 死亡對照組 雌 正常 正常 正常 正常 正常 正常0雄 正常 正常 正常 正常 正常 正常 0實驗 雌 正常 正常 光亮 正常 正常 便色加深3日后正常0一組 雄 正常 正常 正常 正常 正常 便色加深3日后正常0實驗 雌 正常 正常 光亮 正常 正常 便色加深4日后正常0二組 雄 正常 正常 正常 正常 正常 便色加深4日后正常0

小鼠口服蓬子菜總黃酮MTD為30g/kg/d，如按臨床劑量，蓬子菜總黃酮成人(60kg)每日1.5g計算，小鼠MTD相當于60kg體重成人臨床日用量的132倍。說明蓬子菜總黃酮的急性毒性很小，臨床用藥的安全性較大。

由于急性毒性實驗是在1日內(nèi)給藥1次或數(shù)次，且觀察時間也比較短，雖然蓬子菜急性毒性實驗結(jié)果表明其具有較高的安全性，但其安全性評價還應結(jié)合長期毒性實驗做進一步驗證，以全面保證臨床用藥的安全性。

［1］ 趙鋼，呂勃川，孫秋，等.蓬子菜水溶液對股動脈硬化閉塞癥家兔模型血清 C－反應蛋白的影響［J］.中醫(yī)藥學報，2010，38(1):20－22.

［2］ 劉霞，王軍永，張佐.雙向固體發(fā)酵后雷公藤菌質(zhì)的急性毒性研究［J］.中醫(yī)藥學報，2011，39(2):33 －35.

［3］ 李冀，王聯(lián)政，沈德鳳，等.安體舒哥膠囊的急性毒性實驗研究［J］.中醫(yī)藥學報，2010，38(1):42－43.