花卉植物組織培養(yǎng)試管苗出瓶種植技術(shù)

□唐雪松 楊志娟

近年來植物組織培養(yǎng)技術(shù)取得了飛躍的發(fā)展，對生產(chǎn)的促進(jìn)作用也日益明顯，并逐漸向更廣闊的領(lǐng)域延伸?，F(xiàn)在，幾乎所有的植物，其器官、組織或細(xì)胞都能在適當(dāng)條件下離體培養(yǎng)成功。幾十年來，在發(fā)展和應(yīng)用這項技術(shù)上，許多國家競相投資，研究十分活躍，取得了豐碩的成果。

植物組織培養(yǎng)一般分為5個階段：無菌培養(yǎng)的建立階段；外植體生長和分化誘導(dǎo)階段；中間繁殖體的增殖階段；壯苗與生根階段；試管苗出瓶種植和苗期管理階段。目前很多研究主要偏重于對第二、三階段培養(yǎng)基配方的研究，而對最后一個階段，即試管苗出瓶種植和苗期管理階段研究較少。其實，這個階段非常重要，如果該階段技術(shù)掌握不好，試管苗的成活率低，很可能前功盡棄，造成人力物力的巨大浪費(fèi)。

試管苗是在無菌、完全營養(yǎng)供給、適宜光照、適宜溫度和100%相對濕度環(huán)境中生長的，并有適宜的植物激素調(diào)節(jié)生長代謝。一旦出瓶種植，生長環(huán)境發(fā)生了劇烈變化，如溫度不再像培養(yǎng)室中那樣適宜，濕度也不可能輕易能保持100%等，因而剛出瓶的幼苗是非常嬌嫩的，稍不慎便會造成大量死苗。那么，怎樣提高試管苗的成活率呢？通過對蝴蝶蘭、文心蘭、八仙花、大巖桐、一品紅、雙色茉莉、盾葉薯蕷等數(shù)十種試管苗大量移植比較試驗，筆者認(rèn)為，要保證較高的試管苗移植成活率，必須作好以下幾點：

一、必須選擇適于移栽的優(yōu)質(zhì)試管苗，作好植物的壯苗生根培養(yǎng)

要提高試管苗移栽成活率，選擇優(yōu)質(zhì)健壯的試管苗是前提。移栽的試管苗應(yīng)該是粗壯的，莖基部一般呈黃綠色，最好有較發(fā)達(dá)的根系，如果是木本植物，還應(yīng)略木質(zhì)化，并且根系與莖的維管束相通，而不是從愈傷組織中間發(fā)生。要達(dá)到這些要求，必須作好植物的壯苗生根培養(yǎng)。

1.在增殖培養(yǎng)中選擇已分化出嫩葉的小苗，分離成單苗或小苗叢轉(zhuǎn)移至壯苗生根培養(yǎng)基中 以使小苗停止增殖，迅速生根長高，便于移栽，一般2～4周即可生根，長出潔白的正常短根。大多數(shù)植物只需1次培養(yǎng)(如大巖桐、食用仙人掌、非洲菊等)，在較少情況下(如文心蘭、盾葉薯蕷等)，由于殘留在小苗里的細(xì)胞分裂素較多，影響生根，就必須轉(zhuǎn)接1～2次生根培養(yǎng)基。還有一些生長細(xì)弱的植物(如康乃馨、蝴蝶蘭等)在生根培養(yǎng)前要增加壯苗的步驟，使苗長粗壯，便于誘導(dǎo)生根和以后移植成活，采用的培養(yǎng)基一般為不加任何激素的1/2MS培養(yǎng)基。

2.壯苗生根培養(yǎng)基多采用1/2或1/4量的MS培養(yǎng)基 全部去掉或僅用很低濃度的細(xì)胞分裂素，并加入適量的生長素（一般用NAA），以促進(jìn)生根。對一些根系較細(xì)，同時又是叢生的植物（如秋海棠類、竹芋類等），可以考慮用“液體淺層靜置培養(yǎng)”。這種培養(yǎng)基的優(yōu)點較多：容易清洗，省時省工，而且培養(yǎng)苗粗壯、根系發(fā)達(dá)，還可以避免移栽和清洗時對根系的損害，同時省去了瓊脂，成本降低了70%。我們進(jìn)行鐵十字秋海棠生根培養(yǎng)（培養(yǎng)基：1/2MS+NAA 0.1～0.2+活性炭0.1）時采用了該方法，效果很好。

3.減少培養(yǎng)基中糖的含量和提高光照強(qiáng)度 一般糖約減少一半，光照強(qiáng)度增加3～5倍，可增強(qiáng)小苗的光合作用，減少對異養(yǎng)條件的依賴，同時增加試管苗的抗逆能力。雖然有時組培苗生長緩慢，但實踐證明，其成活率較高。通過壯苗生根培養(yǎng)，小苗已生根成為完整的再生植株，或者雖未生根但已長粗壯，適宜無根扦插，這時便可出瓶種植。

二、試管苗移栽前應(yīng)進(jìn)行煉苗

試管苗在培養(yǎng)室中無論營養(yǎng)、溫度、濕度和光照等條件都是最適宜的，如果馬上出瓶移栽，環(huán)境變化太快，試管苗很可能不適應(yīng)環(huán)境而夭折。所以在出瓶移栽前最好進(jìn)行3～15天的煉苗，讓試管苗有個逐漸適應(yīng)的過程。具體做法是：在移栽前應(yīng)將選好的試管苗連同培養(yǎng)瓶一起移出培養(yǎng)室，不打開瓶塞，放在潔凈明亮通風(fēng)良好的室內(nèi)1周左右，在保證濕度和營養(yǎng)的情況下讓小苗在瓶內(nèi)適應(yīng)外界環(huán)境，然后再取下瓶塞進(jìn)行煉苗，一般持續(xù)2～3天后進(jìn)行移栽。

三、選擇適于試管苗生長的種植介質(zhì)

試管苗移栽成活與否，種植介質(zhì)的選擇非常重要。種植介質(zhì)有很多種類，但并非所有種類都適用。適于試管苗生長的種植介質(zhì)必須符合以下要求：①疏松通氣；②適宜的保水性；③容易滅菌處理；④不利于雜菌滋生。其中最關(guān)鍵的一點就是種植介質(zhì)必須疏松通氣，否則試管苗根部極易腐爛，造成死苗。所以種植介質(zhì)常用的有：蛭石（粗粒狀，過細(xì)的蛭石粉不適宜）、珍珠巖、粗沙、爐灰渣、鋸木屑、苔蘚卷柏等，可以單用（大多數(shù)介質(zhì)），也可以一定的比例混用，最常用的是蛭石和珍珠巖混用（大巖桐、非洲菊、盾葉薯蕷等都適合）。移栽時可依據(jù)經(jīng)驗選擇適宜的種植介質(zhì)，或做幾組比較實驗，選擇出最適宜的一種。比如，文心蘭種植介質(zhì)我們選擇了6種不同的種植介質(zhì)(蛭石、珍珠巖、苔蘚、粗沙、朽木屑和紙箱屑)，結(jié)果以苔蘚和朽木屑效果較好。

關(guān)于種植介質(zhì)除了考慮物理結(jié)構(gòu)外，還要注意調(diào)節(jié)pH值，如山茶花一般要求pH值5.4左右。不同植物應(yīng)相應(yīng)調(diào)節(jié)種植介質(zhì)的pH值，以利成活，但大部分植物要求pH值中性偏酸。

四、防止菌類滋生

試管苗在培養(yǎng)瓶中的環(huán)境是完全無菌的，移栽出來后難以保證無菌條件，但應(yīng)盡量不使菌類大量滋生。試管苗成活率低的很大原因就是雜菌 (主要是細(xì)菌和真菌)污染。那么怎樣降低雜菌對試管苗的影響呢？我認(rèn)為應(yīng)該做好以下幾點：

1.試管苗出瓶時，要仔細(xì)洗去附著其上的培養(yǎng)基 因為培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，最易滋生雜菌。同時清洗時要細(xì)心，盡量少傷苗，傷口過多或根損傷過多是造成死苗的原因之一。因為創(chuàng)口容易滋生細(xì)菌，所以清洗時一定要仔細(xì)，不能用水管直接放水沖洗。最好用適溫清水漂洗，水溫不能太低，手感舒服即可。

2.分苗時，可適當(dāng)分離小叢，不必要求都分成單苗 可待移栽成活后，再逐次分植成單苗。

3.試管苗清洗干凈后，最好根部在低濃度的殺菌劑(如1/500的多菌靈)中浸上1～2秒 然后在陰處進(jìn)行晾苗，一般應(yīng)晾苗1～2小時，小苗基本晾干后才可進(jìn)行移栽。

4.保證栽培環(huán)境干凈、雜菌少 試管苗移栽前應(yīng)對種植介質(zhì)進(jìn)行滅菌處理，最好當(dāng)然是高壓滅菌，但費(fèi)力費(fèi)時。如果有條件的可以利用鍋爐房蒸汽進(jìn)行滅菌，無條件的也可進(jìn)行化學(xué)滅菌。我們試過KmnO4+CH2HO對朽木屑進(jìn)行滅菌處理，效果較好。

5.試管苗移栽后應(yīng)立即將濃度為800～1000倍液的滅菌劑(多菌靈、托布津、百菌清等)用噴霧器進(jìn)行噴淋 最好每7～10天噴1次，防止菌類滋生對試管苗的影響。

五、適宜的水分供應(yīng)

移栽小苗成活與否，水分條件非常重要，對某些植物來說(如文心蘭、八仙花等)甚至是成敗的關(guān)鍵。在培養(yǎng)瓶中，由于濕度大(基本達(dá)到100%)，所以瓶中小苗防止水分散失的角質(zhì)層等幾乎全無，根系也不發(fā)達(dá)，所以移栽小苗的水分供給就必須加強(qiáng)。當(dāng)然也不能太多，如果澆水過多，又會造成小苗根部積水，根部通氣不暢，造成爛根。為了解決這個矛盾，只有提高移栽小苗周圍的空氣濕度，一般應(yīng)達(dá)到90%左右，使葉部的蒸騰減少，盡量接近培養(yǎng)瓶中條件，使小苗始終保持挺拔的狀態(tài)?？刹捎玫姆椒ê芏?，如果用苗盤種植，可加蓋塑料薄膜，或罩上玻璃瓶即可，并不定期用噴霧器間歇噴霧。如果在溫室內(nèi)苗床上種植，濕度計是必須的，并安裝人工噴霧設(shè)備來保持葉面的空氣濕度。大多數(shù)植物必須在高濕度環(huán)境中才能順利成活，當(dāng)然也有少部分植物例外(如食用仙人掌對水分條件要求不高)。在個別實驗材料比較寶貴的情況下，最好先將小苗放置在濕濾紙上，令其幼根發(fā)生豐富的根毛后，使用滅菌劑處理后再移栽到消毒的介質(zhì)中，以加強(qiáng)試管苗對水分的利用，從而提高成活率。

六、注意掌握移栽季節(jié)和適當(dāng)?shù)墓鉁貤l件

試管苗在培養(yǎng)瓶中是全營養(yǎng)的，有豐富的糖作碳源，基本上屬異養(yǎng)。而出瓶后要靠自己進(jìn)行光合作用維持生存，因此光照不能太弱，但也不能太強(qiáng)，最好避免直射光，用強(qiáng)度較高的漫射光（強(qiáng)度約在1500～5000lx之間）。因為光太強(qiáng)，會增強(qiáng)植物的蒸騰作用，使水分平衡矛盾變尖銳，同時會灼傷嬌嫩的葉片，破壞葉綠素，使葉片失綠發(fā)黃，小苗不易成活。根據(jù)植物種類不同，苗的壯弱等因素考慮光的強(qiáng)度，適當(dāng)遮陰，以利小苗成活，一般中午太陽光照較強(qiáng)時最好用遮陰網(wǎng)進(jìn)行遮陰。

在培養(yǎng)室中，溫度一般是恒定的(大多數(shù)植物要求25～27℃)，試管苗生長良好，移栽出瓶后，為了保證試管苗的成活率，溫度條件也需考慮。根據(jù)植物種類不同，適宜溫度也有差別，喜溫植物(如竹芋類)，以25℃左右為宜；喜涼植物(如菊花)，以20℃左右為宜。溫度不能太高，也不能太低，太高會造成蒸騰加強(qiáng)，影響水分平衡，同時容易使菌類滋生；溫度太低又會使試管苗生長遲緩，不易成活。能控制溫度的溫室大棚成本太高，所以移栽季節(jié)的選擇非常重要。一般以春秋季節(jié)為好，冬天也可以 (可以用塑料薄膜覆蓋提高溫度)，夏天一般不進(jìn)行試管苗的移栽。

試管苗移栽成功與否，前10天是關(guān)鍵，這段時間要多觀察，發(fā)現(xiàn)問題要及時處理。只要10天過去后，試管苗生長正常，基本上即可成活。但后期管理也不能懈怠，一般兩周后要開始施肥，可以參照無土栽培的方法自配營養(yǎng)液，也可直接用l/2MS培養(yǎng)基大量元素的水溶液，用噴霧器進(jìn)行噴淋，1周1次。如果生長正常，約15～20天后新根生長，幼芽萌發(fā)，試管苗即可判斷成活。

綜上所述，只要注意了試管苗本身質(zhì)量，同時控制好了移栽的環(huán)境條件，即維持好水分平衡、選擇好種植介質(zhì)、防止了雜菌污染和創(chuàng)造適宜的光、溫條件，試管苗成活率一般能達(dá)到90%以上。但不要所有植物試管苗的移栽都采用一個模式，畢竟植物種類不同，對生長的要求也不一樣，必須要有科學(xué)的態(tài)度。在一般原則下，根據(jù)植物特點，仔細(xì)安排幾種不同的處理試驗，很快就能掌握移栽的關(guān)鍵。所以，我認(rèn)為管理人員的責(zé)任心和事業(yè)心是最重要的，因為試管苗的移栽管理并不復(fù)雜，只要多實踐，多動腦筋，用心管理，試管苗的成活并不是困難的事。

（通聯(lián)：成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院 溫江區(qū)611130）