禽呼腸孤病毒病的研究進(jìn)展

李巨銀 胡新崗 魏 寧 江蘇畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 225300

呼腸孤病毒是1954年Ramos和Sbani等先從健康兒童的糞便中分離出來的，1975年國際病毒命名委員會(huì)定名為呼腸孤病毒科(Reoviridae)。呼腸孤病毒科是一類無囊膜雙股分節(jié)段的RNA病毒。包括9個(gè)屬，其中與獸醫(yī)學(xué)有關(guān)的是正呼腸孤病毒屬，環(huán)狀病毒屬和輪狀病毒屬，廣泛分布于自然界。禽呼腸孤病毒感染引起了世界各國養(yǎng)禽生產(chǎn)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，2002年波蘭學(xué)者報(bào)道了與吸收障礙綜合癥有關(guān)的雞腸型呼腸孤病毒以及以肝脾腎有壞死性病灶為特征的壞死型。該病以5-7周齡肉用雞多發(fā)，肉用雞的發(fā)病率可達(dá)100%，死亡率為1%-3%。近年來，隨著禽呼腸孤病毒的感染、流行日趨增加和臨床疾病形式的不斷多樣化，防制禽類呼腸孤病毒感染的難度不斷增大。為有針對性地防制禽類呼腸孤病毒感染，為我國禽類呼腸孤病毒所致疫病的防治提供理論依據(jù)，現(xiàn)將其綜述如下。

1 病原研究

1954年，F(xiàn)ahey和Craw ley首次從有慢性呼吸道疾病的雞呼吸道內(nèi)分離到禽呼腸孤病毒。1972年，Walker等人通過電鏡觀察定名為呼腸孤病毒。1976年，hwaitz首次報(bào)道了蛋雞的呼腸孤病毒感染，F(xiàn)ujskai等人在1969年從火雞分離到幾株呼腸孤病毒。1982年，Pgae首次報(bào)道了火雞的呼腸孤病毒感染。據(jù)報(bào)道，新西蘭(1987年)、印度(1988年)和波蘭(2000年)都分離到高致病性的雞源呼腸孤病毒。此外，意大利、荷蘭、巴西、阿根廷、法國、以色列、英國相繼報(bào)道了呼腸孤病毒感染。1984年有人用瓊擴(kuò)法初步證實(shí)我國部分地區(qū)的雞場中有該病存在，1985年王錫坤證實(shí)了我國也有雞病毒性關(guān)節(jié)炎發(fā)生。1988年長春某雞場發(fā)生了與雞病毒性關(guān)節(jié)炎相似的雞病，后確定為病毒性關(guān)節(jié)炎病毒-禽呼腸孤病毒。同年，江西省某市也爆發(fā)了疑似呼腸孤病毒病，初步認(rèn)為是禽呼腸孤病毒所致的病毒性關(guān)節(jié)炎。1992年陳士友從患關(guān)節(jié)炎病雞腸道內(nèi)分離到一株禽呼腸孤病毒，定名為NAu-8902。1993年，陳士友等從外觀正常的雞胚中分離到一株AVR病毒株。1996年，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)趙振芬分離到一株無毒株。禽呼腸孤病毒很容易從禽源細(xì)胞培養(yǎng)物中分離。常用的細(xì)胞培養(yǎng)是禽原代細(xì)胞，包括雞胚成纖維細(xì)胞、肝、肺、腎、巨噬細(xì)胞和肇丸細(xì)胞。最常用的是雛雞腎細(xì)胞(2-6周齡)，用各種方法分離本病毒的比較結(jié)果表明，以雞肝細(xì)胞最敏感，其次為雞腎細(xì)胞。感染呼腸孤病毒的雞源LL易在雞胚內(nèi)生長。初次分離，一般在接種后3-5天雞胚死亡，胚體因皮下出血而呈淡紫色。

2 病毒特性和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)研究

禽類呼腸孤病毒(Avina:oeviruses)為無囊膜，呈球形，雙層衣殼和二十面對稱的dsRNA病毒。粒子直徑約60-80nm，外層衣殼上有92顆中空的顆粒。在CsCI梯度中，感染病毒子的密度為1.29-1.30/ml，無感染性空衣殼為1.29-1.309/ml，病毒芯髓為1.44g/ml。純化病毒只含有RNA和蛋白質(zhì)，平均含量分別為18.7%和81.3%。病毒在胞漿內(nèi)復(fù)制，有時(shí)呈晶格排列。對熱、pH3和DNA代謝抑制物有抵抗力。70%乙醇和0.5%有機(jī)碘可滅活病毒。一般無血凝活性。另外它還具有獨(dú)特的生物學(xué)特性:

（l）無血凝活性，能誘導(dǎo)細(xì)胞融合和多數(shù)毒株對自然宿主具有致病性。

(2)血清學(xué)方法證實(shí)，禽類呼腸孤病毒各毒株之間具有共同的群特異性抗原(與哺乳類RoeV無交叉抗原)，但由于存在大量的交叉反應(yīng)，有些群不能作為獨(dú)立的血清型，故禽類呼腸孤病毒只能以抗原亞型存在。

(3)通過對禽類呼腸孤病毒各代表株進(jìn)行SDS一隊(duì)GE核酸電泳分析，禽類呼腸孤病毒的核酸電泳圖譜明顯有別于哺乳類呼腸孤病毒株，即使在禽類呼腸孤病毒株之間也存在明顯的多態(tài)性，但目前尚未發(fā)現(xiàn)這種差異與血清型及致病性相關(guān)。

3 流行病學(xué)

禽類呼腸孤病毒廣泛存在于自然界，現(xiàn)已從許多種鳥類發(fā)現(xiàn)該病毒。目前認(rèn)為雞和火雞是唯一可引起關(guān)節(jié)炎或鍵鞘炎的自然或?qū)嶒?yàn)宿主。同時(shí)認(rèn)為不同品系的肉雞對該病的易感性稍有差別。蛋雞偶爾也有發(fā)生。家兔、倉鼠、大鼠、小鼠、豚鼠、鴿和金絲雀對該病的實(shí)驗(yàn)性感染一般不敏感。南非、法國和以色列報(bào)道鴨中有一種病毒病，死亡率很高，表現(xiàn)為全身不適并伴有腹瀉?；记?，尤其是受感染的幼齡雞和番鴨，為同舍禽群的潛在傳染源。該病還可垂直傳播，但蛋傳播率很低。該病的傳播可分為水平傳播和垂直傳播兩種，水平的傳播主要是由雞間的直接或間接引起的。垂直傳播主要是通過雞蛋傳播。在生殖器官中也己證明有病毒存在，但經(jīng)卵傳播率較低。病毒可在雞體保存活289天以上，并經(jīng)腸道排出，隨糞便污染飼料和飲水。所以，帶毒雞是重要的傳染源。許多試驗(yàn)表明，該病毒可從試驗(yàn)的攻毒雞向非直接接觸的對照雞傳播，這可能是由呼吸道排出的病毒通過空氣傳播所致。該病的潛伏期因感染的途徑不同而有所差異，實(shí)驗(yàn)接種2周齡雞表明，足墊接種為1天，肌肉、皮下、靜脈、竇內(nèi)接種為11天，氣管接種為9天，接觸感染可達(dá)13天。經(jīng)口和呼吸道接種為4天，各器官均可見到病毒，而接種后14-15天則大大減少，25天后除骨盆和鍵部有局限性病毒外，其他器官均未見到病毒。

4 診斷方法

動(dòng)物在受到病毒感染后，體內(nèi)產(chǎn)生抗體，如果能與相應(yīng)的病毒粒子特異性地結(jié)合，使后者喪失感染力，這種抗體就稱為中和抗體，中和抗體一般使針對病毒的蛋白衣殼或囊膜抗原的，并不針對病毒粒子的內(nèi)部成分。應(yīng)用己知的病毒或病毒抗原，可以測知病畜體內(nèi)中和抗體的存在及其效價(jià)。應(yīng)用己知的抗病毒血清或中和性單克隆抗體，也可以進(jìn)行病毒的鑒定，因此中和實(shí)驗(yàn)也常用于新分離病毒株的鑒定，中和實(shí)驗(yàn)具有高度的敏感性和免疫特異性，?？捎糜趥刹炱渌鍖W(xué)反應(yīng)難以測出的病毒株之間的抗原差異。應(yīng)用同一病毒不同型的毒株或者應(yīng)用不同型的標(biāo)準(zhǔn)血清，即可測知相應(yīng)抗血清或病毒的型別。進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)，首先要選擇實(shí)驗(yàn)宿主。中和實(shí)驗(yàn)的宿主系統(tǒng)主要有動(dòng)物、雞胚、細(xì)胞三大類。由于大多數(shù)病毒可在組織培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)生長、增殖并產(chǎn)生細(xì)胞病變，而應(yīng)用組織培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)，又遠(yuǎn)較實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和雞胚方便，結(jié)果比較穩(wěn)定一致，不存在個(gè)體差異問題，因此目前主要應(yīng)用組織培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)。近年來應(yīng)用微量培養(yǎng)板上培養(yǎng)的單層細(xì)胞進(jìn)行微量中和實(shí)驗(yàn)，又比一般的試管法簡便的多，而且易于判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，適于進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)。

5 防制

該病毒以水平和垂直方式傳播、分布廣泛以及具有較高抵抗力的特點(diǎn)，因此防制上存在一定難度，為此加強(qiáng)綜合防制和飼養(yǎng)管理顯得十分重要。一般性的綜合防制措施有：避免各種應(yīng)激因素，提供全價(jià)飼料，加強(qiáng)禽舍消毒和衛(wèi)生管理。一般是對禽舍徹底清洗并用堿液和.05%有機(jī)碘作徹底消毒，以杜絕病毒的水平傳播。健康禽群尤應(yīng)警惕防止引進(jìn)帶毒雞(鴨)胚或污染病毒的疫苗，使用抗菌素控制細(xì)菌合并或繼發(fā)感染，尚無有效疫苗進(jìn)行防疫時(shí)，發(fā)病初期注射自制高免卵黃抗體有一定效果。

免疫接種時(shí)合理選用疫苗和制定免疫程序，是預(yù)防效果成敗的關(guān)鍵因素。目前預(yù)防ARV感染可用的有弱毒苗和滅活苗兩種。由于各流行毒株存在血清型的差異，不同血清型之間不能提供交叉保護(hù)作用，故應(yīng)選用同型疫苗。d1雛雞對致病性ARV最易感，只有在ZW才開始有抵抗力，正因有這一易感期，所以疫苗和接種程序應(yīng)針對ld雛雞來提供免疫保護(hù)。為了解決好這一矛盾，目前采用的方法是，先用滅活疫苗，對開產(chǎn)前(2-3W)母雞進(jìn)行預(yù)防接種，以保證雛雞體內(nèi)在這一易感期有保護(hù)性的母源抗體存在，這樣不僅可防止疫苗毒經(jīng)卵傳播而且對限制潛在的垂直傳播有重要作用。不過這種免疫力通常對同源性的血清型效果好。因此滅活苗往往由抗原性相似的幾株病毒制備，也可考慮應(yīng)用當(dāng)?shù)胤蛛x株制備疫苗。