康成貼膏對(duì)昆明小鼠鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

潘 堅(jiān) 王禹斌 周慧英 王 婧 周正宇 黃 猛 薛智謀*

（1 蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)中心，江蘇 蘇州 215123；2 蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江蘇 蘇州 215123）

疼痛是人類疾病中發(fā)生率最高的癥狀之一。導(dǎo)致疼痛的原因較多，組織或器官功能損傷均可導(dǎo)致疼痛。2001年國(guó)際疼痛研究會(huì)定義為：“疼痛是實(shí)際或潛在組織損傷相關(guān)聯(lián)的不愉快的感覺(jué)和情緒體現(xiàn)”[1]。傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療疼痛方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。中醫(yī)通過(guò)內(nèi)治、外治、針刺三個(gè)途徑實(shí)現(xiàn)辨證施治：一是內(nèi)治法，使用經(jīng)典的，傳統(tǒng)認(rèn)為可抑制疼痛或促進(jìn)疼痛消除的藥物單方或復(fù)方施治；二是外治法，是在疼痛局部或特定腧穴敷貼特制藥膏，或涂抹特制藥液；三是針刺或針?biāo)幗Y(jié)合，達(dá)到“協(xié)同增效”目的[2]。

康成貼膏是由活血化瘀、消腫止痛的中藥組成的復(fù)方貼劑，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)扭體法和熱板法實(shí)驗(yàn)，外敷施用康成貼膏，觀察其對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用，以期為康成貼膏的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

康成貼膏：蘇州康成醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品，3.95克生藥/片，批號(hào)：060401。臨用前用醫(yī)用凡士林（天津市大茂化學(xué)試劑廠，500g/罐，批號(hào)：20051121）配制成三種濃度的藥膏即每g藥膏分別含生藥0.66g、1.32g、2.64g。陽(yáng)性對(duì)照藥：云南白藥膏，云南白藥集團(tuán)無(wú)錫藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20073015，10cm×6.5cm，批號(hào)：070749。脫毛膏：上海詩(shī)碧化妝品有限公司，60mL/支，衛(wèi)妝特字：（2002）第0043號(hào)，批號(hào)：50060001。昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22g，清潔級(jí)，由蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：XCYK（蘇）2002～0008，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SYXK（蘇）2002～0037。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

熱板法：實(shí)驗(yàn)用雌性昆明種小鼠，小鼠兩側(cè)后肢均用脫毛膏脫毛。用RCY-2型熱板測(cè)痛儀（55±0.5）℃檢測(cè)小鼠熱板反應(yīng)潛伏期（自小鼠放入熱板至出現(xiàn)舔后足或跳躍所需要時(shí)間即為該小鼠的痛閾值），保留反應(yīng)潛伏期在5～30s的雌性小鼠，＜5s或者＞30s的小鼠剔除，選取50只，隨機(jī)分為五組，分別為空白對(duì)照組，高、中、低劑量組，云南白藥膏組，每組小鼠各10只。以兩次測(cè)痛的平均熱板痛閾值作為基礎(chǔ)痛閾值，空白對(duì)照組不給藥，各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日在后肢脫毛處敷貼藥膏1次，每次保持10 h，連續(xù)給藥3d，第4天給藥后1h，除去貼膏，60min、120min、180min后測(cè)定小鼠痛閾值，如超出60s無(wú)反應(yīng)者則取出，按60s計(jì)。

扭體法：小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為五組，分別為空白對(duì)照組，高、中、低劑量組，云南白藥膏組，空白對(duì)照組不給藥，各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日在背部脫毛處貼敷藥膏1 次，每次保持10 h，連續(xù)給藥3d，第4天給藥后1h后腹腔注射1%冰乙酸溶液（0.1mL/10g），腹腔注射10min后，以小鼠出現(xiàn)腰部肌肉反復(fù)收縮，腹部?jī)?nèi)凹，軀干與后肢伸張、臀部抬高等為扭體反應(yīng)陽(yáng)性。觀察并記錄10min內(nèi)各組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。以下列公式計(jì)算痛覺(jué)抑制率，痛覺(jué)抑制率＝（正常對(duì)照組扭體數(shù)－給藥組扭體數(shù)）/正常對(duì)照組扭體數(shù)×100%。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 小鼠熱板反應(yīng)

小鼠熱板反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各組動(dòng)物給藥前無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），康成貼膏給藥4d（停止給藥）后的120min，可見(jiàn)高劑量組小鼠痛閾較空白組明顯提高（P＜0.01），且優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照。給藥4d后的180min，高、中、低劑量組小鼠痛閾均明顯提高（P＜0.01，P＜0.05），高劑量組優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照。提示，康成貼膏可提高小鼠對(duì)熱板反應(yīng)的疼痛閾值，具有抑制疼痛作用，見(jiàn)表1。

表1 康成貼膏對(duì)小鼠熱板反應(yīng)的影響（±s）（n=10）

表1 康成貼膏對(duì)小鼠熱板反應(yīng)的影響（±s）（n=10）

注：*P＜0.05， **P＜0.01，差異顯著，與空白對(duì)照組比較

組別 劑量g/kg 痛閾值（s）疼痛閾值 給藥后60分 給藥后120分 給藥后180分空白對(duì)照 - 14.70±3.06 14.30±3.20 13.30±4.24 14.10±7.09低劑量組 0.66 14.60±3.63 14.70±2.35 16.70±7.21 20.30±4.03*中劑量組 1.32 14.50±4.33 14.80±2.62 17.30±6.06 21.30±2.16*高劑量組 2.64 15.20±3.44 15.60±3.16 23.10±4.65**22.80±5.05**陽(yáng)性對(duì)照 1/30貼 15.30±4.34 15.00±2.58 18.00±4.62* 20.10±4.07*

2.2 小鼠扭體反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腹腔注射冰乙酸后，可引起小鼠腹腔疼痛，出現(xiàn)扭體反應(yīng)。給藥后各組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)均明顯減少，與空白對(duì)照組比較，均達(dá)到差異顯著（P＜0.01）。低、中、高劑量對(duì)痛覺(jué)抑制率分別為33.43%、40.29%、60.86%。高劑量組應(yīng)對(duì)疼覺(jué)抑制率高于陽(yáng)性對(duì)照。提示康成貼膏具有明顯的鎮(zhèn)痛作，見(jiàn)表2。

表2 康成貼膏對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響（±s）（n=10）

表2 康成貼膏對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響（±s）（n=10）

注：*P＜0.05，**P＜0.01，差異顯著，與空白對(duì)照組比較

組別 劑量(g·kg-1) 扭體數(shù)(次數(shù)/10分鐘) 痛覺(jué)抑制率(%)空白對(duì)照組 - 35.00±8.92 -低劑量組 0.66 22.33±8.65** 33.43中劑量組 1.32 20.90±5.92** 40.29高劑量組 2.64 13.70±8.83** 60.86陽(yáng)性對(duì)照 1/30貼 16.40±5.23** 53.14

3 討 論

疼痛是臨床最常見(jiàn)的病癥之一，可發(fā)生于患病機(jī)體的任何一個(gè)部位，且疼痛可伴隨多種疾病，成為常見(jiàn)并發(fā)癥。目前，疼痛的治療手段，不局限于采用藥物直接治療，也擴(kuò)大到外敷、物理刺激等多種療法[3]。

康成貼膏是由血竭、乳香、沒(méi)藥、當(dāng)歸、川芎、麝香、冰片、牛膝等傳統(tǒng)活血化瘀、消腫止痛的中藥組成的復(fù)方劑，具有補(bǔ)腎健骨、活血止痛的功效。實(shí)驗(yàn)證明，川芎能明顯提高小鼠血中超氧化物歧化酶的含量，同時(shí)減少脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物和血液中的5-羥色胺和組胺[4]，減少外周致痛物質(zhì)及誘導(dǎo)痛敏物質(zhì)的分泌。血竭等可使小鼠耳廓細(xì)動(dòng)脈、細(xì)靜脈擴(kuò)張，毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)量增多，血流速度加快，并降低右旋醣酐血黏度，減輕局部致痛物質(zhì)的堆積[5]。阿片肽類是公認(rèn)的內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)。現(xiàn)代研究表明在促進(jìn)感覺(jué)傳入的外周末梢也存在性質(zhì)上與腦內(nèi)相似的阿片受體，目前已證實(shí)在外周受損組織內(nèi)含有大量的β－內(nèi)啡肽、腦啡肽及少量強(qiáng)啡肽等內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)。麝香、冰片等可明顯提高使用者血漿β－內(nèi)啡肽含量，增加外周內(nèi)源鎮(zhèn)痛物質(zhì)的釋放[6]。β－內(nèi)啡肽作為經(jīng)典內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)，在下丘腦、腦和脊髓中分布廣泛，具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。5－羥色胺在外周雖為致痛物質(zhì)，但在中樞可抑制脊丘束神經(jīng)元的活動(dòng)，產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng)。通過(guò)增加以上中樞類鎮(zhèn)痛物質(zhì)，部分中藥制劑可產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[7]。

將康成貼膏制成復(fù)方劑，通過(guò)外敷透皮等方式發(fā)揮療效。熱板法實(shí)驗(yàn)中，小鼠的爪趾對(duì)熱刺激非常敏感，其表現(xiàn)為跳躍、縮足和舔后趾，適合于評(píng)價(jià)中樞鎮(zhèn)痛研究藥物。扭體試驗(yàn)是通過(guò)注射冰醋酸刺激腹膜產(chǎn)生疼痛表現(xiàn)，適合于外周鎮(zhèn)痛研究[8,9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，康成貼膏能有效提高小鼠對(duì)熱板反應(yīng)的疼痛閾值，增大疼痛抑制率，通過(guò)熱板法和冰醋酸扭體法分別從中樞鎮(zhèn)痛和外周鎮(zhèn)痛兩方面進(jìn)行藥效學(xué)的評(píng)價(jià)，證明康成貼膏具有鎮(zhèn)痛作用，為下一步研究提供參考。

[1] 安志明,王杰軍.神經(jīng)病理性疼痛的藥物治療進(jìn)展[J].中國(guó)疼痛學(xué)雜志,2008,14(1):42-44.

[2] 張利泰,張法勝.針?biāo)幗Y(jié)合治療痛癥研究思路考釋[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2004,22(9):1742-l743.2001:491-492.

[3] 張景明,陳震林.疼痛的現(xiàn)代研究[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,32(3):9-10.

[4] 孟明慧,任清華,馬燦華.癌痛克對(duì)微循環(huán)及超氧化物歧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化物的影響[J].腫瘤防治雜志,2002,9(5):553.

[5] 熊元君,劉滿江,劉發(fā).復(fù)方血竭擦劑的抗炎止痛與活血化瘀作用[J].中藥藥理與臨床,1999,15(3):30-32.

[6] 陶寰,劉永年,李俊松.癌痛寧巴布劑治療癌痛的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)雜志,2002,43(7):507-510.

[7] 牛紅梅.癌痛欣滴鼻劑治療癌痛的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),1999,23(6):430-434.

[8] H.G沃格爾,w.H沃格爾.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南-新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學(xué)評(píng)價(jià)[M].北京:科學(xué)出版社,2004.

[9] 馮麗娟,周本杰.退熱止痛散活性部位解熱鎮(zhèn)痛藥效評(píng)價(jià)[J].中藥材,2009,32(4):589-592.