人類免疫缺陷病毒抗體初篩假陽性結(jié)果分析

劉曉峰 翟悅

自1985年我國(guó)發(fā)現(xiàn)首例艾滋病(HIV)至今，國(guó)內(nèi)HIV流行趨勢(shì)日益嚴(yán)重，目前對(duì)艾滋病尚無有效的治療措施，因此，對(duì)艾滋病的預(yù)防顯得尤為重要。HIV抗體檢測(cè)是艾滋病早期診斷的主要依據(jù)，為了最大限度并及時(shí)地發(fā)現(xiàn)所有的HIV抗體陽性者，血液篩查HIV抗體已廣泛開展。我院2008～2011年共有38790例進(jìn)行了HIV初篩檢測(cè)。共有15例初篩陽性的標(biāo)本。經(jīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)其中9例陽性，4例陰性，2例不確定?，F(xiàn)就HIV抗體假陽性影響因素及處理方法分析如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2008～2011年兩年內(nèi)，我院共有38790例進(jìn)行了HIV初篩檢測(cè)。

1.2 主要試劑 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)試劑(珠海麗珠試劑股份有限公司、上?？迫A生物工程股份有限公司診斷試劑盒);膠體金法檢測(cè)試劑(上?？迫A生物工程股份有限公司診斷試劑盒)。經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)，批檢合格且在有效期內(nèi)。

1.3 儀器 ELx800型酶標(biāo)儀和ELx50型洗板機(jī)。酶標(biāo)儀每年通過吉林省計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院的檢定為合格。

1.4 方法 嚴(yán)格按廠家試劑說明書進(jìn)行，根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》2009年修訂版要求，對(duì)初篩檢測(cè)陽性的標(biāo)本，使用與初次檢測(cè)相同的試劑及另外一種試劑或方法進(jìn)行雙孔復(fù)檢，兩孔陽性或一陰一陽，均送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。

2 結(jié)果

2008～2011年我院共檢測(cè)38790例，其中有15份標(biāo)本初篩陽性，9例標(biāo)本經(jīng)確認(rèn)后為陽性，4例確認(rèn)后為陰性，2例為不確定。

3 討論

抗體初篩試驗(yàn)假陽性原因及處理原則：

3.1 受檢者自身的原因 某些疾病的部分抗原性物質(zhì)和某些自身免疫病患者的自身抗體與HIV的某些抗原決定簇有交叉反應(yīng)性或非特異性反應(yīng)［1-3］，如血液系統(tǒng)惡性病變、多發(fā)性膽汁型肝硬化、酒精性肝炎、多發(fā)性骨髓瘤、腎移植或慢性腎衰;惡性腫瘤、感染梅毒、結(jié)核、瘧疾或絲蟲病等或疫苗接種者;病毒感染如巨細(xì)胞病毒、EB病毒、乙型肝炎、丙型肝炎;系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(抗鏈球菌溶血素“O”、C反應(yīng)蛋白、類風(fēng)濕因子、抗核抗體等);特殊生理情況如過敏性體質(zhì)、懷孕都易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。這4份篩查假陽性標(biāo)本均為惡性腫瘤患者，其中一名患者有乙肝病史，分析原因與個(gè)體免疫差異有關(guān)，目前的初篩診斷試劑還不能完全避免這種假陽性結(jié)果。

3.2 試劑的原因 目前，國(guó)內(nèi)外血源篩查仍主要使用ELISA(雙抗原夾心法)試劑，篩選實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的盡可能檢出所有的陽性標(biāo)本，不能漏檢，即敏感性要高。這樣就可能出現(xiàn)一些假陽性反應(yīng)。我們實(shí)驗(yàn)室主要用的是珠海麗珠生物試劑有限公司和上海科華有限公司生產(chǎn)的HIV(1/2型)抗體診斷試劑盒(雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法)，快速法用的是上海科華有限公司生產(chǎn)的膠體金試劑條。每年在吉林省臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)中成績(jī)優(yōu)秀，4例假陽性標(biāo)本經(jīng)我們多次檢測(cè)均為陽性反應(yīng)表明該患者體內(nèi)存在某種能與試劑盒中反應(yīng)的物質(zhì)，可能和試劑包被的抗原特異性位點(diǎn)選擇差異、標(biāo)記抗原的純度、試劑制作過程的污染有關(guān)。實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按說明書操作，以降低由試劑的原因造成假陽性結(jié)果的比率。若應(yīng)用某種試劑持續(xù)出現(xiàn)篩查假陽性結(jié)果，應(yīng)考慮更換試劑。

3.3 實(shí)驗(yàn)室操作的原因

3.3.1 標(biāo)本 血清標(biāo)本分離不完全，血清中混有纖維蛋白原或紅細(xì)胞成份;標(biāo)本量過多，手工操作時(shí)，在加樣后放入孵箱前部分標(biāo)本等待時(shí)間過長(zhǎng);溶血、黃疸、被細(xì)菌污染的標(biāo)本中常含有過氧化物酶，使用辣根過氧化物酶為標(biāo)志物的試劑，就會(huì)出現(xiàn)非特異性顯色，造成假陽性。標(biāo)本避免溶血。

3.3.2 加樣 加樣時(shí)槍頭沒有對(duì)準(zhǔn)相應(yīng)的板孔，或者加樣太快致試劑或標(biāo)本的飛濺，出現(xiàn)污染假陽性結(jié)果。加樣時(shí)槍頭懸空，對(duì)準(zhǔn)板孔，不能觸及板孔底部;加樣時(shí)應(yīng)緩慢，避免標(biāo)本飛濺及氣溶膠的污染。

3.3.3 洗板 洗板機(jī)洗板時(shí)，由于血液中纖維蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，直接影響本底;在洗板機(jī)洗板完畢后，拍板由人工操作，操作不當(dāng)就可能使陽性標(biāo)本孔的液體污染其他孔導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。

3.3.4 反應(yīng)溫度 溫箱孵育時(shí)密封不完全，稀釋液蒸發(fā)較多，吸附于孔壁，不易清洗徹底，造成假陽性。

對(duì)HIV抗體篩查檢測(cè)陽性標(biāo)本，篩查實(shí)驗(yàn)室在條件允許時(shí)，建議盡量采集第2份血樣標(biāo)本后再送確證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)［5］。對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)［6］。確證實(shí)驗(yàn)室可以通過免疫印跡(Western blot，WB)試劑及流行病學(xué)調(diào)查加以確認(rèn)。

綜上所述，HIV抗體初篩假陽性不可避免，實(shí)驗(yàn)室必須采取應(yīng)對(duì)措施，嚴(yán)格質(zhì)量控制、規(guī)范操作規(guī)程，不斷加強(qiáng)業(yè)務(wù)知識(shí)和提高操作技能。在保證不漏檢的情況下，提高陽性結(jié)果的準(zhǔn)確率以及進(jìn)行正確的解釋。嚴(yán)格遵守艾滋病檢測(cè)程序，對(duì)篩查試驗(yàn)陽性反應(yīng)者不能出具“HIV抗體陽性”報(bào)告，并且不能告之為HIV抗體陽性，對(duì)陽性結(jié)果的報(bào)告必須以確證試驗(yàn)為準(zhǔn)。，在綜合了解被檢測(cè)者的人群特征、體質(zhì)特征和流行病學(xué)接觸史的情況下，進(jìn)行篩查陽性告知，做好解釋工作，以免加重患者心理恐慌。

［1］李燕，修淑麗，任芙蓉，等.對(duì)獻(xiàn)血者HIV抗體測(cè)定的評(píng)價(jià).北京醫(yī)學(xué)，2007，29(6)：374-374．

［2］楊積朋，張弛.144例HIV抗體篩查陽性與免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比研究.安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，17(2)：84．

［3］Schuval S，Lindsey JC，Stapleton JT，et al.GB virus C infection in children with perinatal human immunodeficiency virus infection.Pediatr Infect Dis J，2005，24：417．

［4］王彥厚.臨沂市HIV抗體篩查實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)況調(diào)查與質(zhì)量評(píng)價(jià).中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18(3)：533．

［5］張華榮，曾令聰，陳正明，等.出現(xiàn)HIV抗體檢測(cè)結(jié)果假陽性報(bào)告的原因分析.中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志，2008，31(6)：395．

［6］中國(guó)疾病預(yù)防控制中心.北京：全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范，2009：7．