人源抗狂犬病毒中和抗體Fab091的制備及鑒定

科研人員制備出一株具有中和活性的抗狂犬病毒的基因工程中和抗體Fab，證實該抗體與狂犬疫苗聯(lián)用，對狂犬病毒暴露后小鼠具有較好的保護作用。

狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患急性傳染病，病死率極高，發(fā)病后進展速度快，至多10天內(nèi)死亡，死亡率幾乎為100%。每年約有50000人和數(shù)以百萬計的野生動物死于狂犬病。

該病存在于60多個國家，其中東南亞發(fā)病率尤高。中國的發(fā)病率為0.4/10萬～1.58/10萬，死亡人數(shù)在法定傳染病中已躍居第2位。狂犬病毒基因組全長約12kb，具有5個結(jié)構(gòu)基因，其中由G基因編碼的糖蛋白，是病毒與宿主細胞結(jié)合的配體，介導(dǎo)了病毒與靶細胞的結(jié)合及病毒在神經(jīng)系統(tǒng)中的分布，不但與病毒的毒力、致命性相關(guān)，而且是病毒的主要保護性抗原，能刺激機體產(chǎn)生中和抗體，抵抗病毒的感染。

聯(lián)合應(yīng)用抗狂犬病毒免疫球蛋白和狂犬病疫苗是狂犬病三級暴露預(yù)防的主要措施。

目前臨床使用的抗狂犬病毒免疫球蛋白，主要來自狂犬病疫苗免疫人或馬的抗狂犬病毒血清，抗體的產(chǎn)量受到限制且存在一定的安全隱患?；蚬こ炭贵w技術(shù)的完善與發(fā)展，為制備具備高親和力的治療性人源抗體提供新途徑。人源抗體由于具有較低的免疫原性和較好的組織穿透性，使其能夠更好地應(yīng)用于疾病的臨床治療。

這篇研究發(fā)表在最新一期《中國藥理學(xué)報》，由南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所朱進研究員、南京醫(yī)科大學(xué)管曉虹教授、馮振卿教授、研究生李琛及其研究小組完成，為國家“863”資助項目。

本研究是人源抗狂犬病毒治療性中和抗體研究中的一部分，研究小組從人源免疫型抗狂犬病毒抗體庫中篩選出的一株針對狂犬病毒糖蛋白的單鏈抗體，克隆出可變區(qū)基因，運用重疊延伸拼接的方法，分別制備Fd及L鏈，再進一步拼接成Fab基因，構(gòu)建Fab表達載體，從而實現(xiàn)Fab的可溶性表達。

研究通過間接ELISA與競爭ELISA、免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析及熒光抗體病毒中和實驗（FAVN）分析抗體的免疫學(xué)特性。建立狂犬病昆明種鼠（KM鼠）模型，在個體水平比較分析Fab抗體、疫苗和人免疫球蛋白等對小鼠暴露后的預(yù)防和保護作用。

課題小組論為：體外研究及小鼠狂犬病毒暴露后預(yù)防研究證實，抗體聯(lián)合疫苗能夠有效阻止狂犬病毒的感染，對狂犬病毒暴露后的小鼠具有預(yù)防保護作用，按照WH0推薦的“雞尾酒”療法，這株抗體在狂犬病的預(yù)治中具有潛在的應(yīng)用前景。