白細胞介素-20在類風濕關節(jié)炎患者血清中的表達及影響因素探討

鄭遜

類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種常見的以關節(jié)炎癥和滑膜細胞增殖為特征的全身性自身免疫性疾病，臨床上以多關節(jié)損傷為主要表現(xiàn)，具有較高致殘性。本病至今發(fā)病機制尚未被闡明，眾多資料表明該病與免疫系統(tǒng)調節(jié)功能紊亂有關，多種細胞因子的參與是引起RA發(fā)生的重要因素。而且近年研究證實一些炎性細胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-a)、白細胞介素-1(IL-1)、IL-18、IL-6 等在 RA 滑膜病變中起核心作用。本研究旨在探討IL-20在RA患者血清中的表達水平，并分析其影響因素。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2009年1月至2010年1月在我科就診的55例 RA患者，年齡35～72歲，平均(51.37±12.32)歲。其中女42例，年齡36～71歲，平均(54.47±11.26)歲;男13例，年齡35～72歲，平均(48.62±13.28)歲。所有患者均符合美國風濕病學會1987年修訂的類風濕關節(jié)炎診斷標準，均未經(jīng)正規(guī)治療，采血前無近期服用糖皮質激素及其他免疫抑制劑治療史，且未合并感染、腫瘤及其他結締組織疾病。同時選取29例正常人群作為對照組，排除高血壓、糖尿病等疾病，年齡33～70歲，平均(50.56±12.08)歲。其中女20例，年齡33～68歲，平均(49.32±13.16)歲，男9例，年齡36～70歲，平均(51.57±12.17)歲。經(jīng)檢測，兩組在性別、年齡上相近，差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 主要試劑 人IL-20定量EIA試劑盒，試劑由上海森雄科技實業(yè)有限公司提供。

1.3 實驗方法 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

1.3.1 標本采集 留取兩組血清，3000r/min離心10 min，取上清，置于-20℃保存?zhèn)錂z，同批檢測。洗滌液用重蒸水1∶20稀釋。使用前配制底物工作液，將鄰苯二胺片放入底物稀釋液中溶解，每片加液5 ml。標準品液配制則為使用前每管中加入蒸餾水200 μl溶解后即可。

1.3.2 試驗流程 建立標準曲線，加樣，反應板置于37℃水浴120 min，洗板。加入第一抗體工作液，溫育，再洗板。加酶標抗體工作液，再次洗板，加入底物工作液100 μL，置37℃暗處反應5～10 min。加入終止液混勻，在492 nm處測吸光值。

1.3.3 觀察指標 患者在采集血清標本同時檢測類風濕因子(RF)、C反應蛋白(CRP)、紅細胞沉降率(ESR)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料應用χ2檢驗，組間比較用方差分析，以P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 組間血清IL-20濃度比較 類風濕關節(jié)炎患者血清中IL-20水平為(31.74±30.86)×10-3g/L，對照組血清中IL-20水平為(14.67±7.15)×10-3g/L。RA患者血清中IL-20水平顯著高于對照組(P＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 類風濕關節(jié)炎患者IL-20與RF、CRP、ESR相關性分析

將L-20濃度與RF、CRP、ESR進行秩相關檢驗，結果提示RA患者的IL-20血清濃度與 RF、CRP、ESR無相關性。見表1。

表1 IL-20與RF、CRP、ESR相關性分析

3 討論

類風濕關節(jié)炎是免疫介導的炎癥性疾病，發(fā)病率為0.3% ～4%，平均為1%。主要臨床表現(xiàn)為對稱性、進行性及侵蝕性的關節(jié)炎癥，主要病理表現(xiàn)是滑膜細胞增生，多種炎性細胞浸潤，血管翳形成，繼而侵犯關節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成軟骨、骨和關節(jié)囊損壞，如不能早期發(fā)現(xiàn)并及時治療，最終將導致關節(jié)強直、畸形和功能喪失。至今RA病因及發(fā)病機制不清，一般認為與遺傳、環(huán)境等因素有關。在其致病過程中，伴隨多種免疫活性細胞的活化及細胞因子、炎癥介質的共同參與。細胞因子是RA損傷的重要介質，貫穿于RA發(fā)展的始終，與其發(fā)病機制改變、治療及預后有著密切的關系。

IL-20是近年來發(fā)現(xiàn)的IL-10相關細胞因子家族的新成員，主要由活化的單核細胞產(chǎn)生，與IL-10有28%的同源性，與其他IL-10家族成員如IL-19、IL-22、IL-24在氨基酸序列上具有一定的同源性，但生物學功能卻不盡相同。研究發(fā)現(xiàn)：①IL-20可以促進TNF-α、單核細胞趨化蛋白(MCP)等致炎因子的分泌和表達。②促進角質細胞的增生和分化。

Hsu等研究了16例RA患者、32例骨關節(jié)炎患者及8例痛風患者，發(fā)現(xiàn)RA患者關節(jié)液中IL-20水平明顯高于骨關節(jié)炎和痛風的患者，但3組病例IL-20血清水平并無差異;同時證實RA患者關節(jié)滑膜中有IL-20R表達，其滑膜成纖維細胞(RASFs)表達 IL-20受體復合物，IL-20能激活 RASFs的ERK-1/2(細胞外信號調節(jié)激酶)［1］。本試驗結果表明：RA患者血清中IL-20水平顯著高于對照組，但與其RF、CRP、ESR無相關性。對比上一研究中對照為骨關節(jié)炎和痛風的結果有所不同。上一研究IL-20血清水平組間差異統(tǒng)計學意義不顯著，可能與病例數(shù)相對少有關，也有可能骨關節(jié)炎和痛風IL-20水平比正常人高，而與類風濕關節(jié)炎無差異，在這方面尚需進一步研究證實。本研究提示IL-20可能與RA相關，但尚無證據(jù)說明其與RA的活動性及關節(jié)破壞程度相關。RA血清IL-20水平較正常對照高可能的原因有［2］：①IL-20作為RA發(fā)病的始動因素之一，與滑膜等組織的IL-20R結合，促進TNF-α等炎癥介質產(chǎn)生，參與RA發(fā)病。②RA患者與炎癥正相關的基因處于上調水平，外周血中的單核細胞等分泌IL-20增多。③RA滑膜等局部組織分泌IL-20增加，致關節(jié)液及血清中水平升高。④RA患者炎癥介質增多，細胞因子網(wǎng)絡失衡，刺激IL-20產(chǎn)生增加。以上可能均有待進一步研究。

雖然類風濕關節(jié)炎存在一些IL的升高或下降，但不能簡單地認為降低的IL即具保護作用，升高的IL則具致病作用。多種細胞因子間的相互作用可能更為重要。目前有關類風濕關節(jié)炎與IL-20的研究與其他IL相比相對較少，但是從IL-20生物學功能以及類風濕關節(jié)炎發(fā)病特點上都提示二者存在緊密聯(lián)系。雖然目前研究結果尚不能直接證實是何種聯(lián)系以及相關性，但進一步的研究與試驗仍在繼續(xù)，希望能從更深入角度探討二者關系，加深對類風濕關節(jié)炎病因及發(fā)病機制的認識，為類風濕關節(jié)炎的臨床診治提供新的思路。

［1］Hsu Y H，LI H H，HSIEH M Y，et al.Function of Interleukin-20 as a proinflammatory molecule in rheumatoid and experimental arthritis.Arthritis Rheum，2006，54(9)：2722-2733.

［2］蒲曉英，楊南萍，李敏.類風濕關節(jié)炎患者血清白介素-20水平及影響因素研究.華西醫(yī)學，2009，24(8)：2054-2056.