毛木耳菌絲體營(yíng)養(yǎng)優(yōu)勢(shì)菌株的篩選研究*

趙 爽， 布 達(dá)， 劉 宇， 許 峰， 耿小麗， 王守現(xiàn)， 孟莉莉

（1.北京農(nóng)林科學(xué)院植保環(huán)保研究所，北京 100097；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南 鄭州 450002）

毛木耳Auricularia polytricha(Mont.)Sacc.，隸屬于擔(dān)子菌門、層菌綱、木耳目、木耳科、木耳屬，自然情況下主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)。毛木耳的生命力強(qiáng)，適應(yīng)性廣，栽培方法簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)量高，所以是一個(gè)世界性的重要栽培品種，主要栽培地區(qū)涉及到我國(guó)南方和東南亞一些國(guó)家[1]。

毛木耳是一種藥食同源的食用菌，作為食品其脆而有韌性，口感好，別有風(fēng)味，是深受消費(fèi)者歡迎的一種食用菌食品。每100克干品含粗蛋白質(zhì)7 g～9.1 g、粗脂肪0.6 g～1.2 g、 碳水化合物 64.6 g～69.2 g、 粗纖維 9.7 g～14.3 g、灰分 2.1 g～4.2 g， 熱量 1230.10 kJ～1334.70 kJ。 還含胡蘿卜素 0.01 mg、 硫胺素 0.09 mg～0.36 mg、 抗壞血酸 7.04 mg～8.35 mg 以及尼克酸 1.7 mg～4.0 mg[2]。毛木耳中富含 Zn、Fe、 Ca、 Mg、 Cu、 Mn、 K、 Na等人體需要的微量元素[3]。

中醫(yī)認(rèn)為，毛木耳具有滋陰強(qiáng)陽(yáng)、清肺益氣、補(bǔ)血活血、止血止痛的功效，是一種具有保健功能的食品[4]。從藥用價(jià)值上分析，毛木耳的腺苷成分，具有抑制二磷酸腺苷（ADP）誘導(dǎo)血小板聚集的作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生具有保護(hù)作用，毛木耳的粗多糖也能夠誘導(dǎo)血小板的聚集，并且具有明顯的量效關(guān)系[5]。其中，蛋白質(zhì)和多糖是毛木耳發(fā)揮功效的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，本研究以這兩個(gè)指標(biāo)為基礎(chǔ)對(duì)保藏的不同品種的毛木耳進(jìn)行測(cè)定，以篩選出利用價(jià)值高的毛木耳品種。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株

供試的毛木耳菌株為本實(shí)驗(yàn)室多年保藏菌株，分別為毛木耳雜交6號(hào)、毛木耳雜交34號(hào)、毛木耳白背120、毛木耳特大、毛木耳西南召、毛木耳紫木耳、毛木耳781、毛木耳福建農(nóng)和毛木耳豐收一號(hào)。

1.1.2 培養(yǎng)基

綜合PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂粉20 g（北京夢(mèng)怡美公司）、KH2PO43 g、VB110 mg（湖北華中藥業(yè)）、蛋白胨5 g（北京奧博星公司，總氮＞9%、氨基氮＞3%）、MgSO41.5 g，蒸餾水1000 mL；綜合 PDA液體培養(yǎng)基為上述培養(yǎng)基不添加瓊脂粉，其它試劑均為分析純，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。

1.1.3 試劑

BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)于北京博邁德科技公司，苯酚、濃硫酸、NaCl和乙醇均為分析純，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

生物安全柜MSC 1.2，美國(guó)Thermo公司；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀VERSA max，美國(guó)Molecular Devices公司；精密天平AR2140，美國(guó)奧豪斯公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE－52AA，上海振捷公司；恒溫培養(yǎng)搖床HZQ－F160，江蘇太倉(cāng)公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化及培養(yǎng)

將毛木耳斜面菌株接種到綜合PDA平板上進(jìn)行活化，25℃恒溫培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿平板后將其接種到液體培養(yǎng)基中，25℃、160 r·min－1搖瓶培養(yǎng)7 d后，再轉(zhuǎn)接1次液體搖瓶培養(yǎng)7 d后收集菌絲體，存于－20℃冰箱內(nèi)待用。

1.2.2 菌絲體蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：利用標(biāo)準(zhǔn)樣品小牛血清蛋白（BSA）配置成不同濃度的蛋白溶液，采用BCA蛋白定量試劑盒制作標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]。

根據(jù)趙爽等改良的方法，用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定9個(gè)品種菌絲體中蛋白質(zhì)的含量[6]。

1.2.3 菌絲體水溶性多糖含量的測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：將葡萄糖 105℃烘干至恒重，配置成不同濃度溶液，采用苯酚－硫酸法制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線[6，7]。

同樣根據(jù)改良后的多糖測(cè)定法，采用苯酚－硫酸法測(cè)定9個(gè)毛木耳品種中水溶性多糖的含量。

2 結(jié)果與討論

通過BCA和苯酚－硫酸法制作出蛋白質(zhì)和葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]，根據(jù)分光光度法測(cè)定出樣品的吸光度值回歸到線性方程中，可計(jì)算出9個(gè)品種菌絲體的蛋白質(zhì)和水溶性多糖的含量，具體測(cè)定結(jié)果見表1和表2。

通過分析比較發(fā)現(xiàn)，毛木耳福建農(nóng)、毛木耳特大木耳品種和毛木耳紫木耳菌絲體中蛋白質(zhì)含量相對(duì)較高，分別占菌絲體鮮重的8.99%、7.759%和7.528%，是蛋白質(zhì)含量篩選中的優(yōu)勢(shì)菌株；在水溶性多糖含量比較中發(fā)現(xiàn)，毛木耳紫木耳、毛木耳特大木耳和毛木耳豐收一號(hào)3個(gè)品種的水溶性多糖含量較高，分別占菌絲體干重的2.625%、1.55%和1.525%，與其它品種比較均達(dá)到了顯著性差異的程度，為水溶性多糖篩選中的優(yōu)勢(shì)菌株。

為建立種質(zhì)資源信息平臺(tái)，本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定了不同品種菌絲體的蛋白質(zhì)和多糖含量，比較發(fā)現(xiàn)，毛木耳福建農(nóng)菌絲體中蛋白含量明顯高于姬松茸的優(yōu)勢(shì)菌株姬松茸11號(hào)，是其的1.64倍，毛木耳紫木耳菌絲體中多糖含量明顯高于姬松茸中優(yōu)勢(shì)菌株姬松茸7號(hào)，是其含量的1.75倍[6]。這種差異可能是來自于種間的差異，也與不同菌種的生長(zhǎng)周期和生長(zhǎng)史有關(guān)系，同時(shí)發(fā)酵條件也是導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)物含量變化的一個(gè)至關(guān)重要的因素。

表1 9個(gè)毛木耳品種菌絲體蛋白含量測(cè)定結(jié)果

表2 9個(gè)毛木耳品種菌絲體多糖含量測(cè)定結(jié)果

由于蛋白質(zhì)和多糖含量在同一物種不同品種間存在一定的差異，所以在毛木耳功能產(chǎn)物加工中，可以根據(jù)需求選定毛木耳品種，通過改良發(fā)酵工藝使目標(biāo)產(chǎn)物最大化生產(chǎn)，為深加工產(chǎn)品的開發(fā)提供穩(wěn)定的材料來源，也為擴(kuò)大栽培提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)本研究數(shù)據(jù)可以為毛木耳種質(zhì)資源庫(kù)提供有力的營(yíng)養(yǎng)學(xué)數(shù)據(jù)。

3 結(jié)論

經(jīng)過本實(shí)驗(yàn)研究，毛木耳福建農(nóng)是9個(gè)品種中蛋白質(zhì)含量最高的菌株，毛木耳紫木耳是所有檢測(cè)品種中水溶性多糖含量最高的菌株，從營(yíng)養(yǎng)、功能性角度分析它們都屬于優(yōu)勢(shì)菌株，可以作為擴(kuò)大栽培或深加工的優(yōu)勢(shì)材料，用以進(jìn)一步挖掘毛木耳的可利用資源。

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