亞急性酒精中毒大鼠的學(xué)習(xí)記憶與海馬p-CREB表達(dá)的相關(guān)性研究

李興偉，吳鑒明

(皖南醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)三系，安徽 蕪湖 241002)

酒精中毒是一種遍及全球的公共衛(wèi)生問題。酒精中毒可以因酒精毒性作用、代謝異常等因素而導(dǎo)致多系統(tǒng)的急、慢性病變。酒精中毒能夠?qū)е聶C(jī)體發(fā)生多種病理性改變，其中以腦損害最為突出，導(dǎo)致認(rèn)知功能的異常。已知環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element binding protein，CREB)通過CREB 133位磷酸化(p-CREB)，通過對(duì)各種神經(jīng)活性蛋白的翻譯，最終影響學(xué)習(xí)記憶功能［1］。目前關(guān)于p-CREB與酒精染毒對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能損傷的研究少見報(bào)道［2］。本研究通過測(cè)定不同濃度酒精對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，以期闡明酒精攝入時(shí)間、劑量與神經(jīng)行為改變之間的關(guān)系以及行為學(xué)與病理變化的關(guān)系，探討亞急性酒精染毒大鼠的學(xué)習(xí)記憶與p-CREB表達(dá)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 雄性SD清潔型大鼠(購于南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)，合格證號(hào):2015668)60只，約7周齡，體重180～220 g。隨機(jī)平均分為4組:對(duì)照組(control group，C組)，低濃度染毒組(low alcohol administration group，L 組)，中濃度染毒組(moderate alcohol administration group，M 組)，高濃度染毒組(high alcohol administration group，H組)。

1.2 方法 大鼠正常喂養(yǎng)1周后開始染毒。無水乙醇分別配制成酒精含量為0.16 g/ml(低濃度組)、0.32 g/ml(中濃度組)、0.48 g/ml(高濃度組)的溶液，按15 ml/kg體重進(jìn)行灌胃，對(duì)照組用15 ml/kg體重蒸餾水灌胃。第1周每天分兩次灌胃，每兩天間隔1 d，第2周改為每天灌胃1次，每3天間隔1 d。各組分別在灌胃14 d、21 d和28 d后行以下實(shí)驗(yàn)。

1.2.1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

1.2.1.1 一般觀察 每周觀察記錄大鼠飲食、體重、睡眠和活動(dòng)等。

1.2.1.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前訓(xùn)練:酒精溶液灌胃前，在水迷宮中大鼠游泳訓(xùn)練，隨機(jī)選擇一個(gè)入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水中，3次分別從3個(gè)象限(目標(biāo)象限除外)的入水點(diǎn)入水，直至大鼠入水后能夠找到平臺(tái)。歷時(shí)3 d，第1天讓大鼠自由游泳2 min。從第2天起，每天訓(xùn)練3次，每次間隔1 h。

潛伏期(定位航行實(shí)驗(yàn)，反映空間記憶的獲得和參照物記憶能力):即大鼠由入水到爬上隱匿平臺(tái)的時(shí)間(s)。如果大鼠在120 s內(nèi)未找到平臺(tái)，將其引至平臺(tái)上放置20s，這時(shí)潛伏期記為120 s。

尋求正確次數(shù)(空間搜索實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)空間記憶的保持和工作記憶能力):撤去平臺(tái)，即大鼠2 min內(nèi)經(jīng)過原平臺(tái)位置上方水域(探索策略)的次數(shù)，得出目標(biāo)象限時(shí)間/總時(shí)間。

1.2.2 血液酒精濃度檢測(cè) 不同天數(shù)的染毒大鼠，水迷宮試驗(yàn)結(jié)束后戊巴比妥腹腔麻醉，心腔取血，用氣相色譜儀(HP6890)檢測(cè)大鼠血液酒精濃度。

1.2.3 海馬組織的病理學(xué)觀察 取血后的大鼠經(jīng)心臟快速灌注沖洗生理鹽水約250 ml，再用4%多聚甲醛(PBS配制，pH 7.4)約500 ml灌注沖洗固定，取全腦，在4%多聚甲醛中固定20 h，脫水、包埋、切片，HE染色，光鏡觀察組織細(xì)胞形態(tài)。

1.2.4 p-CREB蛋白免疫組化染色 同以上(1.2.3)方法制作的切片，按照p-CREB蛋白免疫組織化學(xué)染色試劑盒說明，進(jìn)行免疫組化染色操作(SABC法)。

1.2.5 圖像分析 用Olympus顯微鏡和計(jì)算機(jī)影像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析。高倍(×400)視野下，利用0.2網(wǎng)形目鏡尺分別對(duì)大鼠海馬CA3區(qū)隨機(jī)選取5個(gè)視野，依次計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)，以其平均值作為該切片層面的陽性細(xì)胞數(shù)，以同一個(gè)動(dòng)物4個(gè)切片層面的平均陽性細(xì)胞數(shù)作為該動(dòng)物的陽性細(xì)胞數(shù)，各組動(dòng)物再分別計(jì)算其組內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)利用方差分析，組間兩兩比較用SNK檢驗(yàn)，對(duì)樣本的血液酒精濃度、海馬p-CREB陽性細(xì)胞數(shù)、行為學(xué)反應(yīng)三項(xiàng)結(jié)果，進(jìn)行相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn):α =0.05，P ＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 一般觀察 染毒1周后，對(duì)照組及低濃度組大鼠灌胃操作順利，中濃度組和高濃度組灌胃有抗拒。對(duì)照組大鼠體重正常增長;低濃度多數(shù)大鼠出現(xiàn)體重過度增長;中、高濃度組多數(shù)大鼠出現(xiàn)精神萎靡，覓食及活動(dòng)減少，營養(yǎng)不良，毛發(fā)無光澤，體重增長緩慢或下降。

2.2 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果 見表1～4。

表1 酒精染毒前大鼠的學(xué)習(xí)記憶情況(±s，n=15)Tab 1 The conditions of learning and memory in rats before alcohol exposure(±s，n=15)

表1 酒精染毒前大鼠的學(xué)習(xí)記憶情況(±s，n=15)Tab 1 The conditions of learning and memory in rats before alcohol exposure(±s，n=15)

C、L、M、H分別代表對(duì)照組、低濃度組、中濃度組、高濃度組。右上角字母相同者表示SNK法比較P＞0.05，字母不同者表示P＜0.05，下同

項(xiàng)目 C L M H F值 P值潛伏期(s) 34.3 ±12.7a 42.6 ±18.5a 39.8 ±10.4a 36.4 ±14.2a 0.906 0.447 1.626 0.198尋求正確次數(shù) 5.13 ±1.96a 5.08 ±1.68a 5.58 ±1.62a 5.08 ±2.35a 0.190 0.903目標(biāo)象限時(shí)間/總時(shí)間 0.34 ±0.09a 0.35 ±0.11a 0.30 ±0.06a 0.31 ±0.09a

表2 酒精染毒14 d對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(±s，n=15)Tab 2 Alcohol exposure for 14 days on learning and memory in rats(±s，n=15)

表2 酒精染毒14 d對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(±s，n=15)Tab 2 Alcohol exposure for 14 days on learning and memory in rats(±s，n=15)

項(xiàng)目 C L M H F值 P值潛伏期(s) 28.0 ±11.1a 33.0 ±15.5a 45.3 ±19.3a 52.6 ±25.3b 3.597 0.022尋求正確次數(shù) 4.75 ±1.67a 3.67 ±1.61a 3.92 ±1.93a 4.08 ±1.51a 0.691 0.563目標(biāo)象限時(shí)間/總時(shí)間 0.40 ±0.07a 0.40 ±0.08a 0.44 ±0.18a 0.44 ±0.18a 0.266 0.850

表3 酒精染毒21 d對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(±s，n=10)Tab 3 Alcohol exposure for 21 days on learning and memory in rats(±s，n=10)

表3 酒精染毒21 d對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(±s，n=10)Tab 3 Alcohol exposure for 21 days on learning and memory in rats(±s，n=10)

項(xiàng)目 C L M H F值 P值潛伏期(s) 26.8 ±11.1a 41.4 ±18.7a 54.3 ±21.4b 60.1 ±28.4b 4.043 0.017尋求正確次數(shù) 5.75 ±1.76a 3.50 ±1.51b 3.13 ±0.99b 2.63 ±1.06b 3.856 0.020目標(biāo)象限時(shí)間/總時(shí)間 0.33 ±0.14a 0.18 ±0.08b 0.20 ±0.07b 0.25 ±0.09b 8.172 0.000

表4 酒精染毒28 d對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(±s，n=5)Tab 4 Alcohol exposure for 28 days on learning and memory in rats(±s，n=5)

表4 酒精染毒28 d對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(±s，n=5)Tab 4 Alcohol exposure for 28 days on learning and memory in rats(±s，n=5)

項(xiàng)目 C L M H F值 P值潛伏期(s) 13.3 ±4.03a 50.0 ±10.4b 72.5 ±32.0b 79.0 ±28.0b 7.303 0.005尋求正確次數(shù) 6.25 ±1.26a 2.00 ±0.82b 1.50 ±0.58b 1.25 ±0.96b 25.333 0.000目標(biāo)象限時(shí)間/總時(shí)間 0.38 ±0.03a 0.25 ±0.07b 0.23 ±0.01b 0.18 ±0.07b 11.071 0.001

表1表明，大鼠染毒前學(xué)習(xí)記憶差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。由表2～4可見，酒精染毒14 d，高濃度組大鼠潛伏期增加，與對(duì)照組相比差異顯著(P ＜0.05);酒精染毒21 d、28 d 時(shí)，低、中、高濃度3組大鼠潛伏期增加，中、高濃度組2 min內(nèi)尋求正確次數(shù)減少、目標(biāo)時(shí)間/總時(shí)間下降低，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。

2.3 血液酒精濃度檢測(cè)結(jié)果 各組大鼠不同染毒天數(shù)的血液酒精濃度見表5。

表5 4組大鼠不同染毒天數(shù)的血液酒精濃度＊＊(mg/100 ml，±s，n=5*)Tab 5 Blood alcohol concentration in rats of the 4 groups at diverse days of exposure to alcohol(mg/100 ml，±s，n=5*)

表5 4組大鼠不同染毒天數(shù)的血液酒精濃度＊＊(mg/100 ml，±s，n=5*)Tab 5 Blood alcohol concentration in rats of the 4 groups at diverse days of exposure to alcohol(mg/100 ml，±s，n=5*)

* 每次按照序號(hào)取5只大鼠(n=5)采血，余下進(jìn)入下階段實(shí)驗(yàn);＊＊最后一次灌胃1 h后取血，然后取腦檢測(cè)其他指標(biāo)

天數(shù) C L M H F值 P值14 d 0.00a 37.05 ±4.72b 66.95 ±15.88c 125.89 ±18.70d 292.358 0.000 90.714 0.000 21 d 0.00a 22.74 ±8.12b 35.37 ±4.56c 48.50 ±4.90d 76.878 0.000 28 d 0.00a 59.03 ±4.16b 104.17 ±9.82c 173.56 ±15.92d

2.4 病理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.1 HE染色 高濃度14 d組及低、中、高濃度21 d、28 d組大鼠海馬CA1、CA3區(qū)及齒狀回神經(jīng)細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的排列不規(guī)則，層數(shù)減少，部分細(xì)胞體積增大，海馬細(xì)胞變性，數(shù)目減少，排列紊亂，尤其以高濃度28 d組較為明顯(圖1～4)。

2.4.2 海馬 p-CREB免疫陽性細(xì)胞的表達(dá) p-CREB免疫陽性細(xì)胞核呈圓形和橢圓形，大小不均，大多數(shù)顯色較深，光鏡下呈均質(zhì)狀，邊界清晰。對(duì)照組齒狀回顆粒層p-CREB免疫陽性細(xì)胞的體積小且密集，成典型的帶狀分布，CA3區(qū)的錐體細(xì)胞層的陽性細(xì)胞較顆粒層明顯減少且體積較大。酒精染毒14 d時(shí)，對(duì)照組和低濃度組p-CREB表達(dá)明顯，海馬錐體細(xì)胞著色較深，中、高濃度組大鼠海馬p-CREB表達(dá)較對(duì)照組明顯下降(P＜0.05);酒精染毒21、28 d時(shí)，低、中、高濃度組大鼠海馬p-CREB表達(dá)較對(duì)照組明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，圖5～8)。

表6 大鼠海馬組織CA3區(qū)p-CREB陽性細(xì)胞數(shù)比較(±s，n=5*)Tab 6 Comparison of p-CREB positive cell number in CA3 zone of hippocampus(±s，n=5*)

表6 大鼠海馬組織CA3區(qū)p-CREB陽性細(xì)胞數(shù)比較(±s，n=5*)Tab 6 Comparison of p-CREB positive cell number in CA3 zone of hippocampus(±s，n=5*)

* 每次按照序號(hào)取5只大鼠(n=5)采血后解剖取腦組織，余下進(jìn)入下階段實(shí)驗(yàn)

14 d 21 d 28 d C 125.20 ±19.98a 125.20 ±19.98a 125.20 ±19.98a 0.006 0.000 0.000 L 109.00 ±8.66a 101.20 ±9.36b 85.80 ±5.63b M 104.20 ±10.89b 92.60 ±11.72b 72.00 ±11.68b H 90.00 ±9.67b 78.00 ±9.67b 54.00 ±8.28c F 值 6.139 10.896 28.787 P值

2.5 血液酒精濃度與p-CREB及行為學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性 見表7、8。

表7 血液酒精濃度的p-CREB及行為學(xué)反應(yīng)相關(guān)性分析Tab 7 Pearson correlation analysis of blood alcohol concentration and p-CREB and behavioral responses

表7表明:除酒精染毒14 d大鼠血液酒精濃度與尋求正確次數(shù)相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各組指標(biāo)與血液酒精濃度有相關(guān)性:隨著酒精濃度的增加，潛伏期延長，尋求正確次數(shù)減少、陽性細(xì)胞數(shù)下降，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表8表明:酒精染毒14 d和28 d，大鼠血液酒精濃度與尋求正確次數(shù)的線性回歸關(guān)系無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而與潛伏期、陽性細(xì)胞數(shù)線性回歸關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);酒精染毒21 d大鼠血液酒精濃度與潛伏期及尋求正確次數(shù)的線性回歸關(guān)系無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而與陽性細(xì)胞數(shù)的線性回歸關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表8 血液酒精濃度與p-CREB及行為學(xué)反應(yīng)的多因素線性回歸分析Tab 8 Multiple linear regression analysis of blood alcohol concentration and p-CREB and behavioral responses

3 討論

3.1 亞急性酒精中毒動(dòng)物模型 已有研究者用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇溶液按10 ml/kg劑量給實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃，發(fā)現(xiàn)亞急性酒精中毒致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙及海馬突觸界面結(jié)構(gòu)可塑性退變［3］。本實(shí)驗(yàn)以 0.16 g/ml、0.32 g/ml、0.48 g/ml三種濃度酒精溶液，按15 ml/kg體重(生理鹽水作為對(duì)照)，分別灌胃14 d、21 d、28 d后，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠的學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)反應(yīng)、p-CREB表達(dá)水平變化及海馬CA1、CA3區(qū)及齒狀回神經(jīng)細(xì)胞的病理形態(tài)學(xué)改變。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，上述三者與血液酒精濃度之間存在劑量-反應(yīng)的相關(guān)性。故認(rèn)為初步建立了亞急性酒精中毒的動(dòng)物模型。

3.2 酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行為學(xué)影響 Morris水迷宮(Morris water maze，MWM)是用于研究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的裝置，在研究動(dòng)物的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用［4，5］。乙醇為低分子脂溶性物質(zhì)，攝入乙醇1 h內(nèi)血液中乙醇含量達(dá)到最高，之后呈直線趨勢(shì)下降［6］，故在酒精溶液灌胃后1 h之內(nèi)取血為宜。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各染毒組酒精灌胃不同天數(shù)后，隨著酒精劑量、時(shí)間的增加，大鼠記憶能力受到抑制，潛伏期延長，錯(cuò)誤次數(shù)增加，該抑制作用增強(qiáng)。酒精染毒14 d，高濃度組大鼠潛伏期增加，與對(duì)照組相比差異顯著(P ＜0.05);酒精染毒 21 d、28 d 時(shí)，低、中、高濃度3組大鼠潛伏期增加，中、高濃度組2 min內(nèi)尋求正確次數(shù)減少、目標(biāo)象限時(shí)間/總時(shí)間下降低，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。表明高濃度組的血液酒精濃度(125.89 mg/100 ml)在14 d內(nèi)即已經(jīng)造成大鼠記憶再現(xiàn)障礙，低濃度組(39.61 mg/100 ml)、中濃度組(68.83 mg/100 ml)、高濃度組(115.98 mg/100 ml)在21 d內(nèi)可造成大鼠記憶再現(xiàn)障礙。文獻(xiàn)報(bào)道乙醇對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能有明顯的抑制作用［7，8］，本實(shí)驗(yàn)印證，這種抑制作用與染毒時(shí)間和血液酒精濃度存在相關(guān)性，即潛伏期和血液酒精濃度呈正相關(guān) (P＜0.05);尋求正確次數(shù)和血液酒精濃度呈負(fù)相關(guān) (P＜0.05)。

3.3 亞急性酒精中毒與p-CREB表達(dá) 在大腦細(xì)胞中表達(dá)的環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)，是一種具有轉(zhuǎn)錄因子功能的蛋白，參與長期記憶的形成和短期記憶向長期記憶轉(zhuǎn)化［1］，CREB 133位磷酸化(p-CREB)，可以啟動(dòng)下游基因轉(zhuǎn)錄，通過各種神經(jīng)活性蛋白的翻譯，最終影響單個(gè)神經(jīng)元和整個(gè)神經(jīng)元回路的功能，與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)。Asher等在分子水平研究發(fā)現(xiàn)，酒精導(dǎo)致CREB磷酸化水平升高［9］;趙燕等研究急性酒精攝入海馬內(nèi) CREB磷酸化水平升高［2］;又有研究［10，11］表明，慢性酒精暴露致鼠腦內(nèi) CREB 磷酸化水平降低，結(jié)果不完全一致。本實(shí)驗(yàn)觀察到，酒精染毒14 d時(shí)，中、高濃度組大鼠海馬p-CREB表達(dá)較對(duì)照組明顯下降(P＜0.05);酒精染毒21、28 d時(shí)，低、中、高濃度組大鼠海馬p-CREB表達(dá)較對(duì)照組明顯下降(P＜0.05)。顯示亞急性酒精染毒大鼠海馬內(nèi)CREB磷酸化水平下降，且海馬 CA3區(qū)p-CREB陽性細(xì)胞數(shù)和血液酒精濃度呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。因此認(rèn)為，大鼠海馬內(nèi)CREB表達(dá)，可以作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物亞急性酒精中毒的一項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)。

3.4 亞急性酒精中毒的神經(jīng)病理改變 本實(shí)驗(yàn)觀察到高濃度染毒14 d及低、中、高濃度染毒21 d、28 d，大鼠海馬CA1、CA3區(qū)椎體細(xì)胞及齒狀回顆粒細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的排列不規(guī)則，層數(shù)減少;部分細(xì)胞體積增大，海馬細(xì)胞變性，數(shù)目減少，排列紊亂，以高濃度28 d組為明顯(圖3)。上述結(jié)果，與文獻(xiàn)報(bào)道［12］相吻合?？梢哉J(rèn)為，大鼠海馬 CA1、CA3區(qū)椎體細(xì)胞及齒狀回顆粒細(xì)胞的變化，是亞急性酒精中毒的病理形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。

綜上所述，本研究通過酒精灌胃方式給大鼠染毒，運(yùn)用Morris水迷宮檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷情況，建立了亞急性酒精中毒致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型。發(fā)現(xiàn)亞急性酒精中毒對(duì)學(xué)習(xí)記憶損傷與染毒時(shí)間、濃度呈直線正相關(guān)，可能通過調(diào)節(jié)海馬內(nèi)p-CREB蛋白表達(dá)來影響大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。但海馬內(nèi)p-CREB如何調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)記憶過程尚不清楚，有待今后進(jìn)一步研究和探討。

(致謝:1、本實(shí)驗(yàn)中水迷宮部分在皖南醫(yī)學(xué)院細(xì)胞電生理研究室完成，由衷感謝導(dǎo)師汪萌芽教授的指導(dǎo)和秦雯同學(xué)的幫助;2、由衷感謝皖南醫(yī)學(xué)院法醫(yī)毒理教研室張武老師在酒精氣象色譜檢測(cè)中的指導(dǎo)。)

［1］WILLIAM A.CARLEZON JR，RONALD S.Duman，Eric J.Nestler.The many faces of CREB［J］.Trends in Neurosciences，2005，28(8):436 －445.

［2］趙燕，祁妍敏，周毓瑾，等.急性酒精攝入對(duì)大鼠記憶功能的影響及海馬內(nèi)p-CREB的變化［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，36(3):538 －540，545.

［3］徐曉虹，徐曉燕.亞急性乙醇中毒致小鼠記憶障礙的腦內(nèi)突觸機(jī)制［J］.衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，2002，16(4):203 －205.

［4］WU QY，LI J，F(xiàn)ENG ZT，et al.Bone marrow stromal cells of transgenic mice can improve the cognitive ability of an Alzheimer's disease ratmodel［J］.Neurosci Lett，2007，417:281 －285.

［5］NISHIDA Y，YOKOTA T，TAKAHASHI T，et al.Deletion of vitamin E enhances phenotype ofAlzheimer diseasemodelmouse［J］.Biochem Biophs Res Commun，2006，350:530 － 536.

［6］賴江華，胡炳蔚.乙醇在人體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)研究［J］.中國法醫(yī)學(xué)雜志，1996，11(1):125.

［7］胡浩，杜克莘，王興會(huì)，等.不同濃度乙醇對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2009，7(3):316－317.

［8］姚文鳴，吳鑒明.急性酒精染毒小鼠的學(xué)習(xí)記憶與海馬CaMKⅡ的表達(dá)［J］.皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，29(4):308－311.

［9］ORNA ASHER，THOMAS D.CUNNINGHAM，LINA YAO，et al.Ethanol stimulates cAMP-responsive element(CRE)-mediated transcriptionvia CRE-binding protein and cAMP-dependent protein kinase［J］.The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，2002，301(1):66 －70.

［10］YANG X，HORN K，WAND GS.Chronic ethanol exposure impairs phosphorylation of CREB and CRE2binding activity in rat striatum［J］.Alcohol Clin Exp Res，1998，22(2):382 －390.

［11］許亞軍，吳鑒明.慢性酒精中毒對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和腦組織內(nèi)CaN和Tau-Thr231的影響［J］.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2008，24(1):37－42.

［12］趙麗，韓威，陳嘉峰.酒精中毒大鼠腦血管病變及相應(yīng)腦組織損傷的病理觀察［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2005，2(22):51－53.