免疫法和化學(xué)法檢測糞隱血的方法評價

梁 巍 潘 莉 王域平

（信陽市中心醫(yī)院檢驗科，河南 信陽 464000）

大便隱血試驗是臨床診斷消化道出血和普查篩選消化道腫瘤的重要檢測項目,常用的化學(xué)法是，如聯(lián)苯胺法、鄰甲苯胺法、無色孔雀綠法、愈創(chuàng)木、匹拉米洞等，以鄰甲苯胺法較為實用。免疫學(xué)方法是膠體金標(biāo)記夾心免疫法?；瘜W(xué)方法和免疫方法，在臨床應(yīng)用中我們發(fā)現(xiàn)各有其優(yōu)勢，為比較了二者的靈敏性，特異性和抗干擾性，并對260例疑有消化道出血的患者進(jìn)行了觀察分析，并將獲得的結(jié)果進(jìn)行分析研究。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集本院患者新鮮糞標(biāo)本260份。

1.2 試劑

便隱血膠體金檢測試紙，北京萬華普曼生物工程有限公司提供；3%H2O2自配，鄰聯(lián)甲苯胺由上海遠(yuǎn)航試劑廠生產(chǎn)，冰乙酸及無水乙醇由廣州東紅化工廠生產(chǎn)，均為AR級。稱取鄰聯(lián)甲苯胺1g溶于冰乙酸及無水乙醇各50mL中，棕色瓶保存（4℃保存8～12周）[1]。

1.3 方法

每份標(biāo)本均做鄰聯(lián)甲苯胺法和便隱血膠體金試紙檢測，鄰聯(lián)甲苯胺法按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[2]進(jìn)行結(jié)果判定；便隱血膠體金試紙法按說明書操作并進(jìn)行結(jié)果判定。準(zhǔn)備試管和BASO專用濾紙。并在試管中加入0.5mL的蒸餾水。先用竹簽從糞盒內(nèi)取少量糞便，大約火柴頭大小，并放入試管中與蒸餾水充分混合均勻；將免疫試紙條按箭頭所指的一端浸入混合液中，在5min內(nèi)觀察結(jié)果，并記錄結(jié)果；同時在同一位置另取少量糞便涂于濾紙上，用鄰聯(lián)甲苯胺法操作并在5min內(nèi)觀察記錄結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

260例新鮮糞標(biāo)本用免疫法與化學(xué)法檢測，陽、陰性對照見表1。

結(jié)果顯示，免疫膠體金法和化學(xué)法檢測糞便隱血結(jié)果差異，據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 陽、陰性對照表

3 討 論

糞便隱血是指消化道每日出血量＜5mL，肉眼觀察糞便顏色無明顯改變，糞便涂片鏡檢觀察不到完整紅細(xì)胞，需要采用其他方法才能證實消化道有出血。本實驗所采用的糞便標(biāo)本外觀均為黃色，外觀通常無明顯異常。鄰聯(lián)甲苯胺法利用血紅蛋白中的亞鐵血紅素具過氧化物酶活性，催化過氧化氫放出新生態(tài)氧，把受體鄰聯(lián)甲苯胺氧化成聯(lián)甲偶氮苯而顯藍(lán)綠色。任何有類似氧化物酶活性的物質(zhì)都可影響此實驗，如動物的血紅蛋白，另外維生素C、鐵劑、綠色蔬菜均會造成假陰性[3]。免疫膠體金法是利用人血紅蛋白的單克隆抗體原理制成的免疫試紙條，具有靈敏度高（血紅蛋白為0.2μg/mL）和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。免疫膠體金法為WHO和世界胃腸鏡檢查協(xié)會推薦做糞便隱血試驗確認(rèn)的方法[4]，且對操作者無損害，但其成本較化學(xué)法高?；瘜W(xué)法的陽性率低于免疫法，易受食物或藥物的干擾，故極少量的出血會造成鄰聯(lián)甲苯胺法（陰性）膠體金法（陽性）的結(jié)果。但如果血紅蛋白在消化道停留時間過長，或受細(xì)菌分解等因素而降解，其與膠體金試紙上包被的抗體與相應(yīng)抗原受到破壞時就會出現(xiàn)假陰性；另外當(dāng)出血量大于膠體金法檢測范圍，隨著血紅蛋白含量增加，抗原抗體復(fù)合物反而減少，產(chǎn)生后帶現(xiàn)象，出現(xiàn)假陰性的現(xiàn)象?；瘜W(xué)法靈敏度和特異性雖不及免疫膠體金法，但可根據(jù)所顯示藍(lán)色的深淺對出血量做出半定量，其實用價值是不能被免疫膠體金法所取代[5]。當(dāng)免疫膠體金法顯示陽性時，再用化學(xué)法來驗證，以減少免疫膠體金法陽性率過高的問題；免疫膠體金法顯示陰性時，還應(yīng)根據(jù)患者消化道出血量大等因素，用化學(xué)法來消除因后帶現(xiàn)象造成的假陰性。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，筆者認(rèn)為有條件的實驗室應(yīng)同時開展這兩種方法：當(dāng)二者皆為陽性時，判斷為真陽性；化學(xué)法陽性而免疫膠體金法陰性者，若外觀無改變者建議禁肉食、大量綠色蔬菜、某些已知有影響的藥物2～3d后復(fù)查；若外觀有所改變者應(yīng)稀釋糞便標(biāo)本，重測免疫膠體金法；若化學(xué)法陰性而免疫膠體金法陽性者，建議患者多次連續(xù)復(fù)查及做進(jìn)一步檢查，為臨床提供客觀、準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

[1]葉應(yīng)嫵.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].2版.南京:東南大學(xué)出版社,1997:142-143.

[2]熊立凡.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:243-246.

[3]王建洲,陸希明.三種便潛血試驗測定方法的比較[J].哈爾濱醫(yī)藥,2005,25(2):1314.

[4]Young GP,St John DJ,Winawer SJ,et al.Choise Of fecal occult blood tests for colorectal cancer csreening:recommendations based on performance characteristics in population studies:a WHO World Health Organization)and OMED(World Organization for Digestive Endoscopy)report[J].Am J Gastroenterol,2002,97(10):2499-2507.

[5]左祥,劉和平,張彥華.檢測大便隱血中的鉤狀效應(yīng)及對策[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2007,4(6):551-552.