藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖的影響

杜慶聰 裴艷濤 楊國(guó)濤 孫雪飛 尹秋偉 吳銘生 (山東大學(xué)齊魯醫(yī)院胸外科,山東 濟(jì)南 25002)

藤梨根為獼猴桃科獼猴桃屬軟棗獼猴桃的根,味甘、咸寒、微澀,具有清熱解毒、消腫疥、祛風(fēng)濕的功效。臨床上常用于抗腫瘤治療,尤其對(duì)消化道腫瘤療效較佳。近年研究發(fā)現(xiàn),藤梨根提取物體外對(duì)多種腫瘤有抑制作用。不同方法萃取的提取物對(duì)腫瘤的抑制效果不同,有研究顯示藤梨根乙酸乙酯提取物抗腫瘤效果較佳〔1〕。有關(guān)藤梨根對(duì)肺癌的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以肺腺癌A549細(xì)胞系作為研究對(duì)象,觀察藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系與細(xì)胞培養(yǎng) 肺癌A549細(xì)胞系由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)所惠贈(zèng)。培養(yǎng)在含10%小牛血清,青霉素及鏈霉素各100 U/ml的 RPMI 1640培養(yǎng)液中,37℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng),0.25%胰蛋白酶消化傳代。

1.1.2 藤梨根乙酸乙酯提取物的制備 將藤梨根(購(gòu)自濟(jì)南建聯(lián)藥店)500 g粉碎成20目的粗粉→加8倍水煮2次,每次1 h;過(guò)濾濃縮→加入乙酸乙酯溶媒萃取3次(每次300 ml)→回收溶媒,得濃縮物約25 g(含三萜類物質(zhì))→蒸餾水熱溶→過(guò)濾→濾液供實(shí)驗(yàn)用(無(wú)菌)。

1.1.3 主要儀器和試劑 RPMI 1640培養(yǎng)液(美國(guó)Gibco公司),小牛血清(美國(guó) Hyclone公司),四唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、胰蛋白酶均購(gòu)自美國(guó) Sigma公司。全自動(dòng)CO2孵箱(美國(guó)杜邦公司 Napoc6100),倒置顯微鏡(日產(chǎn)Olympus,ZMT-413),450型酶標(biāo)儀(美國(guó)BioRad生產(chǎn))。鼠抗人Ki-67單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒、正常山羊血清購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司;標(biāo)記脫氧嘧啶核苷酸(3H-TdR)(北京原子能研究所);LKB-1217液體閃爍計(jì)數(shù)器(瑞典產(chǎn)品)。

1.2 方法

1.2.1 藥物濃度及配制方法 按照藥物血漿峰值濃度(PPC)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,以DMSO作為溶劑,將藤梨根乙酸乙酯提取物在臨用前用RPMI 1640培養(yǎng)液分別配制成不同的濃度,實(shí)驗(yàn)中藤梨根乙酸乙酯提取物的工作終濃度分別為10、20、40、80、160、320 μ g/ml,并使 其 中 DMSO 的 終濃 度 均 不 超 過(guò)0.04%。并設(shè)空白對(duì)照組(0.04%DMSO+細(xì)胞)。

1.2.2 倒置顯微鏡觀察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞,用RPMI 1640培養(yǎng)液制細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),調(diào)整成細(xì)胞濃度為1.0×105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液,分別接種于25 ml培養(yǎng)瓶中,每瓶3 ml。37℃常規(guī)培養(yǎng)24 h,細(xì)胞貼壁后分組:對(duì)照組加入含0.04%DMSO的培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)組分別加入新配制的含不同濃度藤梨根乙酸乙酯提取物的培養(yǎng)液,倒置顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察A549細(xì)胞用藥后24、48、72 h的細(xì)胞體積及細(xì)胞膜、細(xì)胞核等形態(tài)變化。

1.2.3 MTT檢測(cè)藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)A549細(xì)胞增殖活性的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞,經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化后,吹打成單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞濃度為5.0×104個(gè)/ml,接種于96孔培養(yǎng)板中,每孔100 μ l,含細(xì)胞5×103,培養(yǎng)24 h待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好時(shí),棄原培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)組分別加入新配制的含不同濃度藤梨根乙酸乙酯提取物的培養(yǎng)液,每個(gè)濃度24復(fù)孔,6個(gè)復(fù)孔為一組。對(duì)照孔加入含0.04%DMSO的培養(yǎng)液,另設(shè)不加細(xì)胞孔為空白對(duì)照,37℃、5%CO2飽和濕度下分別培養(yǎng)24、48、72、96 h,棄上清,每孔中加入 MTT 溶液 (5 g/L)20 μ l,37℃繼續(xù)孵育4 h,終止培養(yǎng)。小心吸棄孔內(nèi)上清液,每孔加入150 μ l DMSO振蕩10 min后比色,選擇490 nm波長(zhǎng),在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔光吸收值(OD),以空白對(duì)照孔調(diào)零,記錄結(jié)果。按Bliss法計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50值)。

1.2.4 集落形成實(shí)驗(yàn)觀察藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌克隆原細(xì)胞增殖的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞,經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化后,調(diào)整細(xì)胞濃度為500個(gè)/ml,接種于35 mm培養(yǎng)皿中,每皿2 ml,實(shí)驗(yàn)組加入新配制的含不同濃度藤梨根乙酸乙酯提取物的培養(yǎng)液,對(duì)照組用含0.04%DMSO的培養(yǎng)液,每組4個(gè)培養(yǎng)皿,搖勻后置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)7 d,棄去培養(yǎng)液,甲醛固定,Giemsa染色,鏡下計(jì)數(shù)每皿大于50個(gè)細(xì)胞以上的集落數(shù)目。計(jì)算集落形成率、集落形成抑制率。集落形成率(%)=(每皿集落數(shù)/每皿接種細(xì)胞數(shù))×100%。集落形成抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組集落數(shù)/對(duì)照組集落數(shù))×100%。

1.2.53H-摻入法檢測(cè)藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)A549細(xì)胞DNA合成的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞,經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化后,吹打成單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞濃度為4.0×104個(gè)/ml。接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi),每孔200 μ l。實(shí)驗(yàn)孔加入終濃度分別為20、40、80、160 μ g/ml的含藤梨根乙酸乙酯提取物的培養(yǎng)液,每組設(shè)6個(gè)平行孔,設(shè)對(duì)照孔(0.04%DMSO+細(xì)胞),分別處理 24、48、72 h。終止培養(yǎng)前 6 h,每孔加入3H-TdR 37 kBq(37 k Bq/ml);培養(yǎng)終止后,經(jīng)清洗、消化、離心等步驟,用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定每分鐘脈沖數(shù)(cpm)值;按下式計(jì)算不同濃度藤梨根乙酸乙酯提取物作用不同時(shí)間對(duì)A549細(xì)胞DNA合成的抑制率:摻入抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)孔平均cpm值/對(duì)照組平均cpm值)×100%。

1.2.6 免疫組織化學(xué)(SP)法檢測(cè)藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)A549細(xì)胞Ki-67抗原蛋白表達(dá)的影響 將經(jīng)多聚賴氨酸處理的小載玻片預(yù)先置于12孔培養(yǎng)板中,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化后,調(diào)整細(xì)胞濃度為1.0×105個(gè)/ml,然后接種細(xì)胞于培養(yǎng)板。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好時(shí),棄原培養(yǎng)液,分別加入終濃度為 20 、40 、80 、160 μ g/ml的含藤 梨根乙酸乙酯提取物的培養(yǎng)液3 ml,每濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔,并設(shè)對(duì)照孔(0.04%DMSO+細(xì)胞)。置于培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24 h、48 h,倒去孔內(nèi)培養(yǎng)液,取出載玻片,晾干;用4%多聚甲醛固定10 min(4℃)。采用鏈霉素-生物素(SP)免疫組化技術(shù)檢測(cè)Ki-67抗原表達(dá),全部操作過(guò)程嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書完成。組織抗原修復(fù)采用微波抗原修復(fù)法;Ki-67抗原單抗工作濃度均為1∶100。采用已知陽(yáng)性對(duì)照片作陽(yáng)性對(duì)照;以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。Ki-67抗原陽(yáng)性結(jié)果判定為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。將其置于Olympus顯微鏡下400倍高倍視野下觀察,對(duì)所測(cè)部位進(jìn)行準(zhǔn)確定位后,由攝像系統(tǒng)提取數(shù)值化細(xì)胞圖像輸入捷達(dá)801系列形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng),每例選取4個(gè)視野進(jìn)行陽(yáng)性率測(cè)定。以Ki-67抗原陽(yáng)性表達(dá)率為增殖指數(shù)(proliferation index,PI)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)資料以±s表示,組間差異比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞形態(tài)的影響倒置顯微鏡下見(jiàn)用藥前細(xì)胞排布緊密,貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞為多邊形,核分裂象多見(jiàn),有細(xì)胞重疊,細(xì)胞圓亮、飽滿,細(xì)胞間連接緊密。經(jīng)過(guò)10、20 μ g/ml濃度藤梨根乙酸乙酯提取物處理后細(xì)胞數(shù)目減少,但形態(tài)學(xué)改變不明顯。當(dāng)藤梨根乙酸乙酯提取物濃度達(dá)到40 μ g/ml時(shí),出現(xiàn)一定程度的形態(tài)改變,表現(xiàn)為細(xì)胞間連接減少、胞突回縮,細(xì)胞體積變小,變圓形;核分裂象減少,核固縮出現(xiàn),核顏色加深;重疊生長(zhǎng)現(xiàn)象減少,細(xì)胞數(shù)目減少;胞質(zhì)透亮度下降,顆粒感增強(qiáng),折光性增強(qiáng);細(xì)胞脫落呈懸浮狀,并見(jiàn)細(xì)胞碎片。上述變化隨藤梨根乙酸乙酯提取物作用時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加而明顯。尤其經(jīng)過(guò)濃度為160、320 μ g/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物處理后細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變明顯,細(xì)胞形態(tài)極度不規(guī)則,細(xì)胞崩解形成碎片,見(jiàn)較多死亡細(xì)胞。見(jiàn)圖1。

圖1 倒置顯微鏡下藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)A549細(xì)胞形態(tài)變化的影響(×100)

2.2 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖活性的影響 結(jié)果顯示一定濃度的藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用,且呈劑量依賴性。當(dāng)藤梨根乙酸乙酯提取物濃度為 10 μ g/ml時(shí)抑制不明顯;濃度在20 μ g/ml時(shí)即表現(xiàn)一定的抑制;此后隨著藤梨根乙酸乙酯提取物濃度的增加,實(shí)驗(yàn)孔內(nèi)吸光值逐漸降低,濃度在160 μ g/ml時(shí)對(duì) A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效果最佳,而濃度在320 μ g/ml時(shí)抑制作用無(wú)明顯增加;并且在同一濃度,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),抑制作用逐漸增大,呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間和劑量依賴性。濃度 ＞40 μ g/ml時(shí),藤梨根乙酸乙酯提取物作用各時(shí)段吸光值與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);濃度為20 μ g/ml時(shí),作用72 h、96 h后的吸光值與對(duì)照組比較才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。藤梨根乙酸乙酯提取物作用48 h、72 h、96 h的IC50分別為 129.36 μ g/ml、75.42 μ g/ml、58.88 μ g/ml。 見(jiàn)表 1 。

表1 不同濃度藤梨根乙酸乙酯提取物作用后各組細(xì)胞吸光值變化(±s,n=6)

表1 不同濃度藤梨根乙酸乙酯提取物作用后各組細(xì)胞吸光值變化(±s,n=6)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.05;下表同

組別 劑量(μ g/ml) 24 h 48 h 72 h 96 h對(duì)照組 - 0.344 ±0.089 0.521 ±0.068 0.872 ±0.074 1.337 ±0.059實(shí)驗(yàn)組 10 0.339 ±0.065 0.509 ±0.080 0.851 ±0.079 1.300 ±0.082 20 0.326 ±0.013 0.465 ±0.019 0.694 ±0.0231)0.997 ±0.0211)40 0.267 ±0.0351)0.368 ±0.0461)0.557 ±0.0511)0.742 ±0.0441)80 0.237 ±0.0431)0.308 ±0.0271)0.417 ±0.0421)0.527 ±0.0361)160 0.192 ±0.0521)0.216 ±0.0481)0.258 ±0.0391)0.273 ±0.0351)320 0.189 ±0.0481)0.209 ±0.0371)0.241 ±0.0311)0.266 ±0.0431)

2.3 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌克隆原細(xì)胞增殖的影響集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,當(dāng)藤梨根乙酸乙酯提取物濃度為10 μ g/ml時(shí),對(duì)A549細(xì)胞的集落形成無(wú)明顯的抑制作用;當(dāng)藤梨根乙酸乙酯提取物濃度 ＞20 μ g/ml時(shí)對(duì)A549細(xì)胞集落形成均有抑制作用,并且隨著藤梨根乙酸乙酯提取物濃度的增高,抑制作用逐漸明顯,集落形成率逐漸降低,集落抑制率逐漸增高,但 160 μ g/ml和320 μ g/ml兩種濃度的抑制作用相似,無(wú)明顯差別;濃度 ＞20 μ g/ml時(shí),各組集落形成數(shù)與對(duì)照組比較差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

2.4 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌A549細(xì)胞DNA合成的影響 結(jié)果顯示藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的DNA合成有明顯的抑制作用,且隨著藤梨根乙酸乙酯提取物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),抑制作用逐漸增強(qiáng)。給藥24 h后,80、160 μ g/ml組cpm值下降,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);給藥48 h后40 μ g/ml組cpm值與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而20 μ g/ml組則與對(duì)照組比較cpm值始終無(wú)顯著差異。見(jiàn)表3。

表2 藤梨根乙酸乙酯提取物作用后肺癌A549細(xì)胞的集落形成情況(±s,n=4)

表2 藤梨根乙酸乙酯提取物作用后肺癌A549細(xì)胞的集落形成情況(±s,n=4)

組別 劑量(μ g/ml) 集落形成數(shù) 集落形成率(%)集落形成抑制率(%)對(duì)照組 - 613.24±23.67 61.32 -實(shí)驗(yàn)組 10 597.68±27.18 59.77 2.54 20 482.31±22.62 1) 48.23 21.35 40 346.73±23.45 1) 34.67 43.46 80 246.61±15.89 1) 24.66 56.85 160 141.54±14.24 1) 14.15 76.92 320 140.19±10.32 1) 14.02 77.14

表3 不同濃度藤梨根提取物對(duì)肺癌A549細(xì)胞3 H-摻入率的影響(±s,n=6)

表3 不同濃度藤梨根提取物對(duì)肺癌A549細(xì)胞3 H-摻入率的影響(±s,n=6)

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2.5 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌A549細(xì)胞Ki-67抗原表達(dá)的影響 Ki-67抗原陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞核顯示棕黃色顆粒。藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)A549細(xì)胞的Ki-67抗原表達(dá)有明顯的抑制作用,隨著藤梨根乙酸乙酯提取物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞 PI逐漸降低,仍以 40、80 、160 μ g/ml 組作用明顯,與對(duì)照組比較差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表4,圖2。

圖2 藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549細(xì)胞Ki-67抗原表達(dá)(SP,×200)

表4 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌細(xì)胞Ki-67抗原表達(dá)的影響(±s,%,n=6)

表4 藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)肺癌細(xì)胞Ki-67抗原表達(dá)的影響(±s,%,n=6)

組別 劑量(μ g/ml) 24 h 48 h對(duì)照組 - 78.14±3.42 82.45±4.23實(shí)驗(yàn)組 20 72.25±6.45 67.95±5.83 40 65.34±5.78 1) 56.38 ±4.821)80 54.63±6.12 1) 38.66 ±3.451)160 40.54±4.39 1) 26.40 ±5.271)

3 討 論

目前肺癌的治療除手術(shù)之外,仍以化療、放療為主。這些治療的副作用較大,在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)常對(duì)正常組織產(chǎn)生損傷,如骨髓抑制、肝腎損害等 。中藥抗腫瘤已有悠久的歷史,中藥的低毒、安全、有效已是人們普遍接受的事實(shí),從中藥及其他天然藥物中尋找新的抗腫瘤藥物已成為目前研究的熱點(diǎn)。藤梨根(Radix Actinidiae)為獼猴桃科獼猴桃屬軟棗獼猴桃的根,近年實(shí)驗(yàn)研究也表明復(fù)方藤梨根制劑對(duì)高轉(zhuǎn)移性人肺腺癌細(xì)胞(PG)有較強(qiáng)的殺傷作用,抑制其生長(zhǎng),呈量效關(guān)系,抑制率最高達(dá)63.67%,可使細(xì)胞阻滯于 G0/G1期和細(xì)胞內(nèi)〔Ca2+〕升高,并且上調(diào)細(xì)胞間隙連接通訊(GJIC)功能;增強(qiáng)多藥耐藥(MDR)細(xì)胞株內(nèi)阿霉素(ADR)的積聚,減少ADR的外排,部分逆轉(zhuǎn)耐藥株K562/ADR和K562/長(zhǎng)春新堿(VCR)細(xì)胞的MDR;在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)MDR1 mRNA的表達(dá),從而降低MDR細(xì)胞內(nèi)P-糖蛋白(P-gp)的表達(dá)〔2～6〕。因此其抗腫瘤藥理研究和臨床驗(yàn)證受到廣泛關(guān)注。本文自制藤梨根乙酸乙酯提取物,觀察其對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞有明顯的生長(zhǎng)抑制和殺傷作用,此作用與藤梨根乙酸乙酯提取物濃度和作用時(shí)間有關(guān)。當(dāng)濃度≤20 μ g/ml時(shí),作用不明顯;當(dāng)濃度 ≥40 μ g/ml時(shí),抑制作 用增強(qiáng);當(dāng)濃度 ≥160 μ g/ml時(shí),效果趨于平緩。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),抑制作用逐漸增加,呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間依賴性。證實(shí)藤梨根乙酸乙酯提取物具有抗肺癌的作用。

克隆原細(xì)胞是指具有持續(xù)分裂和自我更新能力的細(xì)胞,腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)均以克隆原細(xì)胞的增殖為基礎(chǔ)。集落形成實(shí)驗(yàn)反映腫瘤細(xì)胞中具有增殖活性的克隆原細(xì)胞的增殖能力和潛力,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示當(dāng)藤梨根乙酸乙酯提取物濃度 ＞20 μ g/ml時(shí)對(duì)肺癌克隆原細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用,可抑制A549細(xì)胞的集落形成率,并存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。表明藤梨根乙酸乙酯提取物可以抑制肺癌克隆原細(xì)胞的生長(zhǎng),也證實(shí)其具有抗肺癌活性。

以上實(shí)驗(yàn)顯示當(dāng)劑量 ＜20 μ g/ml時(shí)抑制作用不明顯,而 ＞160 μ g/ml時(shí)抑制作用無(wú)明顯增強(qiáng)。故進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)采用20、40、80、160 μ g/ml等四個(gè)濃度進(jìn)行,并通過(guò)3H-Td R 摻入試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞DNA合成、免疫組化SP法檢測(cè)Ki-67抗原表達(dá)的方法,對(duì)藤梨根乙酸乙酯提取物抗肺癌作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。結(jié)果顯示隨著藤梨根乙酸乙酯提取物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),A549細(xì)胞的cpm值及PI逐漸降低。表明藤梨根乙酸乙酯提取物對(duì)A549細(xì)胞的DNA合成有明顯的抑制作用,可下調(diào)A549細(xì)胞Ki-67抗原表達(dá)強(qiáng)度,從而降低細(xì)胞增殖活性,使細(xì)胞增殖受到抑制,此為藤梨根乙酸乙酯提取物抑制肺癌細(xì)胞增殖的機(jī)制及靶點(diǎn)。而藤梨根乙酸乙酯提取物中的三萜類化合物,可能是其抗肺癌作用的物質(zhì)基礎(chǔ)〔7〕。

總之,應(yīng)用現(xiàn)代藥理、藥學(xué)的理論及方法深入研究藤梨根有效成分的藥用價(jià)值和作用機(jī)制,對(duì)藤梨根的開發(fā)應(yīng)用具有極為重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義。本研究說(shuō)明藤梨根乙酸乙酯提取物在體外對(duì)肺癌細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用,且呈現(xiàn)出時(shí)間與劑量依賴性,抗肺癌作用與抑制肺癌細(xì)胞DNA合成、下調(diào)Ki-67抗原表達(dá)強(qiáng)度、降低癌細(xì)胞增殖活性有關(guān),表明藤梨根乙酸乙酯提取物在治療肺癌方面將具有良好的臨床應(yīng)用和開發(fā)前景,但其具體抗肺癌機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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