清胰合劑質(zhì)量標準與臨床效果研究

許富昌，康艷霞，馬梅芳

1.陜西省神木縣中醫(yī)藥研究所，陜西神木 719300；2.山東省棗莊市藥品檢驗所，山東棗莊 277102

清胰合劑為本院自行研制的制劑，由茵陳、厚樸、黃芩、白芍等藥物組成，具有疏肝理氣、清熱燥濕、攻下通腑之功效，臨床主要用于急性胰腺炎的治療。現(xiàn)采用高效液相色譜法對清胰合劑中主要成分綠原酸進行定量分析。同時采用薄層色譜法對制劑中主要藥味厚樸、黃芩、白芍進行定性鑒別，并對其臨床療效進行觀察。

1 清胰合劑質(zhì)量標準研究

1.1 儀器與試藥

LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津）、BS224S電子分析天平（德國賽多利斯）；綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200312）；厚樸酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110729-200208）；和厚樸酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110730-200312）；黃芩苷（中國藥品生物制品檢定所，批號：110715-200212）；芍藥苷（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200527）；清胰合劑樣品（自制，批號：101001、101002、101003）；陰性對照樣品（自制）；乙腈為色譜純（美國Fisher scintific）；水為超純水；其余試劑均為分析純（購自濟南化學(xué)試劑廠）。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 薄層色譜法鑒別厚樸

取本品10 ml，置水浴上濃縮至稠膏狀，加甲醇10 ml攪拌使溶解，濾過，濾液再濃縮至稠膏狀，加甲醇5 ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。取缺少厚樸的陰性對照樣品10 ml，同法制成陰性對照溶液。另取厚樸酚對照品、和厚樸酚對照品，加甲醇制成每1毫升各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。按照2010年版《中國藥典》一部附錄ⅥB薄層色譜法[1]試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲醇（17∶1）為展開劑展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾。

1.2.2 薄層色譜法鑒別黃芩

取本品1 ml，加甲醇4 ml，搖勻，作為供試品溶液。取缺少黃芩的陰性對照樣品1毫升，同法制成陰性對照溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照2010年版《中國藥典》一部附錄ⅥB薄層色譜法[1]試驗，吸取上述三種溶液各2 μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性對照無干擾。

1.2.3 薄層色譜法鑒別白芍

取本品10 ml，置水浴上濃縮至稠膏狀，加乙醇10 ml攪拌使溶解，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。取缺少白芍的陰性對照樣品10 ml，同法制成陰性對照溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照2010年版《中國藥典》一部附錄ⅥB薄層色譜法[1]試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑展開，取出，晾干，噴以 5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍紫色斑點，且陰性對照無干擾。

1.2.4 綠原酸含量測定

1.2.4.1 色譜條件[2]色譜柱：Phenomenex-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（10∶90）；檢測波長：327 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：35℃；理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算不低于2000。

1.2.4.2 對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每毫升含40 μg的溶液，即得。

1.2.4.3 供試品溶液的制備 精密量取供試品1 ml，置25 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.4.4 陰性對照溶液的制備 取缺少茵陳的陰性對照樣品，按照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

1.2.4.5 干擾試驗 按照“1.2.4.1”項下的色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照溶液在綠原酸色譜峰位置處無相應(yīng)峰出現(xiàn)，提示陰性無干擾。見圖1。

1.2.4.6 線性關(guān)系考察 分別吸取綠原酸對照品溶液（40.8 μg/ml）2、4、6、8、10、12、16、20 μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積Y對進樣量X（μg）進行線性回歸，得標準曲線方程:Y=13357X-27153，r=0.9999。表明綠原酸在81.6～816.0 μg范圍內(nèi)，峰面積值與進樣量之間有良好的線性關(guān)系。

1.2.4.7 精密度試驗 精密吸取綠原酸對照品溶液（40.8 μg/ml）10 μl，按“1.2.4.1”項下色譜條件，重復(fù)進樣 6 次，測得綠原酸峰面積RSD＝0.56%（n=6），提示儀器的精密度良好。

圖1 綠原酸對照品、供試品及陰性對照溶液品色譜圖

1.2.4.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（批號：101001），分別于制備后 0、1、2、3、4、5、6 h 進樣， 測得樣品中綠原酸峰面積RSD＝0.67%，提示供試品溶液在制備后6 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.2.4.9 重現(xiàn)性試驗 取同一批樣品（批號：101001），分別制備6份供試品溶液，按照“1.2.4.1”色譜條件測定，計算含量分別為 0.845、0.856、0.849、0.862、0.857、0.848 mg/ml，平均含量 0.853 mg/ml，RSD=0.76%（n=6），提示該方法的重現(xiàn)性良好。

1.2.4.10 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品（綠原酸含量0.8528 mg/ml）6份，分別精密加入綠原酸對照品0.8162 mg，按“1.2.4.3”項下供試品溶液制備方法操作，依法制備，進樣，測定峰面積，按公式1計算回收率。見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

1.2.4.11 樣品含量測定 取三批清胰合劑樣品 （批號：101001、101002、101003），按“1.2.4.3”項下供試品溶液制備方法操作，按“1.2.4.1”項下色譜條件，依法測定。見表2。

表2 清胰合劑中綠原酸的含量測定結(jié)果

2 清胰合劑臨床療效觀察

2.1 資料與方法

2.1.1 一般資料

64例患者均來源于2009年1月～2011年1月本研究所的住院患者。根據(jù)臨床表現(xiàn)、實驗室檢查、腹部B超、胰腺CT均確診，符合急性胰腺炎的診斷標準。隨機將64例患者分為對照組和治療組，各32例，其中，對照組男21例，女11例，年齡19～59歲，平均42歲；治療組男20例，女12例，年齡18～62歲，平均44歲。

2.1.2 方法

2.1.2.1 對照組 采用西醫(yī)及基本支持療法，包括禁食、胃腸減壓、營養(yǎng)支持、使用生長抑素、抗感染以及維持水、電解質(zhì)和酸堿平衡等。

2.1.2.2 治療組 在對照組治療的基礎(chǔ)上加用清胰合劑治療。藥液自胃管注入，每次100 ml，每天3次，每次注藥后夾閉胃管1 h，然后開放，保證藥物充分吸收。

2.1.2.3 觀察指標 分別比較兩組癥狀消失時間、腹水消失時間、血尿淀粉酶及白細胞計數(shù)恢復(fù)至正常時間及住院天數(shù)等。

2.1.2.4 療效標準 治愈：臨床表現(xiàn)、體征完全消失，血尿淀粉酶、肝腎功能、腹部B超、CT均正常；好轉(zhuǎn)：臨床表現(xiàn)、體征明顯改善，血尿淀粉酶、肝腎功能、腹部B超、CT基本正常；無效：病情無改善或加重。

2.1.2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.1.3 結(jié)果

治療組與對照組在臨床癥狀和體征消失、腹水消失、血尿淀粉酶恢復(fù)到正常及住院時間等方面比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；治療組總有效率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表3、4。

表3 兩組患者癥狀體征消失、腹水消失、實驗室指標恢復(fù)至正常及住院時間比較（±s，d）

表3 兩組患者癥狀體征消失、腹水消失、實驗室指標恢復(fù)至正常及住院時間比較（±s，d）

治療組對照組P值組別 例數(shù) 癥狀消失32323.72±1.258.42±1.34<0.05腹水消失5.62±2.9510.12±1.72<0.05血尿淀粉酶5.25±1.3710.41±1.75<0.05白細胞計數(shù)4.48±1.679.88±2.11<0.05住院天數(shù)19.74±2.7532.53±1.61<0.05

表4 兩組臨床療效比較（例）

3 討論

茵陳是清胰合劑中的君藥，綠原酸是茵陳的主要活性成分之一，具有抗菌、抗病毒、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗毒素等多方面藥理作用[3]，為本制劑的主要有效成分之一，因此選擇綠原酸作為含量測定的指標成分較為合理。厚樸、黃芩、白芍為清胰合劑中的主要藥味，其薄層色譜斑點清晰，陰性對照無干擾。本文采用定量測定與定性分析相結(jié)合的質(zhì)量控制方法，可以達到控制制劑質(zhì)量，保證臨床療效的目的。

急性胰腺炎是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，起病急，發(fā)展快，它不僅是胰腺的局部炎癥病變，而且是涉及多個臟器的全身疾病，重者可繼發(fā)感染、休克等各種并發(fā)癥，病死率高[4-5]。中醫(yī)多認為本病屬“心脾痛”、“胃脘痛”、“結(jié)胸”、“膈痛”等范疇，病機主要是肝、膽、脾、胃功能紊亂，氣機升降失調(diào)，氣滯濕阻，熱濕相搏阻于中焦，繼而熱結(jié)陽明，腑氣不通而發(fā)病。故“不通則痛”為本病的主癥[6-7]。清胰合劑具有疏肝理氣、清熱燥濕、攻下通腑的作用，使肝膽得以舒瀉，濕熱得清，腑氣得通，故“通則不痛”，能有效緩解急性胰腺炎癥狀及體征?，F(xiàn)代藥理研究表明[8]：茵陳具有顯著的利膽、保肝、抗炎的作用；厚樸具有抗菌、使消化道黏膜反射性興奮的作用；黃芩可解熱鎮(zhèn)靜、利膽和保護肝臟；白芍具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、保肝、解毒等作用。中藥與西藥協(xié)同應(yīng)用，針對急性胰腺炎發(fā)病的各個環(huán)節(jié)，迅速改善胃腸功能，抑制和降低胰腺分泌、減輕毒物對機體的損傷，對于防止初期胰腺炎進一步缺血壞死起到了積極的作用，從而縮短病程，取得了較好的臨床療效。

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