海馬龍蛇丸質(zhì)量標準研究

陳云松

（丹東市中心醫(yī)院，遼寧丹東 118002）

海馬龍蛇丸由馬錢子（炙）、全蝎、僵蠶、麻黃、土鱉蟲、地龍、穿山甲（炙）、三七、甘草、雞血藤、木瓜等中藥組成，具有祛風(fēng)除濕，舒筋活絡(luò)，活血化瘀，消腫定痛之功效，臨床用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。為控制其藥品質(zhì)量，對該處方中的僵蠶、土鱉蟲、穿山甲、甘草、雞血藤、木瓜進行了顯微鑒別，對麻黃、三七進行了薄層鑒別以及士的寧的限量檢查[1-2]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BH-2電子顯微鏡（日本Olympus公司）；ZF-1紫外熒光記錄分析儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司）。

1.2 試藥

薄層硅膠G、薄層硅膠GF254（青島海洋化工廠)；試劑均為分析純；樣品由丹東市康華醫(yī)院提供；對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品為棕黑色大蜜丸，味苦、氣微腥。

2.2 顯微鑒別

取本品，置顯微鏡下觀察：體壁碎片棕黃色、綠黃色或黃綠色，有光澤，外表皮表面觀呈多角形網(wǎng)格樣紋理，表面密布細小顆粒。體壁碎片黃色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8～24 μm，有的具長短不一的剛毛。菌絲體存在于體壁或淡棕色半透明結(jié)晶塊中，菌絲近無色、細長、直徑1～5 μm，相互盤纏交織。無定形碎塊近無色、淡黃色或黃色，大多有大小不一的類圓形、橢圓形或不規(guī)則形空洞，碎塊邊緣凹凸不平或有凹陷。纖維束淺黃色，周圍薄壁細胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維。纖維束紅棕色、黃棕色、棕色或近無色，周圍的細胞中含有草酸鈣方晶，形成晶纖維。石細胞多成群，類圓形或類方形層紋明顯，孔溝細[3]。

2.3 三七的薄層鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 取本品9 g，切碎，加硅藻土3 g，研勻，加乙醚40 ml，超聲處理10 min，棄去乙醚液，藥渣揮盡乙醚后，加甲醇40 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 ml，微熱使溶解，加水飽和的正丁醇25 ml振搖提取，取正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次25 ml，正丁醇液濃縮至干后加入1 ml甲醇使其溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 對照品溶液制備 取三七皂苷R1對照品及人參皂苷Rb1、Rg1對照品，分別加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 空白對照液制備 除去三七藥材以外的各味藥材適量，按照成藥生產(chǎn)工藝制成空白對照，同“供試品溶液的制備”項下操作，制成空白對照液。

2.3.4 方法 照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，取上述五種溶液各2 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以硫酸乙醇溶液（1→10），立即于110～120℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖1。

2.4 麻黃的薄層鑒別

2.4.1 供試品溶液制備 取本品9 g，切碎加硅藻土3 g，研勻，加濃氨試液5 ml與乙醚40 ml，加熱回流1 h，濾過、濾液加鹽酸乙醇溶液（1→20）1 ml，搖勻，蒸干，殘渣加甲醇 1 ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。

圖1 三七TLC圖譜（1～2.三七供試品溶液；3.空白對照液；4.人參皂苷 Rb1；5.人參皂苷 Rg1）Fig.1 TLC chromatogram of Panax notoginseng(1-2.Sample of Panax notoginseng;3.Reference substance;4.Ginsenoside Rb1;5.Ginsen oside Rg1)

2.4.2 對照品溶液制備 取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.4.3 空白對照液制備 除去麻黃藥材以外的各味藥材適量，按照成藥生產(chǎn)工藝制成空白對照，同“供試品溶液的制備”項下操作，制成空白對照液[4]。

2.4.4 方法 照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-乙醚-濃氨試液（10∶2∶1∶0.2）為展開劑，置用展開劑飽和10 min的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干。在105℃加熱10 min，噴以茚三酮試液，再置105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖2。

圖2 麻黃TLC圖譜（1～2.麻黃供試品溶液；3.空白對照液；4.鹽酸麻黃堿對照品）Fig.2 TLC chromatogram of Ephedrine(1-2.Sample of Ephedrine;3.Blanck reference substance;4.Reference substance of Ephedrine hydrochloride)

2.5 士的寧的限量檢查

2.5.1 供試品溶液制備 取本品1丸，切碎，加硅藻土3 g，研勻，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液5 ml使浸潤，精密加入氯仿40 ml，輕輕搖勻，稱重，于室溫放置24 h，再稱重，補足氯仿減失的重量，充分振搖，濾過。精密量取續(xù)濾液20 ml，用硫酸溶液（3→100）分次提取 5次，每次20 ml，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液調(diào)pH值8～9，用氯仿分次提取5次，每次20 ml，合并氯仿液，蒸干，放冷，殘渣加氯仿使溶解，定量轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶內(nèi)，并稀釋至刻度、搖勻，作為供試品溶液[5]。

2.5.2 對照品溶液制備 取士的寧對照品，加氯仿制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.5.3 空白對照液制備 除去馬錢子（炙）藥材以外的各味藥材適量，按照成藥生產(chǎn)工藝制成空白對照，同“供試品溶液的制備”項下操作，制成空白對照液。

2.5.4 方法 照薄層色譜法（《中國藥典》2000年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取供試品溶液、空白對照液各 4 μl，對照品溶液 2 μl，分別點于同一硅膠GF-254薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（16∶12∶1∶4）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（254 nm）下檢識。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，樣品的斑點顏色不得深于對照品的斑點顏色[6]。

3 討論

有關(guān)海馬龍蛇丸含量測定研究較少，本文主要以麻黃、三七及士的寧的限量檢查為含量檢測指標。本實驗表明，在薄層板上應(yīng)用《中國藥典》2005年版條件分離，測定其有效成分和含量，說明本法可為海馬龍蛇丸制劑提供質(zhì)量控制的有效手段[7]。

本研究中的鑒別方法顯微特征明顯，所用的薄層色譜法鑒別性強且重復(fù)性良好，該方法簡單易行，因為海馬龍蛇丸組方中有馬錢子（炙），所以應(yīng)用了士的寧的限量檢查[8]。本研究結(jié)果表明，薄層色譜斑點清晰，重復(fù)性好，陰性對照無干擾。本品處方組成合理，制備簡單，質(zhì)量控制方法簡單易行，該實驗對海馬龍蛇丸的質(zhì)量控制有較好效果。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄31.

[2]王寶琹.中成藥質(zhì)量標準與標準物質(zhì)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1994:10.

[3]謝培山.中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩色圖集[M].廣州:廣東科技出版社,1993:58,39,119,127.

[4]王寶.中成藥質(zhì)量標準與標準物質(zhì)研究[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1994:195,197,352,422.

[5]張國躍.痰飲丸質(zhì)量標準研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2009,5(5):12-14.

[6]金齊武,張青云,蒲婧哲.HPLC法測定龍膽瀉肝丸(水丸)中梔子苷的含量[J].安徽醫(yī)藥,2008,12(7):604-605.

[7]孟祥松,陳雷,蔣磊.膽樂片質(zhì)量標準的研究[J].安徽醫(yī)藥,2009,13(5):500-502.

[8]李東霖,孫平川,白和平.HPLC法測定肺寧丸中橙皮苷的含量[J].陜西中醫(yī),2002,23(10):994.