果旭阿湯中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量測定

陳曉紅，陳睿，陳元濤，熱增才旦，段黎昊

(1.青海大學醫(yī)學院藥學系，西寧 810001;2.青海師范大學化學系，西寧 810008;3.青海省質(zhì)量技術監(jiān)督局，西寧 810008)

藏藥果旭阿湯是藏醫(yī)藥世家通過長期實踐總結出的治療血隆病的經(jīng)典處方之一，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·藏藥》第1冊中［1］，在《四部醫(yī)典》［2］和青海的藏藥志中也有記載。該處方主治功能為開胸解郁行氣、鎮(zhèn)痛，用于治療血隆病引起的胸悶氣短、胸脅疼痛和肩背脹痛等癥。通過查閱文獻［3-7］，筆者未見果旭阿湯中藏木香有效成分土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量測定方法的報道，因此通過對藏木香中有效成分提取方法、提取溶劑以及影響測定結果的其他參數(shù)進行了比較，采用氣相色譜法測定藏藥果旭阿湯中藏木香有效成分土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量，為該藥質(zhì)量標準的建立提供了實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀(Agilent 7890型);FID檢測器;GCD-500G高純氫氣發(fā)生器(北京佳維科創(chuàng)科技有限公司)。超聲儀(KQ-250DV型，250 W，40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 土木香內(nèi)酯對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110760-200507，供含量測定用);異土木香內(nèi)酯對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110761-200204，供含量測定用);超純水;乙酸乙酯(色譜純);藏藥果旭阿湯樣品所用藥材均由青海省藏醫(yī)藥研究所提供(批號:100801，100802，100803)，并經(jīng)青海省藥品檢驗所鑒定。各缺味陰性對照樣品按四味藏木香湯散的處方及制備工藝進行缺味制備。

2 方法與結果

2.1 提取條件的選擇 同時提取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯，采用乙酸乙酯超聲提取30min。

2.2 色譜條件 色譜柱:SE-30(30 m×0.32mm，0.50 μm);程 序 升 溫 法:初 始 溫 度 50℃，以20℃·min-1升 至 170℃，保 持 28min，再 以25℃·min-1升至250℃;分流比:10∶1;檢測器溫度:260℃;載氣:氮氣;流速:1.0mL·min-1。

2.3 對照品溶液制備 分別精密稱取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯對照品各20 mg，置10mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，配成2.00 mg·mL-1儲備液。各吸取2.00 mg·mL-1土木香內(nèi)酯對照品儲備液和異土木香內(nèi)酯對照品儲備液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mL，分別置于5mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，制得土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯系列對照品溶液。

2.4 供試品溶液 精密稱取果旭阿湯樣品(懸鉤木、藏木香、寬筋藤、干姜和馬錢子按處方比例混勻，藏木香在成藥中所占的比例約為20.2%，過孔徑0.355mm藥篩)3份，加入乙酸乙酯30mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30min，取出，冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用乙酸乙酯補足質(zhì)量，搖勻，過濾，取濾液作為供試品溶液。

2.5 空白實驗 取不含藏木香成分的果旭阿湯陰性樣品1份，按“2.4”項方法制成陰性樣品溶液。分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各1.0 μL注入氣相色譜儀，按色譜條件依次測定。結果該陰性溶液在土木香內(nèi)酯峰的位置上無干擾。

2.6 線性關系考察 分別吸取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯系列對照品溶液1.0 μL進樣，測定其含量。結果土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯均在 0.1～1.0 mg·mL-1內(nèi)呈良好線性關系，回歸方程分別為Y=1.35×103X+8.17(r=0.999 3)，Y=1.25×103X+32.3(r=0.999 8)，前者檢測限為 2.7 μg·mL-1(S/N=3)，后者檢測限為 2.6 μg·mL-1。

2.7 精密度實驗 分別取0.20 mg·mL-1土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的對照品溶液，進樣，測定其含量。結果，土木香內(nèi)酯的RSD為1.25%(n=6)，異土木香內(nèi)酯的RSD為1.16%(n=6)。說明該實驗方法準確。

2.8 重復性實驗 取樣品粉末按“2.4”項方法分別配制供試品溶液6份，依次測定土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量。結果土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的平均含量分別為2.65和3.60 mg·g-1，RSD分別為1.44%和1.16%。結果表明，該方法重復性良好。

2.9 穩(wěn)定性實驗 取同一批次供試品，按“2.4”項方法分別配制供試品溶液5份，依次放置0，4，8，12，24 h后，分別測定。結果土木香內(nèi)酯的RSD=1.02%(n=5)，異土木香內(nèi)酯的RSD=1.32%(n=5)。說明穩(wěn)定性很好。

2.10 加樣回收率實驗 分別精密稱取已知含量的土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯樣品約1.0 g，分別準確加入1.00 mg·mL-1對照品溶液 2.00mL，按“2.4”項方法分別制備供試品溶液，依法測定，結果土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯平均回收率分別為97.25%，97.42%;RSD分別為 0.93%，0.90%，見表 1。

表1 土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的加樣回收率測定結果Tab.1 Resultsofrecovery ofalantolactoneand isoalantolactone mg，n=6

2.11 樣品含量測定 取3批樣品，分別按“2.4”項方法制備供試品溶液，依次測定土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量。結果土木香內(nèi)酯含量分別為2.65，2.59，2.61 mg·g-1，平均 2.62 mg·g-1，RSD=1.21%(n=3);異土木香內(nèi)酯含量分別為 3.34，3.37，3.39 mg·g-1，平均 3.37 mg·g-1，RSD=0.76%。

3 討論

實驗中同時提取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯，分別采用三氯甲烷冷浸提取14 h、甲醇超聲提取、乙酸乙酯超聲提取和乙醚回流提取的方法對同一批樣品進行了提取和測定，對這幾種方法地提取速度和分離效果進行比較研究，發(fā)現(xiàn)提取速度、提取率略有差別:三氯甲烷冷浸法耗時長，操作較繁瑣，不利于快速、及時分析;甲醇超聲提取40min能較完全地提取藥材中的土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯，但耗時也較長;乙醚回流提取樣品液雖簡單快速，但脂溶性雜質(zhì)較多，影響色譜柱的分離效果;用乙酸乙酯超聲提取30min法提取率較高，又省時，故本實驗采用此提取方法。

以乙酸乙酯為溶劑，比較超聲提取法 30，60，90min提取效果，結果發(fā)現(xiàn)超聲提取30min提取的含量差別不大，由于其操作時間短，選擇超聲30min為提取條件。

在其他色譜條件固定的條件下，筆者對5種不同的升溫程序進行了選擇，包括初始溫度、升溫速率進行了選擇、比較，并且考慮分離度、分析時間長短及高沸點雜質(zhì)的影響，選擇了簡單易行的提取條件和色譜條件，基本消除了其他成分的干擾。

本研究結果表明，采用氣相色譜法同時測定藏藥果旭阿湯中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量，快速、準確，簡便可靠，重復性好。本實驗所建立的方法，為更好地控制藏木香藥材及其制劑的質(zhì)量標準和藏藥綜合開發(fā)利用提供了科學依據(jù)。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準［S］.藏藥.第1冊.1995:309.

［2］玉妥·云丹貢保.四部醫(yī)典(藏文)［M］.拉薩:西藏人民出版社，2000:70.

［3］曾銳，瞿燕，高宇明.反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定藏藥六味能消膠囊中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量［J］.中國藥學雜志，2007，42(7):491－493.

［4］董琦，馬世震，胡鳳祖.高效液相色譜(HPLC)法測定不同采收期栽培藏木香中內(nèi)酯類成分［J］.中草藥，2010，41(7):1186.

［5］王秀麗，欒楊，劉擁軍，等.氣相色譜法測定土木香中土木香內(nèi)酯含量［J］.山東中醫(yī)大學學報，2005，29(4):322－323.

［6］丘翠嫦，戴斌.新疆木香中土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的分離鑒定［J］.中藥材，1995，18(1):30－32.

［7］楊媛媛，馬曉康，顧政一，等.不同產(chǎn)地新疆赤芍中芍藥苷的含量測定［J］.醫(yī)藥導報，2008，27(7):763－764.