降喘固本丸的鑒別研究

王 靜，趙 興，陶福芳，陳 萍，力 荔

(1.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046; 2.陜西省新藥審評(píng)中心，陜西 西安 710065; 3.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003)

降喘固本丸是陜西省中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由黨參、黃芪、枳殼、五味子、紫蘇子、浙貝母等中藥配制而成，具有補(bǔ)肺益腎、健脾化痰、降氣平喘功效，用于慢性阻塞型肺疾病的治療。為了有效控制本品的質(zhì)量，筆者采用薄層色譜法對(duì)方中黨參、黃芪、枳殼進(jìn)行定性鑒別研究，并對(duì)方中的紫蘇子、五味子、浙貝母進(jìn)行了顯微鑒別研究。

1 儀器與試藥

KQ－250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);PB1502－S型電子天平(美國梅特勒－托利多公司);ZF－C型三用紫外分析儀(上?？岛坦怆妰x器有限公司);電熱板(德國labtech公司);leica牌DM750型電子顯微鏡(西安中顯光電科技有限公司)。黨參對(duì)照藥材(批號(hào)為20080710)、黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)為0781－9908)、柚皮苷對(duì)照品(批號(hào)為110722－200309)均由中國藥品生物制品檢定所提供。硅膠G(青島海洋化工有限公司);中性氧化鋁(國藥集團(tuán)化學(xué)股份有限公司);甲醇、石油醚、乙酸乙酯等試劑均為分析純。降喘固本丸(由陜西省中醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供，批號(hào)為 20100326，20100612，20100614)。

2 質(zhì)量控制

2.1 性狀

本品為褐色水丸，味微苦。

2.2 顯微鑒別[1－3]

將本品粉碎成細(xì)粉，按[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅡC]的顯微鑒別法項(xiàng)下要求切片。結(jié)果顯微特征依次為南五味子、浙貝母和紫蘇子。種皮內(nèi)層石細(xì)胞呈淡黃色或淡黃棕色，表面觀呈多角形，壁較厚，胞腔含深棕色物。淀粉粒卵圓形，直徑35～48 μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、八字狀或馬蹄狀，位于較小端，層紋細(xì)密。內(nèi)果皮(異型)石細(xì)胞成片，黃色或棕黃色;頂面觀多角形，界限不分明，胞腔呈心狀;表面觀類橢圓形，壁具細(xì)致的雕花鉤紋狀增厚。石細(xì)胞分枝狀，壁厚，層紋明顯(見圖1)。

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 黃芪

取本品20 g，研細(xì)，加甲醇80 mL，加熱回流1 h，濾過，蒸干甲醇，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇萃取2次，每次20 mL，合并正丁醇溶液，再用氨試液洗2次，每次20 mL，分取正丁醇溶液，加于中性氧化鋁柱(100～120目，5 g，內(nèi)徑10～15 mm)上，用40%甲醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺黃芪陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》ⅥB]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)，紫外燈(365 nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，且陰性無干擾。見圖2。

圖1 降喘固本丸的顯微鑒別圖

圖2 黃芪的薄層色譜圖

2.3.2 黨參

取本品粉末4 g，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，通過D101型大孔樹脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為 10 cm，4 g)，加水 20 mL 洗脫，棄去水液，再用 50%乙醇50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例，取不含黨參的藥材，照本品制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。取黨參對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》ⅥB]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－冰醋酸－水(7∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在80℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且陰性無干擾。見圖3。

2.3.3 枳殼[4－5]

取本品粉末4 g，加石油醚(30～60℃)50 mL回流提取1 h，棄去石油醚(脫酯除雜)，藥渣揮干，加甲醇50 mL，再加熱回流2 h，濾過，提取液蒸干，殘?jiān)?0%乙醇(調(diào)pH至8)4 mL使溶解，作為供試品溶液。取缺枳殼陰性樣品2 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》ⅥB]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－水(13∶6∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且雙陰性無干擾。見圖4。

2.3.4 白術(shù)

取本品粉末4 g，加正己烷30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至2 mL作為供試品溶液。按處方比例，取不含白術(shù)的藥材，照本品制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(50∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，但陰性對(duì)照有干擾，故不列入標(biāo)準(zhǔn)正文中。見圖5。

圖3 黨參的薄層色譜圖

圖4 枳殼的薄層色譜圖

圖5 白術(shù)的薄層色譜圖

3 討論

方中因有部分藥材以生藥原粉入藥，故可采用顯微鑒別方法，選擇專屬性強(qiáng)、易于觀察的藥材顯微鑒別點(diǎn)作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

在黃芪薄層色譜鑒別的供試品處理中，未用氨試液萃取時(shí)，雜質(zhì)多，斑點(diǎn)分離不清晰;加用氨試液萃取后，斑點(diǎn)分離清晰，方法靈敏度高。薄層色譜法鑒別本品中黨參、黃芪、枳殼的結(jié)果表明，供試品與對(duì)照品(對(duì)照藥材)所顯斑點(diǎn)一致，陰性均無干擾，該法專屬性強(qiáng)，且多次重復(fù)效果較好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

本制劑為醫(yī)院制劑，由于經(jīng)費(fèi)有限和時(shí)間有限，暫時(shí)沒有做含量測(cè)定項(xiàng)目，還有待進(jìn)一步研究。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:264－265，283－284，355－356，229－230.

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