利水消腫膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

秦 攏 ，張永鋒，姬雪禮，李向軍 ，李 寧

(1.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035; 2.華北制藥集團新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司，河北 石家莊 050015)

利水消腫膠囊是石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的中藥六類新藥，由當(dāng)歸、柴胡、茯苓、澤瀉等11味中藥組方，具有疏肝健脾、通絡(luò)利水功效，用于治療特發(fā)性水腫。筆者進行了定性定量研究，建立了桂枝、柴胡、白芍、益母草、澤瀉的薄層色譜鑒別方法及阿魏酸高效液相色譜定量方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

定量毛細(xì)管(美國Drummond);KQ－250型超聲波清洗器;Agilent 1100型series高效液相色譜儀。利水消腫膠囊(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號分別為090901，090902，090903);阿魏酸對照品(批號為110773－200611)，桂皮醛對照品(批號為110710－200714)，芍藥苷對照品(批號為110736－200833)，鹽酸水蘇堿對照品(批號為11012－200709)，柴胡對照藥材(批號為120992－200705)，澤瀉對照藥材(批號為121081－200603)均由中國藥品生物制品檢定所提供;硅膠G(青島海洋化工廠);雙蒸餾水(自制)，乙腈(Fisher)為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

桂枝:取本品10粒的內(nèi)容物，加石油醚(60～90℃)10 mL，振搖5 min，靜置，取上清液作為供試品溶液。按處方比例取缺桂枝的藥材，依照制備工藝制得桂枝空白樣品，按供試品溶液制備法操作，即得陰性對照品溶液。另取桂皮醛對照品，加乙醇制成每1 mL含1 μL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液及陰性對照品溶液各5～10μL、對照品溶液2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－冰醋酸(92∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液對鑒別無干擾(圖1 A)。

柴胡:取本品10粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣用三氯甲烷洗滌3次，每次20 mL，棄去三氯甲烷液;再用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例取缺柴胡的藥材，依照制備工藝制得柴胡空白樣品，按供試品溶液制備法操作，即得陰性對照品溶液。另取柴胡對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲處理20 min，靜置，取上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液及陰性對照品溶液各5～10 μL、對照藥材溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水(30∶8∶1)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，10℃以下飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以對二甲氨基苯甲醛－10%硫酸乙醇(5∶100)溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上至少顯一個相同顏色的主斑點陰性對照品溶液對鑒別無干擾(圖1 B)。

白芍:按處方比例取缺白芍的藥材，依照制備工藝制得白芍空白樣品，按柴胡供試品溶液制備法操作，即得陰性對照品溶液。取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取柴胡鑒別項下的供試品溶液及陰性對照品溶液各5～10 μL、對照品溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液對鑒別無干擾(圖1 C)。

益母草:取本品10粒的內(nèi)容物，加熱水30 mL溶解，脫脂棉濾過，放冷，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1～2，通過已處理好的強酸性陽離子樹脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，柱高15 cm)，先用水洗脫至流出液無色，再用氨試液100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣先加乙醇2 mL再加5滴鹽酸使溶解，作為供試品溶液。按處方比例取缺益母草的藥材，依照制備工藝制得益母草空白樣品，按供試品溶液制備法操作，即得陰性對照品溶液。另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液及陰性對照品溶液各5～10 μL、對照品溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－鹽酸－乙酸乙酯(8∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液對鑒別無干擾(圖1 D)。

澤瀉:取本品10粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例取缺澤瀉的藥材，依照制備工藝制得澤瀉空白樣品，按供試品溶液制備法操作，即得陰性對照品溶液。另取澤瀉對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液及陰性對照品溶液各5～10 μL、對照藥材溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯(5∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯一個相同顏色的主斑點，陰性對照品溶液對鑒別無干擾(圖1 E)。

圖1 薄層色譜鑒別圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);檢測波長:318 nm;流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(13∶87);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;理論板數(shù)以阿魏酸峰計算不低于5000[1－3]。

2.2.2 溶液制備

取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含6μg的溶液，作為對照品溶液。取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率40 KHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另按處方比例取缺當(dāng)歸的藥材，依照制備工藝制得陰性樣品，按供試品溶液制備法操作，即得陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:取2.2.2項下3種溶液，按擬訂的色譜條件進樣測定，色譜圖見圖2。陰性對照品溶液對測定無干擾。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，注入高效液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)、進樣量為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為 Y=5.77560903 X+2.4960183(r=0.9999)。結(jié)果表明阿魏酸進樣量在 25.15 ～201.2 ng范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進樣測定。結(jié)果峰面積的 RSD為0.16%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:吸取同一供試品溶液，分別于 0，2，6，12，24 h時進樣，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.87%，表明24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品，分別取高、中、低3個樣品量，每個樣品量3份，按供試品溶液的制備方法制備，測定。結(jié)果含量(mg/g)平均值為0.3128，RSD為2.18%(n=9)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:將阿魏酸按高、中、低3個量級加入，同一量級平行操作2份，按供試品溶液的制備方法處理后，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗測定結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

按上述色譜條件，依法測定3批樣品中阿魏酸的含量。結(jié)果批號分別為090901，090902，090903的樣品中阿魏酸含量分別為0.2393，0.1901，0.2485 mg/g。

3 討論

該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別部分，操作簡單，結(jié)果斑點清晰，分離度好，專屬性強。當(dāng)歸為方中的君藥，故以阿魏酸作為含量測定指標(biāo)，結(jié)果樣品處理方法簡便，精密度、重現(xiàn)性好，可以有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:124.

[2]董曉燁，尹 華，周愛珍.RP－HPLC法測定骨健口服液中阿魏酸的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8(1):59－62.

[3]蘭作平，覃樹勇，吳朝荔，等.高效液相色譜法測定婦月康膠囊中阿魏酸的含量[J].中國藥業(yè)，2008，17(15):40－41.