一種金標(biāo)法檢測(cè)人絨毛膜促性腺激素的線性范圍評(píng)價(jià)

劉 非， 楊紅玲， 郭彩嬌， 梁綺華

(廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心珠江新城院區(qū)檢驗(yàn)科， 廣東 廣州 510623)

人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)是胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成的糖蛋白激素，由α和β亞基組成，因β亞基羧基端最后的24個(gè)氨基酸為該亞基所特有，故臨床上通過(guò)檢測(cè)β－HCG來(lái)反映血清中HCG的水平［1］。由于β－HCG個(gè)體間差異很大，臨床上多通過(guò)動(dòng)態(tài)檢測(cè)血清β－HCG水平對(duì)生理妊娠和病理妊娠進(jìn)行診斷、監(jiān)測(cè)或治療，但多次采血限制了β－HCG臨床應(yīng)用。有研究指出，晨尿β－HCG濃度略低于血清，且呈平行關(guān)系［2，3］。尿液 β－HCG檢測(cè)可能有助于對(duì)同一患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)、無(wú)創(chuàng)的監(jiān)測(cè)，便于臨床醫(yī)師及時(shí)對(duì)患者做出臨床判斷，及時(shí)干預(yù)。我院引進(jìn)了U2/HCG－DOT金標(biāo)定量檢測(cè)儀，儀器標(biāo)示其定量尿液 β－HCG具有較寬的線性范圍(25mIU/mL－15000mIU/mL)，為確保臨床應(yīng)用的可靠性，對(duì)其線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本實(shí)驗(yàn)所用到的標(biāo)本均來(lái)自于廣州市婦女兒童醫(yī)療中心珠江新城院區(qū)患者新鮮晨尿標(biāo)本，－20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器和試劑：U2/HCG－DOT金標(biāo)定量檢測(cè)儀(奧普生物)，與其配套的人絨毛膜促性腺激素(HCG)金標(biāo)斑點(diǎn)法快速定量檢測(cè)試劑盒(HCG－DOT)。

1.3 方法：采用改良 Doumas方法［4］，根據(jù)儀器標(biāo)示的線性范圍(25mIU/mL－15000mIU/mL)，以及儀器說(shuō)明中“樣本中β－HCG含量大于100mIU/mL和小于100mIU/mL所用的標(biāo)準(zhǔn)曲線不同”，進(jìn)行兩次獨(dú)立的線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)。第一次評(píng)價(jià)的線性范圍為100mIU/mL－15000mIU/mL，選擇一個(gè)尿β－HCG定性為弱陽(yáng)性的低值樣本(L1)，和一個(gè)尿β－HCG定量在15000－20000mIU/mL的之間的高值樣本(H1)進(jìn)行試驗(yàn)。將高、低值兩個(gè)樣本按等間距混合(L1、5L1+1H1、4L1+2H1、3L1+3H1、2L1+4H1、1L1+5H1、H1)［5］，形成 7個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定4次，記錄分析結(jié)果，進(jìn)行離群值檢驗(yàn)后，使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行線性回歸分析［5］。第二次評(píng)價(jià)的線性范圍為 25mIU/mL－100mIU/mL，選擇一個(gè)尿β－HCG定性為陰性的低值樣本(L2)和一個(gè)尿β－HCG定量在100－200mIU/mL的之間的高值樣本進(jìn)行試驗(yàn)(H2)。將高、低值兩個(gè)樣本按等間距混合(L2、4L2+1H2、3L2+2H2、2L2+3H2、1L2+4H2、H2)，形成6個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定4次，記錄分析結(jié)果。進(jìn)行離群值檢驗(yàn)后，使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 第一次線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)，L1=80 mIU/mL，H1=17456 mIU/mL;結(jié)果如表1。

表1 第一次線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)

每個(gè)濃度水平進(jìn)行4次重復(fù)測(cè)定，求得CV%，均滿足不精密度可接受范圍(＜7%)，以預(yù)期值為橫坐標(biāo)，檢測(cè)均值為縱坐標(biāo)作散點(diǎn)圖，并進(jìn)行線性回歸分析(圖1)，r2=0.9929 ＞0.95，b=0.9525，不在 0.97－1.03之間，觀察趨勢(shì)線發(fā)現(xiàn)，最高濃度點(diǎn)明顯偏離趨勢(shì)線，剔除后，重新進(jìn)行回歸分析(圖2)。r2=0.9995＞0.95;b=1.0242 在 0.97－ 1.03 之間;a=42.649，作 a與0 差異的 t檢驗(yàn)：ta=0.473，＜ta0.05，10=2.228。說(shuō)明a與0在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異。結(jié)論：方法在80－13228 mIU/mL濃度范圍內(nèi)成線性。

2.2 第二次線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)，L2=5.25 mIU/mL，H2=186 mIU/mL結(jié)果如表2。

因U2/HCG－DOT金標(biāo)法檢測(cè)尿β－HCG時(shí)，靈敏度不及化學(xué)發(fā)光，當(dāng)樣本中β－HCG含量小于25mIU/mL時(shí)，不能報(bào)告具體濃度，僅報(bào)告為小于25mIU/mL，所以第一點(diǎn)不能進(jìn)行評(píng)價(jià)，剔除第一點(diǎn)后以預(yù)期值為橫坐標(biāo)，檢測(cè)均值為縱坐標(biāo)做散點(diǎn)圖，并進(jìn)行線性回歸分析(圖3)r2=0.9979 ＞ 0.95，b=1.029，在 0.97－1.03之間，a=4.7975，作 a與 0差異的 t檢驗(yàn)：ta=1.511，＜ta0.05，8=2.306，說(shuō)明 a 與 0 在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異。結(jié)論：方法在41－186 mIU/mL濃度范圍內(nèi)成線性。

表2 第二次線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)

3 討論

β－HCG水平檢測(cè)已經(jīng)成為監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)妊娠非常重要的指標(biāo)。臨床上通過(guò)檢測(cè)血清β－HCG水平可以對(duì)生理妊娠和病理妊娠進(jìn)行診斷和監(jiān)測(cè)，提示妊娠是否正常，預(yù)測(cè)先兆流產(chǎn)和評(píng)價(jià)保胎效果;可以判斷產(chǎn)后和人工流產(chǎn)后有無(wú)胎盤(pán)殘留;可以對(duì)IVF妊娠進(jìn)行評(píng)價(jià);可以用于異位妊娠的早期診斷和治療手段選擇及療效評(píng)價(jià)，還可以用于滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的診斷和療效評(píng)價(jià)［6］。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室通常采用化學(xué)發(fā)光法對(duì)血清β－HCG進(jìn)行定量檢測(cè)，其具有精密度好，靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。但是，需要購(gòu)買(mǎi)昂貴的化學(xué)發(fā)光分析儀和試劑，檢測(cè)成本高，加重患者負(fù)擔(dān)。

U2/HCG－DOT金標(biāo)定量檢測(cè)儀使用金標(biāo)斑點(diǎn)法快速定量檢測(cè)試劑盒(HCG－DOT)，利用固相夾心免疫法，形成固相抗α－HCG單克隆抗體 －樣本β－HCG－標(biāo)記的β－HCG單克隆抗體的復(fù)合物，呈紅色斑點(diǎn)，將斑點(diǎn)紅色強(qiáng)度與儀器內(nèi)存標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中β－HCG的快速定量。其具有操作簡(jiǎn)單，可單個(gè)樣本獨(dú)立檢驗(yàn)，隨到隨測(cè)，檢測(cè)時(shí)間短，能在3－5min完成對(duì)血清和尿β－HCG的定量，儀器試劑成本低，適合床邊檢驗(yàn)(POCT)等優(yōu)點(diǎn)。

U2/HCG－DOT金標(biāo)法定量尿β－HCG可以實(shí)現(xiàn)對(duì)妊娠進(jìn)行連續(xù)、高效、無(wú)創(chuàng)的評(píng)價(jià)，在臨床應(yīng)用時(shí)，其檢測(cè)性能成為值得關(guān)注也必須評(píng)價(jià)的方面。儀器標(biāo)示的定量范圍為25－15000mIU/mL，當(dāng)樣本中β－HCG濃度小于100時(shí)無(wú)法讀出，顯示為“＜100 mIU HCG/mL”，此時(shí)可用肉眼判斷，凡反應(yīng)板無(wú)肉眼可見(jiàn)紅色斑點(diǎn)，報(bào)告為“＜25mIU/mL”;凡有顯色斑點(diǎn)，改變標(biāo)準(zhǔn)曲線，在大于25mIU/mL小于100mIU/mL范圍內(nèi)定量。據(jù)此，設(shè)計(jì)了兩次線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)，分別覆蓋高低兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線適用范圍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該方法在80－13228 mIU/mL和41－186 mIU/mL兩個(gè)試驗(yàn)濃度范圍成線性。這表明該方法具有較寬的線性范圍，基本能夠滿足產(chǎn)科β－HCG定量需要，當(dāng)遇到濃度超過(guò)13228mIU/mL的標(biāo)本時(shí)，需一定比例稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)后報(bào)告。

值得注意的是，U2/HCG－DOT金標(biāo)法定量檢測(cè)儀的標(biāo)準(zhǔn)曲線是存儲(chǔ)在儀器內(nèi)部的，而并非每一批號(hào)的配套試劑盒有自帶的標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)，如何能夠保證不同批號(hào)的試劑對(duì)相同的標(biāo)準(zhǔn)曲線均適用，這就需要在新舊批號(hào)試劑盒交替時(shí)，進(jìn)行不同批號(hào)試劑間的比對(duì)試驗(yàn)來(lái)確保檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

［1］樂(lè)杰.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.29－32.

［2］鴻麟，肖玢，金瑋.靜脈血β－人絨毛膜促性腺激素相關(guān)性的探討［J］.生殖醫(yī)學(xué)雜志，2006，(4)：268－269.

［3］Benjapibal M，Wataganara T，Senawong S，et al.The correlation of beta－subunit human chorionic gonadotropin level in the serum and first morning urine of patients with gestational trophoblastic disease［J］.Med Assoc Thai，2001，84(7)：1000－1005.

［4］馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007.66－136.

［5］王治國(guó).臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能難證［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.

［6］Cole LA.New discoveries on the bioloy and detection of human chorionic gonadotropin［J］.Reprod Biol Endocrinol，2009，26(7)：8.