湘玉竹HPLC指紋圖譜研究

劉 婷，鐘曉紅，周 舟

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長沙 410128）

玉竹（Polygonatum odoratum（Mill.）Druce），別名鈴鐺菜、尾參、地管子、甜草根，是百合科黃精屬多年生草本植物，藥材為干燥的根莖。玉竹為湖南省道地藥材，其中豬屎尾參應(yīng)用最廣，商品藥材稱為湘玉竹。玉竹的分布較廣，在黑龍江、吉林、遼寧、河北、山西、內(nèi)蒙古、甘肅、青海、山東、河南、湖北、湖南、安徽、江西、江蘇、臺灣等地均可生長[1-2]。玉竹含有氨基酸、微量元素、多糖、苷類、甾醇、揮發(fā)油等其他成分。玉竹的功能表現(xiàn)在養(yǎng)陰潤燥，除煩，止渴，可治熱病傷陰、咳嗽煩渴、虛勞發(fā)熱、消谷易饑等癥[3]。近年來藥理研究表明，除上述功效外，玉竹的甾醇提物能增強(qiáng)免疫力，煎劑有擴(kuò)張血管、抗急性心肌缺血、降壓、抗衰老、抗菌等作用，注射液有降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤的作用[4]。近年來有很多關(guān)于玉竹化學(xué)、藥理等方面的研究，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法[5-6]對玉竹的HPLC指紋圖譜進(jìn)行了研究，可為其鑒別、質(zhì)量評價以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 玉竹藥材，10批藥材均采自于湖南省的不同地方。

1.1.2 試劑與儀器 試劑：薯蕷皂苷對照品購自成都曼斯特生物科技有限公司，純度大于或等于98%；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀；DAD檢測器；R-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；AL104型電子分析天平。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Welchrom-C8（4.6×250 mm，5 μm）柱；流動相：乙腈（A）—0.2%磷酸水（B）；洗脫梯度：0.01～45 min，1%A～65%A，45～55 min，65%A～90%A，55～65 min，90%A～100%A；體積流量1.0 mL/min；柱溫25℃；檢測波長203 nm；運(yùn)行時間70 min。

1.2.2 供試品溶液的制備 取玉竹粉末2 g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇40 mL，超聲提取0.5 h，提取3次，過濾，濾液濃縮，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?10 mL。用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液，即得。

1.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) （1）精密度試驗(yàn)：分別精密吸取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20 μL，按上述方法色譜條件測定。計(jì)算各峰峰面積，如RSD值≤3%，表明該方法精密度良好。（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在 0，2，6，12，24 h 檢測，測得各共有峰相對保留時間和相對峰面積比值的RSD值≤3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。（3）重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批玉竹藥材，按1.2.2方法制備供試品溶液5份，分別進(jìn)樣，每次20 μL，按上述方法色譜條件測定。計(jì)算各峰峰面積，如RSD值≤3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2 結(jié)果與分析

2.1 指紋圖譜的建立[7-8]

精密吸取供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行檢測。同一試驗(yàn)條件下，測定10批玉竹供試品HPLC色譜圖，結(jié)果如圖1所示，在10批玉竹的指紋圖譜中含有9個共有峰，其中6號峰屬于皂苷，是特征峰。

圖1 10批湘玉竹的指紋圖譜

2.2 共有指紋峰的標(biāo)定

對各色譜峰的相對保留時間進(jìn)行了計(jì)算，結(jié)果如表1所示，10批玉竹藥材色譜峰相對保留時間穩(wěn)定，RSD為0.147%～1.786%，符合指紋圖譜RSD≤3%要求。

表1 指紋圖譜共有峰的相對保留時間比較

2.3 相似度的計(jì)算

將測定結(jié)果導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”（中國藥典委員會2004A版）進(jìn)行計(jì)算，得到10批玉竹藥材與對照指紋圖譜相似度的結(jié)果均大于0.9，表明各批次玉竹藥材之間具有良好的一致性。本方法可用于綜合評價藥材的整體質(zhì)量。

3 討論

（1）提取方法的確定：本試驗(yàn)中考察了2種提取方法，即超聲提取、回流提取，依法操作，超聲法提取方法提取的供試品溶液的特征峰較多，因此選用回流的方法。

（2）流動相的選擇：本試驗(yàn)曾用乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.2%磷酸水、乙腈-0.3%磷酸水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-0.2%磷酸水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫可以達(dá)到較好的分離效果。

（3）檢測波長的選擇：試驗(yàn)中考察了波長203、210、254、289、310 nm 下的色譜圖，綜合分析，選擇203 nm波長作為本指紋譜的測定波長。

（4）相似度的評價：本試驗(yàn)將10批玉竹藥材的指紋圖譜導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相識度評價系統(tǒng)2004A版”軟件，結(jié)果表明10批玉竹藥材的色譜圖相似度均大于0.9，相似度較好。該試驗(yàn)用了10批藥材，保證了試驗(yàn)方法具有代表性，可通過本方法制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜來控制玉竹藥材質(zhì)量。

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