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    模擬條件下膠質(zhì)芽孢桿菌對含鉀礦物分解效果的研究

    2011-07-09 13:00:22吳迎奔賀月林尹紅梅
    湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2011年13期
    關(guān)鍵詞:含鉀鉀長石云母

    吳迎奔,賀月林,曾 艷,尹紅梅,靳 磊,陳 薇

    (湖南省微生物研究所,湖南 長沙 410009)

    鉀是植物生長過程中的主要營養(yǎng)元素之一,對農(nóng)作物的生長起重要作用。由于我國可利用的鉀資源較少,鉀肥產(chǎn)量不足,致使大面積耕地普遍缺鉀。然而,我國鉀長石資源非常豐富,廣泛分布于云南、貴州、四川、湖南、湖北等19個省區(qū)[1]。因此,從鉀長石中提鉀一直受到我國重視?;瘜W(xué)法研究已有很多報道[2-4],但皆因成本、環(huán)保等原因一直未能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。膠質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)俗稱硅酸鹽細(xì)菌[5],是土壤中一種重要功能菌,它能分解長石、云母等鋁硅酸鹽類的原生態(tài)礦物,使土壤中絡(luò)合性鉀、難溶性硅等轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄怨┲参锷L利用[6],同時還可以產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)促進(jìn)植物生長[7]。大量試驗(yàn)表明以膠質(zhì)芽孢桿菌為主要成份的生物鉀肥在缺鉀土壤上對各種農(nóng)作物表現(xiàn)出較好的增產(chǎn)效果[8-10]。膠質(zhì)芽孢桿菌解鉀、硅作用是受多種因素制約的,使其功能發(fā)揮的前提條件是要篩選出優(yōu)良的菌株。紐旭光等[11-13]研究發(fā)現(xiàn)不同的菌株解鉀能力存在較大差異;已有的研究表明膠質(zhì)芽孢桿菌在搖瓶條件下表現(xiàn)出較強(qiáng)的分解硅酸鹽礦物的能力[14-15]。要使生物鉀肥充分發(fā)揮高效、穩(wěn)定的解鉀功能,必須研究模擬自然環(huán)境中菌株的解鉀性能。為此,在靜置條件下,模擬自然界客觀存在的干燥、濕潤和淹水條件來研究膠質(zhì)芽孢桿菌對含鉀礦物的分解作用,以期為硅酸鹽菌劑的科學(xué)應(yīng)用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試菌株:膠質(zhì)芽孢桿菌,由湖南省微生物研究所分離篩選。供試礦物:鉀長石(K 100 g/kg,SiO2591 g/kg)和云母(K 118 g/kg,SiO2452 g/kg),經(jīng)研磨成粉狀,過100目篩,用去離子水洗去水溶性鉀、硅等離子,陰干,備用。培養(yǎng)基:菌株培養(yǎng)、計數(shù)與解鉀試驗(yàn)所用培養(yǎng)基配方[10-11]。鉀源培養(yǎng)基組成為:葡萄糖 10 g/L、Na2HPO40.2 g/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、NaCl 0.2 g/L、CaSO4·2H2O 0.2 g/L、CaCO30.1 g/L、鉀源粉(鉀長石或云母)10 g/L,pH 值 7.0~ 7.2,蒸餾水1 000 mL。

    1.2 方法

    1.2.1 膠質(zhì)芽孢桿菌對鉀礦物的分解作用 在100 mL三角瓶中加入10 g鉀礦物(鉀長石或云母)和2 g石英砂的混合物。模擬3種自然界的干燥、濕潤和淹水條件,干燥、濕潤和淹水3種條件下加入的缺K培養(yǎng)基分別為0、10和30 mL,使鉀礦物與石英砂混合物的含水量分別為0、420.6 g/kg和1240 g/kg。考慮到靜止培養(yǎng)期間水分揮發(fā),在培養(yǎng)期間內(nèi)不時地加入無菌水以維持每個處理原來所模擬的3種自然界的環(huán)境條件。接種量為每瓶接2 mL菌懸液(菌懸液用無菌生理鹽水洗去培養(yǎng)基,用無菌水稀釋成1×108cfu/mL菌懸液用于接種),同時設(shè)不接菌作為CK組,試驗(yàn)設(shè)3個重復(fù),30℃靜止培養(yǎng),培養(yǎng) 0、10、20、30 d 取樣分析。

    1.2.2 測試方法 對于干燥和濕潤處理的樣品,一部分采用l mol/L中性草酸—草酸銨溶液提取,硅鉬藍(lán)比色法測定發(fā)酵液中硅的含量。另一部分參照采用火焰光度法測定發(fā)酵液中的鉀含量[16];對于淹水處理的樣品,一部分用于培養(yǎng)液中草酸的測定,草酸的測定方法見文獻(xiàn)[17]。另一部分先進(jìn)行真空濃縮,再用上述同樣方法測定鉀含量。樣品在處理前測pH值,以及采用平板計數(shù)法測定活菌數(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 環(huán)境條件對膠質(zhì)芽孢桿菌釋鉀作用的影響

    干燥條件下,由于膠質(zhì)芽孢桿菌不能正常生長,幾乎不能分解含鉀礦物并釋放其中的鉀元素;而濕潤和淹水的環(huán)境條件有利于供試菌株對鉀礦物的分解作用,且濕潤和淹水條件對供試菌株的解鉀作用無顯著差異(表1)。由于鉀長石是一種含鉀的原生礦物,較易分解,云母是一種含鉀的造巖礦物,較難分解,膠質(zhì)芽孢桿菌菌株對鉀長石的分解效果均好于對云母的分解效果。例如濕潤條件下,28℃恒溫靜置培養(yǎng)30 d后,膠質(zhì)芽孢桿菌從礦物中釋放的鉀比CK分別增加14.35 mg/L(云母)和16.14 mg/L(鉀長石),其增加比例分別達(dá)219%(云母)和226%(鉀長石)。

    表1 不同條件對膠質(zhì)芽孢桿菌釋K作用的影響(mg/L)

    從表2中可以看出,膠質(zhì)芽孢桿菌接入含鉀礦物的培養(yǎng)基中,在0~10 d內(nèi),細(xì)胞數(shù)量均逐漸增加,培養(yǎng)l0~20 d,細(xì)胞數(shù)量維持穩(wěn)定,20 d后細(xì)胞數(shù)量開始下降;隨著培養(yǎng)時間延長,培養(yǎng)液中的pH值也隨之下降。試驗(yàn)證明,供試菌株在濕潤或淹水環(huán)境中通過本身的代謝活動來分解含鉀礦物并釋放出其中的K元素。

    表2 濕潤條件對膠質(zhì)芽孢桿菌代謝活性的影響

    2.2 環(huán)境條件對膠質(zhì)芽孢桿菌釋硅作用的影響

    膠質(zhì)芽孢桿菌分解含鉀礦物釋放Si的作用與釋鉀作用相似(表3))。膠質(zhì)芽孢桿菌從礦物中釋放的硅比CK分別增加7.28 mg/L(鉀長石)和 7.70 mg/L(云母),其增加比例分別達(dá)169%和153%。但是云母釋放總量稍高于鉀長石。研究表明,草酸對硅有很強(qiáng)的絡(luò)合能力,膠質(zhì)芽孢桿菌有較強(qiáng)的釋硅作用與其代謝過程中產(chǎn)生較多的草酸有關(guān)。圖1表明,培養(yǎng)10 d,膠質(zhì)芽孢桿菌培養(yǎng)液中草酸含量比對照培養(yǎng)液中的分別增加107.5 mg/L(鉀長石)和110.8 mg/L(云母)。膠質(zhì)芽孢桿菌是兼性好氧菌,因此在濕潤或淹水條件下都可以很好地促進(jìn)鉀長石與云母的釋鉀和解硅作用。對于膠質(zhì)芽孢桿菌分解含鉀礦物機(jī)理的研究已有一些報道[11]。研究表明,膠質(zhì)芽孢桿菌可以通過酸解和絡(luò)合作用來分解含鉀礦物并釋放出其中的鉀、硅元素。

    表3 不同條件對膠質(zhì)芽孢桿菌釋Si作用的影響 (mg/L)

    圖1 不同條件對膠質(zhì)芽孢桿菌產(chǎn)生草酸的影響

    3 結(jié)論

    在干燥的條件下,膠質(zhì)芽孢桿菌不能進(jìn)行正常的生長、代謝,不能分解含鉀礦物釋放出鉀和硅元素。在淹水或濕潤的環(huán)境條件下膠質(zhì)芽孢桿菌能正常地生長、代謝,從而分解含鉀礦物并釋放出其中的鉀和硅元素。濕潤條件下,28℃恒溫靜置培養(yǎng)10 d,膠質(zhì)芽孢桿菌釋放出的鉀比CK增加226%,釋放的硅比CK增加148%。膠質(zhì)芽孢桿菌通過酸解和絡(luò)合溶解作用來分解含鉀礦物。因此膠質(zhì)芽孢桿菌在環(huán)境條件適宜的情況下,對土壤中含鉀巖石礦物的溶解起著重要的作用。

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