黃芪注射液預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注后神經(jīng)功能評(píng)分的影響

王淑賢,原德新

(1.佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組胚教研室,黑龍江 佳木斯 154007)

腦卒中分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中,其中以缺血性腦卒中占 80%左右[1]。當(dāng)今社會(huì)缺血性腦卒中是威脅人類(lèi)健康的主要疾病之一,我國(guó)為腦卒中高發(fā)國(guó)家,2009年我國(guó)缺血性腦卒中發(fā)生者達(dá) 160萬(wàn)人,在生存者中,75%留有不同程度的殘疾,給社會(huì)、家庭和個(gè)人帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和巨大的精神壓力。缺血性腦卒中的發(fā)病率逐年呈上升的趨勢(shì),發(fā)病的年齡越來(lái)越趨向于年輕化,逐漸威脅中老年人群的健康問(wèn)題。黃芪注射液是從黃芪中提取的有效成分精制而成的,其主要成分有:黃酮類(lèi)、多糖、氨基酸、黃芪皂苷、微量元素等物質(zhì),在體內(nèi)能清除氧自由基,抗氧化損傷及促進(jìn)Na+-K+-ATP酶活性等作用,對(duì)腦缺血再灌注后腦損傷有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型,探討黃芪注射液預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注后的神經(jīng)功能評(píng)分的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

動(dòng)物:雄性 Wistar大鼠,體重 (250±30)g,佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。藥物:黃芪注射液由上海福達(dá)制藥有限公司生產(chǎn);水合氯醛購(gòu)自北京鼎國(guó)生物公司。儀器:眼科手術(shù)剪;眼科手術(shù)鑷等。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組和給藥:實(shí)驗(yàn)前自行飼養(yǎng) 7d,隨機(jī)分為 3組,分別為:正常對(duì)照組(即 A組 ,10只);假手術(shù)組(即 B組,10只,僅分離血管 ),腦缺血再灌注組 (即 C組,10只 )、黃芪注射液預(yù)處理組 (即 D組,10只)。 C組與 D組術(shù)前 7天開(kāi)始用黃芪注射液 4.5g/kg腹腔注射,每日一次,共 7次。A組與B組用等量的生理鹽水腹腔注射。C組與 D組大鼠于腦缺血2h再灌注 24h后取材。

1.2.2 模型的建立:采用改良的 Longa[2]模型建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血 /再灌注線栓法模型,大鼠用 10%水合氯醛(0.35mL/100g)腹腔注射麻醉后,頸正中剪開(kāi),分離出左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈并結(jié)扎頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈,用動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈,用眼科剪將頸總動(dòng)脈距離分叉2mm處剪一小口,選擇合適的魚(yú)線型號(hào),插入魚(yú)線,深度18mm左右,稍遇到阻力后 ,結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈 ,縫合(留一部分魚(yú)線在皮膚外易于拔線)。假手術(shù)組僅分離出頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈 ,不結(jié)扎血管。C組和 D組于缺血 2h將魚(yú)線退至頸內(nèi)動(dòng)脈與頸總動(dòng)脈分叉處,再灌注 24h后取材。參照Z(yǔ)ea-longa的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分:1～ 3分者入組 ,死亡和不合格的動(dòng)物隨機(jī)替補(bǔ)。

1.2.3 神經(jīng)功能評(píng)分:參照 Zea-longa的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分:0分,無(wú)神經(jīng)缺損體征;1分,不能充分屈曲右側(cè)前爪;2分,向右側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分,向右側(cè)傾倒;4分,不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。各組大鼠于拔線后 2h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)均用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì),各組計(jì)量數(shù)據(jù)以± s表示。 各組數(shù)據(jù)的顯著性比較 ,采用 studen’tt檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析。以 P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

黃芪注射液預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注后神經(jīng)功能評(píng)分的影響:正常對(duì)照組和假手術(shù)組均未出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙,腦缺血再灌注組和黃芪注射液預(yù)處理組均有神經(jīng)功能障礙;與腦缺血再灌注組相比,黃芪注射液預(yù)處理組可以明顯降低腦缺血 2h再灌注 24h的神經(jīng)功能評(píng)分,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＜0.01),結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芪注射液預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注后大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響(±s,n=10)

表1 黃芪注射液預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注后大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響(±s,n=10)

◆P ＜ 0.01,vs A組和 B組;★P ＜ 0.01,vs C組。

3 討論

大腦中動(dòng)脈栓塞模型被普遍認(rèn)為是局灶性腦缺血的標(biāo)準(zhǔn)模型[3～6],理由是:大鼠的腦血管也有 Wllis環(huán),解剖結(jié)構(gòu)與人類(lèi)較接近;血管損傷部位較恒定、重復(fù)性好;可行性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單;費(fèi)用低;大鼠飼養(yǎng)管理方便、體重小;大鼠腦體積小易于固定和免疫組織化學(xué)分析;純種鼠近親交配,品種相對(duì)一致等方面[7]。腦缺血再灌注損傷可以引起神經(jīng)功能障礙,主要表現(xiàn)有:對(duì)側(cè)肢體無(wú)力,出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)及感覺(jué)障礙,尤其以運(yùn)動(dòng)障礙最為明顯[8]。參照再 Zea-Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),對(duì)栓塞大腦中動(dòng)脈的大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,結(jié)果顯示:黃芪注射液預(yù)處理組能明顯降低大鼠腦缺血 2h再灌注 24h的神經(jīng)功能評(píng)分,改善神經(jīng)功能。本實(shí)驗(yàn)為臨床上使用黃芪注射液來(lái)減少神經(jīng)元損傷促進(jìn)其功能恢復(fù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

[1] 楊彬源.促紅細(xì)胞生成素在腦缺血再灌注損傷中對(duì)神經(jīng)元線粒體的影響及作用機(jī)制的研究 [D].廣州:廣州醫(yī)學(xué)院,2009

[2] Longa EZ,Weinstei PR,Carlson S,et al.Reversiber middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91

[3] 陶宗玉,李方成.大鼠局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷难芯窟M(jìn)展 [J].中國(guó)微侵襲神經(jīng)外科雜志,2004,9(8):377-379

[4] 吳松笛,耿曉英.改良線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注模型的實(shí)驗(yàn)研究 [J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2006,35(10):1316-1318

[5] 張秋玲,孫遠(yuǎn)標(biāo),李金國(guó),等.局灶性腦缺血及鬧缺血再灌注模型的制作 [J].中國(guó)臨床康復(fù),2006,38(10):106-109

[6] 劉昌云,林毅,許國(guó)英,等.大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞局灶腦缺血再灌注改良模型的建立 [J].福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,37(4):372-376

[7] 陳春富,郭述蘇.鼠局灶性腦缺血模型研究進(jìn)展 [J].前衛(wèi)醫(yī)藥雜志,1995,12(2):120-122

[8] Bickler PE.Clinical persoectives:neuroprotection lessons from hypoxia-tolerant organism[J].Exp Biol,2004,207(12):3243-3249