在復(fù)合肥劑作用下心肌超微結(jié)構(gòu)改變

陶佳南,侯麗然,于翔輝,韓玉澤

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心,黑龍江 佳木斯 154007)

本文是《復(fù)合肥劑對大鼠各器官細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響》系列實(shí)驗(yàn)工作之一,著重探究在復(fù)合肥劑作用下大鼠心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生怎樣改變。

1 材料

1.1 動物

健康成年 Wistar大鼠,體重(211±4.2)g;試劑:環(huán)氧樹脂包埋劑(SP1-CHEM)為美國公司(Structure Probe.Inc.)試產(chǎn);鋨酸(四氧化鋨)為英國公司 (Johnson Matthey Chemicals Ltd.)生產(chǎn);復(fù)合肥為市售,隨機(jī)采購。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動物

將大鼠隨機(jī)分為4組,每個實(shí)驗(yàn)組10只,1組為對照組 ,另3組為實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)周期分別設(shè)為 8月組 ,12月組,16月組。實(shí)驗(yàn)組大鼠用復(fù)合肥劑(20%,二次蒸餾水配制,配制后高壓劑滅菌),經(jīng)口腔灌胃1mL,每周2次。對照組實(shí)驗(yàn)動物為6只 ,蒸餾水灌胃1mL。對照組及實(shí)驗(yàn)組動物常規(guī)飼養(yǎng)。

2.2 組織取材

對照組及各實(shí)驗(yàn)組動物實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束后將動物處死,重點(diǎn)取左心室組織。戊二醛固定液(3%,pH7.2)固定,鋨酸固定液(1%,pH7.2,磷酸緩沖液配制)固定,丙酮梯度脫水,812環(huán)氧樹脂包埋,電子染色,超薄切片機(jī)(國產(chǎn) KCQ-2型)切片,透射電子顯微鏡(JEO-1200EX)觀察分析,拍照。

3 結(jié)果

對照組:心肌及心肌胞核超微結(jié)構(gòu)未出現(xiàn)明顯異常改變(圖片略)。實(shí)驗(yàn)組:8月組和 12月組動物心肌超微結(jié)構(gòu)未出現(xiàn)陽性結(jié)果;16月組實(shí)驗(yàn)動物組,共性形態(tài)學(xué)現(xiàn)象是,大鼠心肌束排列整齊、緊密 ,心肌外膜光滑,潤盤清晰,高倍下心肌細(xì)絲清晰可見;心肌細(xì)胞纖長,細(xì)胞核常染色質(zhì)異染色質(zhì)正常分布,心肌線粒體依次排列,呈近似橢圓型,線粒體脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)清晰,脊結(jié)構(gòu)清晰(見圖1～ 3)。

圖1 心肌排列緊密,×8000

圖2 心肌排列緊密,心肌外膜光滑,細(xì)胞染色質(zhì)正常分布,×10000

圖3 潤盤、心肌細(xì)絲清晰可見,線粒體排列有序,結(jié)構(gòu)清晰,×20000

長期(16個月 )喂食復(fù)合肥劑 (20%,1mL)對大鼠心肌、心肌細(xì)胞核超微結(jié)構(gòu)沒有損傷效應(yīng)。據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論,復(fù)合肥劑大鼠心肌沒有損傷效應(yīng)。

4 討論

本文是《復(fù)合肥劑對大鼠各器官的影響》系列實(shí)驗(yàn)工作之一,著重探討復(fù)合肥劑(20%,1mL)對大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的影響,進(jìn)而推斷對大鼠心臟功能的影響。在本實(shí)驗(yàn)工作中,處死動物后首先進(jìn)行大鼠心臟器官水平檢查,心臟外形未增大(動物組間比較),心室心房內(nèi)膜及瓣膜表面光滑,室壁未見增厚,光鏡下形態(tài)學(xué)未見特異性改變(圖片略);電鏡下(TEM)心肌超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)具有一定共性,心肌束排列整齊、緊密,心肌外膜光滑,潤盤清晰,高倍下心肌細(xì)絲清晰可見;心肌細(xì)胞纖長,細(xì)胞核常染色質(zhì)異染色質(zhì)正常分布,心肌線粒體依次排列,呈近似橢圓型,線粒體脂質(zhì)雙層膜清晰 ,脊結(jié)構(gòu)清晰。這些現(xiàn)象說明實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌形態(tài)結(jié)構(gòu)呈正常狀態(tài)。個別大鼠 (8月組2只,12月組1只,16月 1只)心肌細(xì)胞核出現(xiàn)染色質(zhì)邊集,呈團(tuán)塊狀,呈電子高密度,線粒體變大變圓,呈空泡狀,線粒體脊消失,這些現(xiàn)象在電鏡下偶有見到 ,出現(xiàn)在同一實(shí)驗(yàn)材料同一張切片不同區(qū)域中,故此我們認(rèn)為這沒有代表性,不作為陽性結(jié)果。3個實(shí)驗(yàn)組動物在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)從體征看,初期進(jìn)食不好,兩個月后進(jìn)食逐漸改善,行動靈活,沒有發(fā)熱現(xiàn)象,但腹瀉現(xiàn)象常見。本文僅展示了 16月組實(shí)驗(yàn)動物心肌超微結(jié)構(gòu)圖片,因?yàn)榘搭A(yù)定計(jì)劃最有可能出現(xiàn)陽性結(jié)果實(shí)驗(yàn)組應(yīng)該在16月組。從已做過的實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn),復(fù)合肥劑對大鼠生殖細(xì)胞,肝細(xì)胞,胸腺脾臟細(xì)胞造成的損傷均在亞細(xì)胞級[1～3],我們稱之為“微損傷”級別,尤其對肝細(xì)胞影響較突出[2]。由此我們推斷,復(fù)合肥劑對“化學(xué)處理”功能強(qiáng)的器官造成損傷較明顯,對肌纖維影響較小甚至沒有。至于個別實(shí)驗(yàn)動物出現(xiàn)的心肌超微結(jié)構(gòu)改變現(xiàn)象我們很難認(rèn)為是施加實(shí)驗(yàn)條件所致。越來越多的證據(jù)表明,復(fù)合肥劑對大鼠各器官造成的損傷有一定的“選擇性”。

[1] 韓玉澤,陶佳南,候麗然,等.復(fù)合肥生殖細(xì)胞—次級精母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響對雄性大鼠 [J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2008,31(2):21-22

[2] 韓玉澤,陶佳南,候麗然,等.復(fù)合肥對大鼠肝臟細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響 [J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2010,33(5):94-95

[3] 陶佳南,韓玉澤,于翔輝,等.胸腺脾臟在復(fù)合肥作用下超微結(jié)構(gòu)改變 [J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2011,34(2):32-33