青藤堿干預(yù)多柔比星腎病大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

王麗敏,王麗娜,李春玉,鄒艷紅,王海燕

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科,黑龍江 佳木斯 154003)

MCNS是小兒腎病綜合征最常見的類型,其病因與發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確。IL-6是參與炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子之一[1]?，F(xiàn)有資料已證實(shí),腎臟系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞均能分泌 IL-6,IL-6可以通過旁分泌和自分泌兩種形式與腎小球系膜細(xì)胞上的 IL-6受體結(jié)合,促進(jìn)腎臟系膜細(xì)胞增多和基質(zhì)增生,進(jìn)而使腎小球?yàn)V過膜增厚[2],最終導(dǎo)致腎小球硬化[3]。作為一種免疫抑制劑 SIN主要用于治療風(fēng)濕性疾病,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道 SIN亦有減少蛋白尿,降低血中循環(huán)免疫復(fù)合物,減輕腎小球炎癥反應(yīng)等腎臟保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過制備大鼠多柔比星腎病模型來模擬人類 MCNS,檢測 IL-6在 MCNS大鼠中的異常表達(dá)情況及SIN對其的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組

雄性 Wistar大鼠 120只 ,清 潔級(jí) ,體重 90～ 120g,由 佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。隨機(jī)分為正常組32只、腎病組88只。根據(jù)王崢等[4]的方法給予腎病組單次尾靜脈注射多柔比星5mg/kg,制備大鼠多柔比星腎病模型.正常組給予注射等量生理鹽水。4只不合格者剔除。將模型成功的腎病大鼠隨機(jī)分成兩組:腎病對照組 44只、治療組 40只。治療組給予SIN36mg/kg.d灌胃,腎病對照組及正常組給予等量生理鹽水灌胃 ,實(shí)驗(yàn)第 7d開始給藥,共 5w。實(shí)驗(yàn)第 7、14、28、42天檢測各組大鼠24 h尿蛋白定量,同時(shí)采用 ELISA法檢測各組大鼠尿及腎組織中 IL-6水平。

1.2 方法

1.2.124 h尿蛋白測定:采用考馬斯亮藍(lán)法檢測24h尿蛋白定量。

1.2.2 尿 IL-6水平測定:于實(shí)驗(yàn)第 7、14、28、42天收集各組大鼠晨尿,2000r/min離心15min,取上清液2mL,均置于-20℃冰箱保存待檢。

1.2.3 腎組織中 IL-6檢測:于實(shí)驗(yàn)第 7、 14、 28、 42天分批處死大鼠,剖腹取腎,將腎組織勻漿后 2000r/min離心 15min,取上清液 2mL,均置于-20℃冰箱保存。IL-6檢測均采用ELISA法。試劑盒購于武漢博士德生物公司,結(jié)果以 pg/mL表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠24h尿蛋白定量比較

見表1。

表1 各組大鼠不同時(shí)期尿蛋白定量比較 ±s,mg/24h)

表1 各組大鼠不同時(shí)期尿蛋白定量比較 ±s,mg/24h)

*與正常組比較 P＜0.01;△與腎病組比較 P＜0.01。

正常組 86.31± 1.296.14± 1.236.25± 1.226.53± 1.15腎病組 1142.11± 5.11* 121.79± 8.29* 202.76± 12.14* 265.61± 17.74*治療組 1041.33± 5.3097.33± 6.84△ 162.66± 10.80△ 111.87± 9.91△F值 179.99 792.30 979.12 1042.43

2.2 各組大鼠不同時(shí)期尿液中 IL-6水平比較

見表2。

表2 各組大鼠不同時(shí)期尿 IL-6水平比較 ±s,pg/mL)

表2 各組大鼠不同時(shí)期尿 IL-6水平比較 ±s,pg/mL)

*與正常組比較 P＜0.01;△與腎病組比較 P＜0.01。

正常組 811.37± 1.9811.76± 1.8312.02± 2.2111.63± 1.83腎病組 1121.29± 4.42* 27.72± 5.11* 37.28± 4.51* 48.55± 4.41*治療組 1020.73± 3.7222.29±3.97△ 28.97± 4.71△ 25.69±3.92△F值 20.27 36.27 88.77 243.56

2.3 各組大鼠不同時(shí)期腎組織中 IL-6水平比較

見表3。

表3 各組大鼠不同時(shí)期腎組織中 IL-6水平比較 ±s,pg/mL)

表3 各組大鼠不同時(shí)期腎組織中 IL-6水平比較 ±s,pg/mL)

*與正常組比較 P＜0.01;△與腎病組比較 P＜0.01。

正常組 889.67± 9.8088.81± 9.9390.51± 8.6789.64± 9.47腎病組 11124.86± 9.87* 186.41± 13.98* 233.79± 15.21* 292.72± 17.04*治療組 10124.82± 9.06144.13± 10.31△ 185.27± 11.05△ 154.75± 9.04△F值 39.04 159.35 316.88 636.97

2.4 相關(guān)分析

腎病組24h尿蛋白定量與尿液中 IL-6的表達(dá)水平呈正相關(guān) (R=0.794,P＜0.01)。24h尿蛋白定量與腎組織中 IL-6的表達(dá)水平呈正相關(guān) (R= 0.870,P ＜0.01)。腎組織中IL- 6與 尿中 IL-6的表 達(dá)呈正 相關(guān) (R= 0.739,P＜0.01)。

3 討論

IL-6是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,作為機(jī)體復(fù)雜的細(xì)胞因子家族中的重要成員,在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中起著非常關(guān)鍵的作用。徐佳[5]等的研究表明 IL-6在病理模型組中主要在腎小管上皮細(xì)胞和細(xì)胞核有表達(dá),在腎小球內(nèi)亦可見陽性表達(dá)。PNS患兒尿中 IL-6顯著高于健康兒童,且尿中 IL-6活性增高并不是由于外周血淋巴細(xì)胞分泌IL-6增強(qiáng)所致 ,因此檢測患兒尿 IL-6的水平能更好地反映患兒病情與治療效果,對指導(dǎo)臨床治療具有重要意義[6]。研究發(fā)現(xiàn) N S組 IL-6水平明顯高于N S緩解組及正常對照組,而 NS緩解組 IL-6水平接近正常,提示在 NS病中存在以IL-6增高為特征性的免疫學(xué)紊亂[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腎病組在注射多柔比星7d后尿中 IL-6的表達(dá)逐漸升高 ,42d達(dá)到高峰,24h蛋白尿定量在各時(shí)期表達(dá)情況與正常組相比均有顯著性差異 (P＜0.01),尿液及腎組織中 IL-6的表達(dá)情況與24h蛋白尿量均呈正相關(guān) (P＜0.01),且尿液中 IL-6與腎組織中 IL-6的表達(dá)也呈正相關(guān) (P＜0.01)。治療組尿液、腎組織中 IL-6及尿蛋白也不同程度的增加,但與腎病組相比較低。目前已證實(shí),腎臟系膜細(xì)胞、腎小球上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞等均能產(chǎn)生 IL-6,且 IL-6在腎臟局部又能刺激系膜細(xì)胞增殖并分泌其他細(xì)胞因子和膠原等進(jìn)而影響疾病發(fā)展。病理情況下,以上細(xì)胞產(chǎn)生的 IL-6增多,參與腎臟病理生理過程,并從尿中排出。這也很好的解釋了在尿 IL-6增高的 MCN S患者中,大量蛋白尿的發(fā)生率較高 ,腎臟病理改變較重的原因。研究發(fā)現(xiàn)[8]經(jīng)青藤堿干預(yù)后,IL-6表達(dá)明顯下降,減輕了過量 IL-6表達(dá)對免疫系統(tǒng)的損害,從而提高了巨噬細(xì)胞的免疫應(yīng)答能力有關(guān)。這與本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)建立的動(dòng)物模型較好地模擬了人類 MCNS,同時(shí)發(fā)現(xiàn)了 IL-6表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其與蛋白尿的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)尿液及腎組織中 IL-6與 24h蛋白尿呈正相關(guān),尿液中IL-6與腎組織中 IL-6的表達(dá)呈正相關(guān),故尿液中 IL-6的水平可以反映出腎組織中 IL-6的水平。而 SIN能有效的抑制腎組織及尿中 IL-6的表達(dá) ,減輕 MCNS大鼠尿蛋白、保護(hù)腎功能,促進(jìn)腎臟病理損害的修復(fù)。

[1] 田彬,范伏元.健脾益腎顆粒劑對脾腎陽虛型慢性腎炎患者尿 IL-6水平的影響 [J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,28(4):50-52

[2] 余詠文,張強(qiáng)英.原發(fā)性腎病綜合征患兒足量激素治療前后血、尿白細(xì)胞介素 -6檢測的意義 [J].實(shí)用兒科臨床雜志,2006,21(5):286-287

[3] Moura IC,Benhamou M,Launay P,et al.The glomerular response to Ig A deposition in IgA nephropathy[J].Semin Nephrol,2008,28(1):88-95

[4] 王崢,王增貴,劉震,等.多柔比星誘發(fā)大鼠腎病模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1990,21(4):430-432

[5] 徐佳 ,崔蕊.Ig A-I號(hào)治療 IgA腎病腎組織 IL-1 β,IL-6檢測分析 [J].黑龍江醫(yī)學(xué),2008,9(32):663-664

[6] 陳英,高巖.白細(xì)胞介素在小兒原發(fā)性腎病綜合征發(fā)病機(jī)制中作用的研究現(xiàn)狀[J].醫(yī)學(xué)綜述,2008,14(6):908-911

[7] 劉雪梅,張洪霞,段春紅.腎病綜合征患兒免疫功能測定的臨床意義[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2008,3(33):17-18

[8] 鄒同祥,張翼冠,張海港.青藤堿對巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響及機(jī)制探討 [J].中藥藥理與臨床,2008,24(6):15-16