不同宮頸病變組織中C-MYC基因與P16蛋白的表達(dá)

武海英，史惠蓉

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科鄭州450052 2)河南省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科鄭州450003

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)，但最終只有極少部分發(fā)展為宮頸癌。找到宮頸癌發(fā)生發(fā)展的分子標(biāo)志物是早期診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和宮頸癌的關(guān)鍵。目前認(rèn)為，P16蛋白作為腫瘤標(biāo)志物在CIN及宮頸癌中表達(dá)異常，可作為宮頸癌早期病變的標(biāo)志物之一［1］。有文獻(xiàn)［2］證實(shí) CMYC基因及其產(chǎn)物在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用與HPV關(guān)系密切。作者分別檢測了各級宮頸病變組織中C-MYC基因和P16蛋白的表達(dá)，探討二者在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇2009年6月至2010年6月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診及住院部收治的不同程度CIN及宮頸癌患者，年齡22～65(44.2±9.3)歲。所有標(biāo)本均經(jīng)病理診斷證實(shí)，其中慢性宮頸炎40例，CINⅠ級108例，CINⅡ級50例，CINⅢ級35例，浸潤性宮頸鱗狀細(xì)胞癌38例，腺癌14例。宮頸癌中高分化12例，中分化12例，低分化28例;FIGO分期:Ⅰ期18例，Ⅱ期23例，Ⅲ期以上11例;術(shù)后有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例。

1.2 宮頸各級病變組織中C-MYC基因和P16蛋白表達(dá)的檢測 所有標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片備用。采用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測C-MYC基因，C-MYC探針和檢測試劑盒由北京金菩嘉生物有限公司提供，參照FISH檢測試劑盒說明書步驟操作。結(jié)果判斷參照文獻(xiàn)［2］。

采用免疫組化SP方法檢測P16蛋白在宮頸各級病變組織中的表達(dá)。鼠抗人P16單克隆抗體(使用時(shí)按1-50稀釋)、SP試劑盒及DAB顯色試劑購于福州邁新公司，具體操作按說明書進(jìn)行。以PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性表達(dá)的宮頸癌切片作陽性對照。P16蛋白陽性表達(dá)為胞核和胞質(zhì)著棕黃色。P16陽性判斷參考Negri等［1］的標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.5分析數(shù)據(jù)。各組間C-MYC基因和P16蛋白陽性表達(dá)率的比較采用校正χ2檢驗(yàn)或確切概率法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

不同宮頸病變中C-MYC基因及P16蛋白的表達(dá)見圖1和表1。兩兩比較結(jié)果顯示，除CINⅢ級與宮頸鱗狀細(xì)胞癌(P=0.198)、宮頸鱗狀細(xì)胞癌與宮頸腺癌(P=1.000)之間C-MYC基因陽性表達(dá)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余任兩者之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;除CINⅢ級與宮頸鱗狀細(xì)胞癌(P=0.389)、宮頸鱗狀細(xì)胞癌與宮頸腺癌(P=0.870)之間P16蛋白陽性表達(dá)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余任兩者之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C-MYC基因及P16蛋白的表達(dá)與宮頸癌各臨床病理特征的關(guān)系見表2。

表1 不同宮頸病變中C-MYC基因與P16蛋白陽性表達(dá)率的比較 例(%)

表2 C-MYC基因和P16蛋白的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

圖1 不同宮頸病變中C-MYC基因和P16蛋白的表達(dá)

3 討論

C-MYC基因定位于染色體8q24，編碼蛋白由49個(gè)氨基酸殘基組成，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。C-MYC基因及其產(chǎn)物在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用與HPV關(guān)系密切［2］。在正常生理?xiàng)l件下，pRb與E2F細(xì)胞因子結(jié)合，使游離E2F數(shù)量減少，而HPV病毒蛋白E7在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合pRb，使游離E2F增多，導(dǎo)致C-MYC活性增加，使大量G0細(xì)胞提前進(jìn)入細(xì)胞周期，導(dǎo)致不典型增生、癌變的發(fā)生［3-4］。Wu［5］檢測不同病理分型癌組織，發(fā)現(xiàn) CMYC基因在分化差的癌組織較易擴(kuò)增和過度表達(dá)，且較易復(fù)發(fā)。Riou等［6］提示C-MYC過度表達(dá)更多出現(xiàn)在惡性程度較高的宮頸癌中。Iwasaka等［7］研究證實(shí)，C-MYC過度表達(dá)的患者，24個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)率明顯高于無過度表達(dá)的患者。該研究結(jié)果表明，隨宮頸病變級別的升高，C-MYC基因的陽性表達(dá)率升高，且C-MYC基因與宮頸癌的分化程度有關(guān)，說明C-MYC在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，有可能作為判斷預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

p16基因定位于9p21，又稱多腫瘤抑制基因，是細(xì)胞周期依賴酶抑制因子，在多數(shù)腫瘤中呈低表達(dá)，但有研究［8-9］表明p16在CIN及宮頸癌中表現(xiàn)為過表達(dá)。對其過表達(dá)的機(jī)制目前主要解釋為:①由于Rb基因的失活造成的。在正常宮頸組織中，p16與pRb之間通過負(fù)調(diào)節(jié)維持著兩者的平衡。宮頸發(fā)生癌變時(shí)，可導(dǎo)致功能性pRb蛋白的缺失，其對p16的抑制作用解除而導(dǎo)致p16升高［10］。②p16表達(dá)增高可能與HPV感染有關(guān)。HPV感染機(jī)體并整合到宿主DNA后，引起E6、E7過表達(dá)，E7基因編碼蛋白可與pRb結(jié)合并抑制其活性，從而使P16蛋白表達(dá)升高［11］。因此有學(xué)者［9］認(rèn)為 p16可作為間接測定宮頸癌早期病變及HPV整合的指標(biāo)。該研究結(jié)果表明，隨宮頸病變級別的升高，P16陽性率呈逐漸升高的趨勢，但P16的表達(dá)與宮頸癌的分化程度、病理分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，提示P16的高表達(dá)是宮頸正常組織-CIN-宮頸癌發(fā)生過程中的早期事件。

綜上所述，P16可作為宮頸癌的早期預(yù)測指標(biāo)，而C-MYC基因則與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。

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