CCR7-PI3K/Akt信號傳導(dǎo)通路與結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

王懷志，趙國強(qiáng)，石獻(xiàn)洲，張 建

(武警河南總隊(duì)醫(yī)院，鄭州450052)

趨化因子受體CCR7是一種可以特異地結(jié)合趨化因子的G蛋白偶聯(lián)受體，目前已有多項(xiàng)研究證實(shí)其在多種實(shí)體瘤中存在過表達(dá)［1，2］。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號途徑，是與腫瘤細(xì)胞生長、增殖及分化等密切相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡及維持細(xì)胞生存等機(jī)制中具有重要作用［3］。為了初步研究CCR7促進(jìn)結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移可能存在的分子機(jī)制，2003年5月～2008年2月我們檢測了40例結(jié)腸癌組織及15例正常結(jié)腸黏膜組織中CCR7與PI3K、Akt的表達(dá)，觀察CCR7與PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵靶酶的相關(guān)性，以期探討PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與結(jié)腸癌之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 40例結(jié)腸癌手術(shù)切除標(biāo)本取自武警河南總隊(duì)醫(yī)院。其中男23例、女17例，年齡32～77歲，所有病例術(shù)前無化療、放療及免疫治療史。

1.2 檢測方法 40例標(biāo)本分別取自無明顯壞死癌灶及＞5cm的遠(yuǎn)端正常黏膜組織，均經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度4～6 μm，分別用于HE及免疫組化染色。40例標(biāo)本經(jīng)兩位病理學(xué)醫(yī)師同時診斷并證實(shí)為腺癌。其中TNM分期Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例;伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例。鼠抗人CCR7單克隆抗體購自美國Santa cruz公司，PI3K(P85α亞型，sc-423)為兔抗人濃縮型多克隆抗體;Akt1/2(sc-1619)為羊抗人濃縮型多克隆抗體;PI3K、Akt及SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)采用S-P法，CCR7、PI3K、Akt單抗稀釋，稀釋倍數(shù)均為 1∶100，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。染色步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 每例標(biāo)本均于高倍鏡下隨機(jī)選取10個視野。評分方法:①按切片中細(xì)胞著色深淺評分:0分為細(xì)胞無顯色;1分為淺黃色;2分為棕黃色;3分為棕褐色。②按陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的百分比評分:＜30%為1分，30% ～70%為2分，＞70%為3分。?、佟ⅱ趦身?xiàng)評分的乘積作為總積分，0～1分為陰性(－)，＞1分為陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，行χ2檢驗(yàn)。以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 CCR7及PI3K、Akt蛋白表達(dá) CCR7蛋白陽性表達(dá)主要位于腫瘤細(xì)胞的胞膜及胞質(zhì)中，呈淺黃色至深黃色，PI3K、Akt蛋白陽性表達(dá)均主要位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中，為淺黃色或深黃色顆粒。正常黏膜組織中CCR7及PI3K、Akt的蛋白表達(dá)分別為2例(13.3%)、3 例(20.0%)和 2 例(13.3%)，結(jié)腸癌組織中分別為26例(65.0%)、25例(62.5%)和22 例(55.0%)，χ2值分別為9.677、6.276 和6.100，P 值分別為 0.002、0.012 和 0.014。不同組織中CCR7及PI3K、Akt蛋白表達(dá)見表1。

2.2 與臨床病理因素的關(guān)系 CCR7及PI3K、Akt蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理因素的關(guān)系見表1。

表1 CCR7及PI3K、Akt蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理因素的關(guān)系［例(%)］

2.3 相關(guān)性分析 CCR7與PI3K、Akt蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為 0.406、0.390，P 值分別為0.009、0.013)。

3 討論

CCR7是CC類趨化因子受體家族成員之一，新近的研究結(jié)果顯示，CCR7主要高表達(dá)于某些腫瘤細(xì)胞，其配體CCL21、CCL19主要表達(dá)在淋巴結(jié)、非淋巴組織的內(nèi)皮淋巴導(dǎo)管、T細(xì)胞區(qū)等。配體對受體的吸引可以促進(jìn)CCR7表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞循配體濃度梯度定向轉(zhuǎn)移［3］，而且配體與受體結(jié)合后可引起細(xì)胞內(nèi)肌動蛋白的聚合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的偽足形成，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移［4］。

PI3K/Akt信號傳導(dǎo)通路與包括腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、分化、黏附及遷移等密切相關(guān)。各種癌基因酪氨酸激酶受體，例如 Src、Ras、Rac、Abl、v-Crk 等均可活化 PI3K［5］。PI3K/Akt通路是 PI3K主要介導(dǎo)的下游信號傳導(dǎo)通路，而Akt是PI3K下游最直接的靶蛋白之一。PI3K的活化底物PIP3作為第二信使，與Akt的PH區(qū)結(jié)合并可使之激活?；罨腁kt即磷酸化Akt可以通過磷酸化作用激活其諸多的下游分子，如GSK-3、p70S6k、Bad、caspase-9 等，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化、黏附、遷移以及凋亡等生物學(xué)行為［6］。

在本研究中我們發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌中CCR7、PI3K及Akt蛋白表達(dá)均顯著高于正常黏膜對照組，CCR7、PI3K蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Akt蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)增高，這就提示其過表達(dá)可能與結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。同時，經(jīng)相關(guān)分析，CCR7與PI3K、Akt蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系，提示CCR7、PI3K、Akt對結(jié)腸癌的發(fā)生起正調(diào)控作用，CCR7可能上調(diào)PI3K、Akt的表達(dá)并參與腫瘤進(jìn)展中Akt的激活。

綜上所述，在結(jié)腸腺癌侵襲及轉(zhuǎn)移過程中，CCR7的表達(dá)調(diào)控有可能與PI3K/Akt信號途徑有相關(guān)性，可能是與Akt磷酸化活性相關(guān)。PI3K/Akt信號通路的激活可能參與了CCR7介導(dǎo)的結(jié)腸癌的浸潤、轉(zhuǎn)移過程。因此，對CCR7和PI3K/Akt通路的深入研究有可能為結(jié)腸腺癌新治療靶點(diǎn)提供一定的理論依據(jù)。

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