江蘇常州地區(qū)園林苗木根際寄生線蟲的鑒定1)

胡 嫦

(江蘇省有害生物入侵預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(南京林業(yè)大學(xué))，南京，210037)

王 宇 談家金 葉建仁

(常州出入境檢驗(yàn)檢疫局) (江蘇省有害生物入侵預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(南京林業(yè)大學(xué)))

植物線蟲的分布極廣，每種植物幾乎至少都有1種寄生線蟲，目前世界上已記載的植物線蟲已達(dá)200多屬5 000余種［1］。近10多a來，我國園林苗木生產(chǎn)規(guī)模不斷擴(kuò)大，出口園林苗木業(yè)發(fā)展迅速，但苗木上的寄生線蟲一直限制著其出口創(chuàng)匯。為了查明園林苗木根際寄生線蟲的種類，筆者從江蘇省常州地區(qū)一苗木出口基地采集多種園林苗木的根際土壤，對其中的寄生線蟲進(jìn)行了分離鑒定，從而為進(jìn)一步研究其線蟲病害的檢疫和防治奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集

于2010年4月6日，從江蘇省常州地區(qū)金壇市一苗圃內(nèi)共采集了21種園林苗木的根和根際土壤。21種園林苗木:蒲葦(Cortaderia selloana)1年生，蘆竹(Arundo donax)5年生，黃菖蒲(Iris pseudoacorus)2年生，銀邊麥冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)3年生，金邊麥冬(Liriope spicatavar.Variegata)2年生，常綠鳶尾(Iris tectorumMaxim)3年生，花菖蒲(Iris ensataThunb)2年生，海壽花(Pontederia cordata)1年生，金邊絲蘭(Yucca filamentosa)6年生，金森女貞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)半年生，扶芳藤(Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)半年生，月季(Rosa chinensisJacq)2 年生，亞菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)1 年生，灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)半年生，常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)半年生，銀枝小蠟(Ligustrum sinenseLour)1年生，濃香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)1年生，美麗月見草(Oenothera biennisL.High)1年生，天人菊(Gaillardia pulchella)1年生，紅花繼木(Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)1 年生，金邊黃楊(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)1年生。每種苗木隨機(jī)采集3株，每株采集根和根際土壤500 g作為一份樣品，共采集樣品63份。將樣品裝入采集袋中，帶回實(shí)驗(yàn)室后及時(shí)分離。

1.2 線蟲的分離鑒定

根樣中植物線蟲的分離采用直接解剖法和改良貝曼漏斗法。根際土壤樣品中植物線蟲的分離采用淘洗——過篩——改良貝曼漏斗法分離［1］。分離出來的線蟲置于60～65℃水浴中處理2～3 min，進(jìn)行溫和殺死，然后用FG固定液(40%甲醛、甘油、蒸餾水的質(zhì)量比為10∶1∶89)進(jìn)行固定［1］。固定后的線蟲制成臨時(shí)玻片標(biāo)本在光學(xué)顯微鏡下，根據(jù)形態(tài)特征描述(質(zhì)量特征)和形態(tài)特征測計(jì)值(數(shù)量特征)進(jìn)行線蟲種類的鑒定。線蟲形態(tài)特征測計(jì)采用de Man公式。線蟲分類鑒定主要根據(jù)謝輝［2］分類系統(tǒng)，同時(shí)參照 Hunt［3］的分類系統(tǒng)。

1.3 形態(tài)特征測計(jì)指標(biāo)

n為測計(jì)的標(biāo)本數(shù);L為體長(μm);a為體長/最大體寬;b為體長/體前端至食道與腸連接處的距離;b’為體長/體前端至食道腺末端的距離;c為體長/尾長;c’為尾長/肛門處體寬;V為體前端至陰門的距離×100/體長;V’為體前端至陰門的距離×100/體前端至肛門的距離;St為口針長度(μm);LMB為中食道球長(μm);WMB為中食道球?qū)?μm);T為尾長(μm);SP為交合刺長度(μm);Gub為雄蟲引帶長度(μm)。

2 結(jié)果與分析

通過對63份根和根際土壤樣品中的寄生線蟲進(jìn)行分離鑒定，初步發(fā)現(xiàn)5種根際線蟲，分別是擬裸露矮化線蟲(Tylenchorhynchus paranudusPhukan＆Sanwal)，甘藍(lán)矮化線蟲(Tylenchorhynchus brassicaeSiddiqi)，裂片真滑刃線蟲(Aphelenchus sparsusThorne＆Malek)，內(nèi)卷滑刃線蟲(Aphelenchoides involutusMinagawa)和伊朗平滑墊刃線蟲(Psilenchus iranicusKheiri)。

擬裸露矮化線蟲的鏡檢見圖1A，其分類地位為:隸屬于墊刃目(Tylenchida Thorne)、刺科(Belonolaimidae Whitehead)、矮化屬(TylenchorhynchusCobb)［4］。測量值為:♀(n=23)L=(639.3±41(586.1 ～709.6))μm;a=28.2±1.5(26.4 ～30.8);b=5.0±0.2(4.7 ～5.3);c=14.4±1.4(12.2 ～16.4);c’=3.2±0.5(2.4 ～4.2);V=55.9±1.6(52.9 ～58.9);V’=60.1±1.5(57.3 ～62.8);St=(17.0±1.7(16.5 ～18.9))μm;LMB=(14.2±1.2(12.8 ～18.9))μm;WMB=(9.7±1.1(8.0 ～11.4))μm;T=(44.8±6.1(37.5 ～56.5))μm。♂(n=5)SP=(21.0±1.7(18.0 ～23.6))μm;Gub=(8.7±1.5(6.8 ～10.1))μm。

擬裸露矮化線蟲形態(tài)描述:雌蟲，蟲體經(jīng)溫?zé)釟⑺篮蟪书_放的C形或線形。體表環(huán)紋顯著，尾部環(huán)紋間距稍寬。唇區(qū)稍縊縮，呈半圓形，平滑?？卺槹l(fā)達(dá)，口針基部球明顯，前緣微突。中食道球卵圓形，有明顯的瓣片;食道腺長梨形，與腸交界明顯。陰門位于體中部約55%處，卵巢1對，直生。陰道長約陰門處體寬的1/2，尾部棒狀，中部略細(xì)，尾端稍膨大，半球形，透明無環(huán)紋。雄蟲，尾長38～44 μm，長圓錐形，尾端銳尖。精巢單個(gè)，直伸。交合刺長18.0～23.6 μm，略彎曲。引帶發(fā)育較好，長6.8～10.1 μm，交合傘包至尾端。寄主為蘆竹(Arundo donax)、銀邊麥冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、花菖蒲(Iris ensataThunb)、海壽花(Pontederia cordata)、金邊絲蘭(Yucca filamentosa)、灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)。

甘藍(lán)矮化線蟲的鏡檢圖見圖1B，其分類地位為:隸屬于墊刃目、刺科、矮化屬［5］。測量值為:♀(n=24)L=(591.7±60.9(415.6 ～692.9))μm;a=27.1±2.4(17.9 ～30.4);b=5.1±0.7(3.5 ～6.6);c=15.4±3.1(10.9 ～25.7);c’=2.8±0.4(2.0 ～3.7);V=57.4±1.2(54.7 ～59.9);V’=61.5±1.7(58.7 ～64.6);St=(15.6±1.8(9.3 ～18.0))μm;LMB=(12.9±1.5(10.3 ～16.0))μm;WMB=(8.6±0.9(6.8 ～ 10.5))μm;T=(39.5±6.7(23.3 ～55.1))μm。♂(n=16)L=(595.1±41.5(509.1 ～639.3))μm;a=26.7±2.9(19.3 ～ 32);b’=5.1±0.3(4.7 ～5.5);c=15.3±1.3(12.7 ～ 17.8);St=(16.2±1.3(13.1 ～18.1))μm;SP=(21.2±1.7(18.0 ～24.6))μm;Gub=(7.7±1.5(5.8 ～10.1))μm。

甘藍(lán)矮化線蟲形態(tài)描述:雌蟲，雌蟲蟲體兩端略變細(xì)，角質(zhì)層環(huán)紋明顯。唇區(qū)稍縊縮，口針發(fā)達(dá)，錐體部約等于桿部長度，口針基部球前緣略向側(cè)傾斜。中食道球卵圓形，具明顯瓣片。食道腺長梨形，與腸交界明顯，賁門清楚，排泄孔位于食道腺前端水平處。卵巢2個(gè)，對生。尾圓錐形，末端鈍尖，光滑，尾腹環(huán)約18個(gè)。雄蟲，引帶骨化，背有凸緣。交合刺發(fā)達(dá)，交合傘具紋，包至尾端。寄主為蒲葦。

裂片真滑刃線蟲的鏡檢圖見圖1C，其分類地位為:滑刃目(Aphelenchida)、真滑刃科(Aphelenchidae)、真滑刃屬(Aphelenchus)［8］。測量值為:♀(n=23)L=(704.1±82.4(502.8 ～770.2))μm;a=30.4±3.3(25.0 ～ 38.3);b=6.0±0.9(4.5 ～7.8);b’=4.4±0.5(3.6 ～5.5);c=30.2±5.1(17.3 ～38.8);c’=1.8±0.4(1.3 ～ 3.0);V=76.4±1.2(72.7 ～78.0);V’=75.9±14.9(74.6 ～81.3);St=(16.5±1.7(12.6 ～18.9))μm;LMB=(19.7±2.0(15.5 ～ 22.5))μm;WMB=(13.2±2.2(9.7 ～17.6))μm;T=(23.2±6.2(17.6 ～44.6))μm。

裂片真滑刃線蟲形態(tài)描述:雌蟲，蟲體粗壯，圓筒形，兩端稍細(xì)，體表環(huán)紋細(xì)。唇區(qū)低，前端平圓，不縊縮?？卺橀L12.6～18.9 μm，無口針基部球。食道前體部圓筒狀，中食道球大，呈橢圓形。食道腺長葉狀，從背側(cè)面覆蓋腸，覆蓋長度約為體寬的兩倍。陰門位于蟲體中后部，陰門唇隆起，陰道長約為體寬的1/3～1/2。單卵巢，前伸，卵母細(xì)胞單行排列。尾圓筒形，末端圓或?qū)拡A，常有輻射狀條紋或透明邊緣。尾較短，尾長約為肛門處體寬的1.5倍。雄蟲未見。寄主為蒲葦(Cortaderia selloana)、金邊絲蘭(Yucca filamentosa)、金森女貞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)、扶芳藤 (Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、月季(Rosa chinensisJacq)、亞菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、銀枝小蠟(Ligustrum sinenseLour)、濃香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)、紅花繼木 (Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)。

內(nèi)卷滑刃線蟲的鏡檢圖見圖1D，其分類地位為:隸屬于滑刃目(Aphelenchida)、滑刃科(Aphelenchoididae)、滑刃屬(Aphelenchoides)［6］。測量值為:♀(n=22)L=(421.1±72.6(313.1 ～485.4))μm;a=28.1±2.2(24.0 ～33.6);b=6.1±0.8(5.1 ～7.9);b’=4.4±0.5(3.7 ～5.7);c=8.2±3.1(5.7 ～17.7);c’=7.1±1.5(3.2 ～9.5);V=61.6±3.8(52 ～70.3);V’=71.0±3.4(59.1 ～79.2);St=(13.2±1.8(10.8 ～16.0))μm;LMB=(13.3±1.3(10.1 ～15.2))μm;WMB=(9.1±0.7(7.9 ～10.6))μm;T=(64.1±13.2(40.7 ～75.8))μm。

內(nèi)卷滑刃線蟲形態(tài)描述:雌蟲，蟲體較小，由中間向兩端漸變細(xì)，尤其尾部更細(xì);經(jīng)溫和熱殺死后，蟲體向腹面強(qiáng)烈彎曲，后部呈鉤狀。體長313～485 μm，體表環(huán)紋細(xì)密。唇區(qū)明顯縊縮。口針細(xì)弱，具有很小的基部球。食道體部呈圓筒形，中食道球橢圓形至矩圓形，具有發(fā)達(dá)的瓣膜。食道腺長葉狀，從背面覆蓋腸的前端。排泄孔位于中食道球后約一個(gè)中食道球長度處，距離蟲體前端約70 μm。陰門橫裂，約位于蟲體中后部62%處，陰道稍向前傾斜。單卵巢，前伸，可延伸到食道腺后緣處。后陰子宮囊長超過一個(gè)體寬。自肛門后尾逐漸變細(xì)，尾向腹面彎曲，呈鉤狀。尾末端鈍圓，無尾尖突。雄蟲未見。寄主為銀邊麥冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、常綠鳶尾(Iris tectorumMaxim)、金森女貞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)、扶 芳 藤 (Euonymusfortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、亞菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、銀枝小蠟(Ligustrum sinenseLour)、濃香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)、金邊黃楊(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)。

伊朗平滑墊刃線蟲的鏡檢圖見圖1E，其分類地位為:隸屬于墊刃目(Tylenchida)、墊刃科(Tylenchidae)、平滑墊刃屬(Psilenchus)［16］。測量值為:♀(n=30)L=(978.5±156.1(824.2 ～1268.7))μm;a=35.7±2.3(30.7 ～46.0);b=6.5±0.6(5.3 ～8.1);c=7.7±0.6(6.7 ～8.8);c’=6.3±1.0(5.1 ～8.1);V=48.4±1.2(46.6 ～51.4);V’=57.0±1.7(54.2 ～61.2);St=(14.2±2.3(10.1 ～20.3))μm;LMB=(14.7±2.2(11.6 ～19.7))μm;WMB=(9.6±1.3(6.5 ～12.7))μm;T=(133.2±16.4(101.4 ～163.3))μm?！?n==17)SP=(25.7±4.3(18.3 ～35.5))μm;Gub=(3.7±0.5(3.0 ～4.5))μm。

圖1 常州園林苗木根際寄生線蟲初步鑒定

伊朗平滑墊刃線蟲形態(tài)描述:雌蟲，蟲體較大，熱殺死后蟲體向腹面彎曲，呈開放的“C”形;體環(huán)細(xì)，體中部環(huán)紋寬約1.0 μm，肛門后體環(huán)略粗。頭架不發(fā)達(dá)，前端平，頭部與體部連接處不縊縮，有環(huán)紋?？卺樔?，無口針基部球。食道前體部管狀，中食道球卵圓形，具發(fā)達(dá)的肌肉質(zhì)瓣，食道腺梨形，與腸交界清楚。陰門橫裂，位于蟲體中部稍前，雙生殖腺，對伸;受精囊長，內(nèi)有精子;卵母細(xì)胞雙行排列。尾較長，末端棒狀，有透明尾，約為尾長的1/3。雄蟲，蟲體比雌蟲稍小;精巢前伸，末端轉(zhuǎn)折或不轉(zhuǎn)折;交合刺發(fā)達(dá)，引帶不伸出泄殖腔口;交合傘位于泄殖腔周圍。寄主為蘆竹、黃菖蒲、銀邊麥冬、金邊麥冬、花菖蒲、金邊絲蘭、扶芳藤、月季、灑金桃葉珊瑚、銀枝小蠟、美麗月見草、天人菊、紅花繼木、金邊黃楊。

3 結(jié)論與討論

從常州金壇一苗圃地21種園林苗木中采集了63份根及根際土壤樣品，分離鑒定其中的寄生線蟲，初步鑒定出5種，分別是擬裸露矮化線蟲(Tylenchorhynchus paranudusPhukan＆Sanwal)，甘藍(lán)矮化線蟲(Tylenchorhynchus brassicaeSiddiqi)，裂片真滑刃線蟲(Aphelenchus sparsusThorne＆Malek)，內(nèi)卷滑刃線蟲(Aphelenchoides involutusMinagawa)和伊朗平滑墊刃線蟲(Psilenchus iranicusKheiri)。已有報(bào)道從同一苗圃地采集10種園林苗木根際分離鑒定出雙宮螺旋線蟲、林伯滑刃線蟲和喜悅平滑墊刃線蟲3種寄生線蟲［7］。矮化線蟲屬已報(bào)道130多種，主要在根部外寄生，但是在某些條件下，它們也可以侵入根內(nèi)轉(zhuǎn)為內(nèi)寄生。擬裸露矮化線蟲的寄主有大王椰子(Roystonea regia)、香蕉(Musa paradisiaca)等，在福建、廣西等均有 分 布［8－9］。筆 者 在 蘆 竹 (Arundo donax)、銀 邊 麥 冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、花菖蒲(Iris ensataThunb)、海壽花(Pontederia cordata)、金邊絲蘭(Yucca filamentosa)和灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)上分離發(fā)現(xiàn)，這六種園林苗木均為擬裸露矮化線蟲的新寄主，同時(shí)該種線蟲亦為江蘇省新記錄種。甘藍(lán)矮化線蟲的寄主有甘藍(lán)(Brassica oleraceavar.capitataL.)、萵苣(Lactuca sativaL.)、白菜(Brassica pekinensis(Lour.)Rupr.)等，在江蘇、北京、上海、廣西、四川、香港等均有分布［8，10－11］。筆者在蒲葦根際首次發(fā)現(xiàn)該線蟲。真滑刃線蟲屬已報(bào)道約30個(gè)種［2］。裂片真滑刃線蟲的寄主有小麥(Triticum aestivumL.)、甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)、花生(Arachis hypogaeaL.)、大蒜(Allium sativumL.)等，在云南、貴州、廣東、吉林、陜西、甘肅、美國等均有分布［8，12－13］。筆者在蒲葦(Cortaderia selloana)、金邊絲蘭(Yucca filamentosa)、金森女貞(Ligustrum lucidumcv.Aureomarginatum)、扶芳藤(Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、月季(Rosa chinensisJacq)、亞菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、銀枝小蠟(Ligustrum sinenseLour)、濃香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)、紅花繼木(Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)等12種園林苗木根際土壤中發(fā)現(xiàn)，這些苗木均為裂片真滑刃線蟲的新寄主?；芯€蟲屬是滑刃目線蟲中最大的屬，該屬線蟲食性雜，寄主范圍廣，分布廣泛，有些種類是農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)中的重要病原物。內(nèi)卷滑刃線蟲的寄主有桔梗(Platycodon grandiflorus(Jacq.)A.DC.)、苦參(Sophora flavescensAit.)、青綠苔草 (Carex breviculmisR.Br.)、蒼耳 (Xanthium sibiricumPatrin ex Widder)、大豆(Glycine max(L.)Merr.)、黃花菜(Hemerocallis minorMill.)、等，在云南、遼寧、山東、安徽、日本、巴基斯坦等均有分布［8，14－153］。筆者在銀邊麥冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、常綠鳶尾(Iris tectorumMaxim)、金森女貞(Ligustrum lucidum cv.Aureomarginatum)、扶芳藤(Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、亞菊(Ajania pallasiana(Fisch.ex Bess.)Poljak)、灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、常春藤(Hedera nepalensisvar.sinensis(Tobl.)Rehd)、銀枝小蠟(Ligustrum sinenseLour)、濃香茉莉(Jasminum sambac(L.)Aiton)、天人菊(Gaillardia pulchella)和金邊黃楊(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)根際土壤中發(fā)現(xiàn)，這11種園林苗木均為內(nèi)卷滑刃線蟲的新寄主，同時(shí)該種線蟲亦為江蘇省新記錄種。平滑墊刃線蟲屬已報(bào)道約10個(gè)種，其中伊朗平滑墊刃線蟲的寄主有無花果(Ficus caricaL.)、紅棗(Ziziphus jujubaMill.)、桃樹(Amygdalus persicaL.)等，在上海、新疆、黑龍江、云南等地有分布［16－18］。筆者在蘆竹(Arundo donax)、黃菖蒲(Iris pseudoacorus)、銀邊麥冬(Ophiopogon jaburanArgenteivittatus)、金邊麥冬(Liriope spicatavar.Variegata)、花菖蒲(Iris ensataThunb)、金邊絲蘭(Yucca filamentosa)、扶 芳 藤 (Euonymus fortunei(Turcz.)Hand.-Mazz)、月季(Rosa chinensisJacq)、灑金桃葉珊瑚(Aucuba japonicacv.variegata)、銀枝小蠟(Ligustrum sinenseLour)、美麗月見草(Oenothera biennisL.High)、天人菊(Gaillardia pulchella)、紅花繼木 (Loropetalum chinense(R.Br.)Oliver var.rubrumYieh)、金邊黃楊(Euonymus japonicuscv.aureo-marginatus)等14種園林苗木根際土壤中發(fā)現(xiàn)，這些苗木均為伊朗平滑墊刃線蟲的新寄主，同時(shí)該種線蟲亦為江蘇省新記錄種。

江蘇常州作為全國較大的綠化苗木生產(chǎn)基地之一，擁有優(yōu)良的生產(chǎn)出口條件。國際花木市場對江蘇常州花木的需求日益增加，然而國際口岸對苗木寄生線蟲的檢疫要求也愈來愈高，寄生線蟲已成為制約常州花木順利走向世界的檢疫技術(shù)瓶頸。通過此次實(shí)驗(yàn)初步報(bào)道了多種園林苗木的根際寄生線蟲，從而為開展苗木寄生線蟲的檢疫和防治奠定了較好的前期基礎(chǔ)。

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