平喘湯對(duì)支氣管哮喘大鼠肺組織形態(tài)學(xué)及肺指數(shù)的影響

馮高華 朱 虹 孫 峰 賈永良 張翠萍

1揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院（江蘇揚(yáng)州225001）2江蘇省張家港市中醫(yī)院（江蘇張家港215600）

本研究在建立大鼠支氣管哮喘模型的基礎(chǔ)上，通過(guò)觀察臨床經(jīng)驗(yàn)方平喘湯對(duì)大鼠支氣管和肺組織及肺指數(shù)的影響，以探討其對(duì)支氣管哮喘組織學(xué)的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥防治支氣管哮喘提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)SD大鼠，48只，雌雄不拘，（225±10.711）g，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（蘇）2008-0004。飼養(yǎng)于室溫18～22℃環(huán)境中，自由飲水飲食1周。

1.2 儀器 WH-1型醫(yī)用超聲霧化器，無(wú)錫市第四機(jī)床電器廠；萊卡RM 2245切片機(jī)。

1.3 藥物制備 平喘湯由炙麻黃、杏仁、葶藶子、蘇子、萊菔子、白芥子、枳殼、桔梗、地龍、僵蠶、五味子等藥物組成。藥物均由江蘇省蘇北人民醫(yī)院中藥房提供，口服液由揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合研究所制備，藥物質(zhì)量濃度為每毫升含生藥2g。藥液置于250mL鹽水瓶中，4℃保存?zhèn)溆?。?duì)照藥物博利康尼以生理鹽水溶解，備用。

1.4 動(dòng)物模型制備 參考文獻(xiàn)[1]，將模型組及各治療組大鼠腹腔注射10%卵蛋白1mL和氫氧化鋁干粉100mg致敏。2周后予超聲霧化吸入1%卵蛋白激發(fā)，隔日1次，每次30min，共激發(fā)2周，即可觀察到大鼠呼吸加快、點(diǎn)頭呼吸及站立不穩(wěn)等表現(xiàn)，示造模成功。正常對(duì)照組用生理鹽水代替抗原液進(jìn)行注射和霧化吸入。

1.5 分組與給藥 按隨機(jī)數(shù)字法將其分為正常對(duì)照組、模型組、平喘湯低劑量組（0.7mL）、平喘湯中劑量組（1.3mL）、平喘湯高劑量組（2.6mL）、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（0.1mL），每組8只。各組均從實(shí)驗(yàn)第3周起灌胃給藥，正常組及模型組給予1.3mL生理鹽水，每日1次，連續(xù)4周。

1.6 標(biāo)本采集及檢測(cè) 參考文獻(xiàn)[2]方法，準(zhǔn)確稱取大鼠體質(zhì)量后，頸椎脫位法處死大鼠，立即打開(kāi)胸腔，無(wú)菌條件下取出肺臟，稱濕質(zhì)量測(cè)定肺指數(shù)，肺指數(shù)=肺臟總濕質(zhì)量/實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量。取右肺中葉，以10%甲醛固定。把固定好的組織塊入梯度酒精脫水，然后常規(guī)透明、浸蠟、包埋。將包有組織的蠟塊用萊卡切片機(jī)切為 5μm的薄片，貼于載玻片上，脫蠟后進(jìn)行常規(guī) HE染色后鏡檢、攝片，捷達(dá)801圖文分析系統(tǒng)分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件。所有計(jì)量資料均用（±s）表示，采用單因素方差分析（LSD檢驗(yàn)）比較各組間差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肉眼觀察 正常組大鼠肺臟外觀正常，顏色淡紅，支氣管黏膜淡紅。模型組大鼠肺臟充血、腫大，其中2只大鼠肺臟顏色深紅；模型組大鼠氣管切開(kāi)，可見(jiàn)支氣管、細(xì)支氣管黏膜充血，有較多黏痰，其中1只大鼠支氣管中有黏液栓。各治療組大鼠肺臟、支氣管黏膜充血情況均較模型組為輕，支氣管中有少許清稀痰液。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，所有大鼠均無(wú)死亡。

2.2 各組大鼠支氣管-肺組織形態(tài)學(xué)變化 見(jiàn)圖1。正常組大鼠肺組織偶見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組大鼠可見(jiàn)支氣管壁增厚，杯狀細(xì)胞及黏膜皺襞增多，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖毛上皮細(xì)胞脫落，基底膜暴露，肺泡壁部分增厚，部分?jǐn)嗔?。平喘湯低劑量組淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，纖毛上皮細(xì)胞脫落，支氣管壁及肺泡壁增厚，氣管腔內(nèi)大量分泌物潴留，肺泡壁增厚，杯狀細(xì)胞增多。平喘湯中劑量組：淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，管腔見(jiàn)炎性分泌物，黏膜皺襞增多，支氣管壁及肺泡壁稍增厚。平喘湯高劑量組：淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，管腔少量分泌物潴留。與模型組比較，各治療組淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)有不同程度減少，肺組織充血、水腫現(xiàn)象減輕，支氣管管壁和肺泡壁增厚程度減輕。平喘湯劑量越高，則支氣管腔內(nèi)分泌物潴留越少。

圖1 各組肺組織病理組織圖（HE染色）

2.3 平喘湯對(duì)哮喘大鼠肺指數(shù)的影響 哮喘組及各治療組大鼠肺指數(shù)均高于正常組，差異顯著（P＜0.05）；各治療組大鼠肺指數(shù)均低于模型組，有顯著差異（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，平喘湯高劑量組大鼠肺指數(shù)無(wú)差異（P＞0.05）；平喘湯中、低劑量組大鼠肺指數(shù)顯著高于陽(yáng)性藥物對(duì)照組（P＜0.05）。

表1 各組肺指數(shù)比較 （±s）

表1 各組肺指數(shù)比較 （±s）

與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽(yáng)性藥物對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 n 肺臟指數(shù)（×10-3）正常對(duì)照組 8 5.64±0.032模型組 8 8.73±0.115**陽(yáng)性藥物對(duì)照組 8 6.49±0.087*△平喘湯高劑量組 8 6.02±0.184*△△平喘湯中劑量組 8 7.93±0.312**△#平喘湯低劑量組 8 8.52±0.143**△##

3 討 論

支氣管哮喘的本質(zhì)是由多種炎性細(xì)胞、多種炎性介質(zhì)和多種細(xì)胞因子參與的慢性氣道炎癥[3]，氣道炎癥是氣道高反應(yīng)性（AHR）的重要基礎(chǔ)。氣道炎癥學(xué)說(shuō)是支氣管哮喘的的主要發(fā)病機(jī)制。炎性細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的激活、浸潤(rùn)在此過(guò)程中起著非常重要的作用。氣道炎癥的形成與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)、上皮損傷以及神經(jīng)炎癥有關(guān)。通常情況下，機(jī)體內(nèi)的Th1/Th2處于相對(duì)恒定狀態(tài)，哮喘發(fā)作時(shí)Th1細(xì)胞功能下降，Th2細(xì)胞功能上升，因而產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子。正常氣道上皮為假?gòu)?fù)程纖毛柱狀上皮細(xì)胞，其間散在著杯狀細(xì)胞。氣管壁增厚、杯狀細(xì)胞增多、上皮細(xì)胞損傷，是支氣管哮喘氣道持續(xù)性損傷和結(jié)構(gòu)改變即氣道重構(gòu)的病理學(xué)特征。本研究應(yīng)用卵蛋白作為致敏原復(fù)制大鼠哮喘模型，致使大鼠出現(xiàn)了氣道炎癥及氣道的高反應(yīng)性，因此模型組大鼠可見(jiàn)支氣管壁增厚，杯狀細(xì)胞及黏膜皺襞增多，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖毛上皮細(xì)胞脫落，基底膜暴露，肺泡壁部分增厚，部分?jǐn)嗔?。由于致敏原?dǎo)致大鼠肺部變應(yīng)性炎癥，因此肺臟充血、腫大，濕重增加，而由于氣道的高反應(yīng)性，大鼠吸收障礙，營(yíng)養(yǎng)不足，故而體質(zhì)量下降，所以肺指數(shù)增高。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，支氣管哮喘屬中醫(yī)學(xué)“哮證”、“喘證”等范疇，其基本病理因素是痰濁內(nèi)停（即夙根），其發(fā)作是因?yàn)橥庑坝|動(dòng)伏痰，痰隨氣升，氣因痰阻，痰氣交阻，壅塞氣道，肺管因而狹窄所致。平喘湯是以三子養(yǎng)親湯和三拗湯為基礎(chǔ)方，加減而成。三子養(yǎng)親湯出自《韓氏醫(yī)通》，由蘇子、萊菔子、白芥子組成，《本朝綱目》謂之有“利氣豁痰，除寒暖中，消腫止痛”之功效。有研究認(rèn)為，痰濁內(nèi)停與支氣管哮喘的氣道炎癥以及相關(guān)炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子有關(guān)。三子養(yǎng)親湯化痰實(shí)際上就是減輕氣道炎癥，改善氣道高反應(yīng)性。三拗湯源自《太平惠民和劑局方》，具宣肺解表，止咳平喘之效。平喘湯方中麻黃入肺經(jīng)，可外開(kāi)皮毛之郁閉，暢通肺氣，善于平喘；杏仁味苦降瀉，能肅降兼宣發(fā)肺氣而能止咳平喘；兩藥相配，能降瀉上逆之肺氣，而起到平喘的作用。葶藶子專泄肺中水飲及痰火而平喘；五味子上斂肺氣，下滋腎陰，為治療久咳虛喘的要藥。枳殼聯(lián)合桔梗主治痰滯胸痞，地龍、僵蠶有通絡(luò)解痙平喘的作用?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為，麻黃含麻黃堿和偽麻黃堿，均有緩解平滑肌痙攣的作用；杏仁含苦杏仁苷，可在下消化道分解后產(chǎn)生少量氫氰酸，能抑制咳嗽中樞，而起到鎮(zhèn)咳平喘的作用；僵蠶有抗組胺作用，可抑制氣道炎癥，降低氣道高反應(yīng)性。全方寒溫并用，降氣祛痰，止咳平喘。因此以高、中、低劑量平喘湯作用于哮喘大鼠模型后，病理可見(jiàn)各治療組淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)有不同程度減少，肺組織充血、水腫現(xiàn)象減輕，支氣管管壁和肺泡壁增厚程度減輕，少量嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管腔內(nèi)分泌物潴留減少，且高劑量組病理變化程度最為明顯；各治療組大鼠肺指數(shù)均低于哮喘組，有顯著差異，且平喘湯高劑量組低于中、低劑量組。說(shuō)明應(yīng)用高劑量的平喘湯對(duì)支氣管哮喘大鼠在降低氣道高反應(yīng)性、減輕氣道炎癥以及緩解氣道重構(gòu)等方面有積極的作用。

綜上所述，平喘湯尤其是高劑量的平喘湯，在降低氣道高反應(yīng)性、減輕氣道炎癥等方面有積極的作用，而平喘湯對(duì)支氣管哮喘發(fā)病過(guò)程中抑制杯狀細(xì)胞增殖、減輕氣道重構(gòu)等基于分子水平的作用機(jī)制，尚需更進(jìn)一步研究。

[1]呂國(guó)平，崔德健，郭英江，等.介紹一種建立大鼠哮喘模型的實(shí)驗(yàn)方法[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，1995，18（6）：377-378.

[2]王曉紅，楊牧祥，于文濤，等.溫陽(yáng)益氣平喘方對(duì)支氣管哮喘大鼠病理形態(tài)學(xué)的影響及一氧化氮和內(nèi)皮素的調(diào)節(jié)作用 [J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，29（5）：435-438.

[3]鐘南山.支氣管哮喘—基礎(chǔ)與臨床[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：249-250，342，438.