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    冰凍單采血小板復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的原因分析

    2011-06-09 03:40:14譚延偉宋俊榮王毅張亞平賈桂叢
    河北醫(yī)藥 2011年22期

    譚延偉 宋俊榮 王毅 張亞平 賈桂叢

    冰凍單采血小板具有良好的止血效果和升高血小板功效,不良反應(yīng)少,可以治療血小板減少或血小板功能障礙的各種疾病和外科手術(shù)等,但冰凍單采血小板的制備要求高、操作嚴(yán)格,同時(shí)復(fù)融時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀物而報(bào)廢,出現(xiàn)絮狀物的原因有纖維蛋白析出和血小板損傷,這兩個(gè)因素相互影響[1]。本文通過對冰凍單采血小板的復(fù)融情況進(jìn)行分析,總結(jié)可能出現(xiàn)絮狀物的原因及相應(yīng)的解決方法,從而減少冰凍單采血小板的報(bào)廢。

    1 對象與方法

    1.1 對象 河北省血液中心2002年5月至2011年5月的4238袋冰凍單采血小板。

    1.2 儀器和試劑 血細(xì)胞分離機(jī)MCS+,-80℃低溫冰箱,血小板恒溫振蕩保存箱,電熱恒溫水浴箱,PH-IA型恒溫循環(huán)解凍箱,血小板保護(hù)劑二甲基亞砜(DMSO)。

    1.3 方法

    1.3.1 選擇符合《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》的獻(xiàn)血者,應(yīng)用MCS+血細(xì)胞分離機(jī)及配套的管道器材,采集制備成新鮮機(jī)采血小板。從血小板留樣管的接口處按0.5 ml/min的速度緩慢加入DMSO,使其最終濃度達(dá)到5%,然后-80℃低溫冰箱冰凍保存,保質(zhì)期為1年。

    1.3.2 冰凍單采血小板的解凍 從-80℃低溫冰箱中取出冰凍單采血小板,檢查無誤后,迅速放入42℃的恒溫水浴箱中,并用雙手輕輕搖動(dòng)血袋,使冰凍單采血小板能迅速融化,4~7 min后取出。2010年12月改用恒溫循環(huán)解凍箱融化,設(shè)定溫度41℃、時(shí)間8 min,恒溫循環(huán)水浴自動(dòng)融化。融化后的血小板在日光燈下肉眼觀察無絮狀物、顏色為淡黃色、帶有云霧狀的、均勻一致的血小板混懸液為正常,可以發(fā)往臨床使用。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 4238袋冰凍單采血小板情況 有4238袋冰凍單采血小板復(fù)融,有3887袋已用于臨床,351袋出現(xiàn)絮狀物報(bào)廢,復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物比例為8.28%。2002年有9袋輕脂的冰凍單采血小板復(fù)融后4袋出現(xiàn)絮狀物;3袋采集不順利的冰凍單采血小板復(fù)融后2袋出現(xiàn)絮狀物。

    2.2 選擇采集24 h以內(nèi)和24 h以后的機(jī)采血小板冰凍,復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的比較 見表1。

    表1 采集24 h前后絮狀物比較

    2.3 用恒溫水浴箱手動(dòng)融化和恒溫循環(huán)解凍箱自動(dòng)融化出現(xiàn)絮狀物的比較 見表2。

    表2 不同融化方法絮狀物比較

    2.4 機(jī)采血小板的冰凍保存溫度 幾年間由于外界原因造成低溫冰箱幾次大的溫度變化,冰凍血小板復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的比較。見表3。

    表3 不同水溫絮狀物比較

    3 討論

    根據(jù)冰凍單采血小板制備、保存、融化過程及冰凍單采血小板本身的特點(diǎn),分析總結(jié)出現(xiàn)絮狀物的原因有。

    3.1 血小板供者因素 脂肪血的機(jī)采血小板和靜脈穿刺不順利的機(jī)采血小板冰凍復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。這有可能是脂肪顆粒影響藥物對血小板的冰凍保護(hù),同時(shí)也影響血小板的冰凍速度、激活血小板的凝集功能、損傷破壞了血小板。目前血液中心已在采集前的血標(biāo)本化驗(yàn)時(shí)選擇無脂血的合適供血者。

    3.2 冰凍單采血小板加入DMSO的速度和濃度 DMSO是一種強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑,以原型通過腎臟或以硫化物的形式經(jīng)肝臟排出體外。有報(bào)道和實(shí)驗(yàn)證實(shí),隨著DMSO濃度的增加,DMSO對血小板的聚集功能的抑制逐漸增加,當(dāng)DMSO的濃度達(dá)5%時(shí),聚集功能抑制顯著,其聚集強(qiáng)度接近零[2],從而在一定程度上減少了血小板的損傷和活化。DMSO加入過快可以使局部高熱,可導(dǎo)致血漿蛋白變性,使血小板聚集和激活;同時(shí)DMSO進(jìn)入血小板細(xì)胞內(nèi)過快,使血小板的膜內(nèi)外滲透壓急速變化,會(huì)對血小板膜造成化學(xué)性損傷,使冰凍血小板復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。因此在加入DMSO時(shí),速度要慢,一邊加藥一邊充分搖動(dòng)血袋,避免局部過熱和血小板的損傷。

    3.3 機(jī)采血小板采集后選擇冰凍時(shí)間 血小板在體外保存過程中,其數(shù)量、形態(tài)、生化和功能均會(huì)發(fā)生變化,這種變化稱為保存損傷。其原因是保存過程中血小板被激活及血小板發(fā)生能量代謝障礙所致。有實(shí)驗(yàn)表明,盡管保存5 d的血小板與0 d的血小板計(jì)數(shù)沒有明顯差異,但隨著保存時(shí)間的延長,血小板的活性在逐漸改變,保存期末血小板的PH值下降顯著,LDH水平逐漸增高,血小板凋亡數(shù)逐漸增加,CD62P的表達(dá)也逐漸增高[3],因?yàn)檠“迨菬o核細(xì)胞,在儲存中是無氧代謝,以分解葡萄糖供能產(chǎn)生LDH和CO2,使pH值下降,不利于血小板的存活[4]。因此血小板冰凍前保存時(shí)間不宜太長,否則易造成血小板的代謝性損傷,若再冰凍保存,復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。

    3.4 機(jī)采血小板的冰凍保存溫度 幾年來通過實(shí)踐觀察,冰凍單采血小板時(shí)一次不要冰凍太多,在低溫冰箱放置時(shí),袋與袋之間要有間隙,要保持水平放置,否則會(huì)影響血小板的降溫速率,尤其是在血小板的袋內(nèi)溫度達(dá)到-15℃ ~-40℃時(shí),不同的降溫速率對冰凍血小板的影響最大,其中-0.5℃/min~-4℃/min的降溫速率對血小板的損傷最?。?]。冰凍血小板時(shí)加入的DMSO能迅速進(jìn)入血小板的細(xì)胞內(nèi),保護(hù)血小板使得血小板細(xì)胞內(nèi)冰晶形成溫度在-35±4℃,若保存溫度波動(dòng)較大,血小板胞內(nèi)冰晶反復(fù)形成對血小板造成機(jī)械性損傷,導(dǎo)致復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。因此儲存冰凍血小板過程中,不能隨意改變保存溫度,只有恒定的溫度(-80±4℃)才是保證血小板質(zhì)量的關(guān)鍵[6]。

    3.5 冰凍單采血小板的復(fù)融溫度 有資料顯示,冰凍單采血小板的融化溫度控制在37~42℃之間為宜[1],用恒溫水浴箱融化冰凍血小板時(shí),雙手拿著血袋兩端輕輕搖動(dòng),水浴箱內(nèi)的水要足量多,以利于冰凍血小板盡快融化,在此期間切忌用手指捏搓血袋,以免損傷血小板。如果水浴箱溫度太低,則會(huì)延長融化時(shí)間,增加血小板的損傷和激活;溫度太高,則造成血漿蛋白變性和血小板的破壞。復(fù)融過程慢或溫度太低,都可能導(dǎo)致冰晶形成而影響血小板的質(zhì)量,造成絮狀物[7]。改用恒溫循環(huán)解凍箱自動(dòng)融化,可確保溫度的恒定,降低絮狀物的發(fā)生。

    3.6 其他因素 在實(shí)踐工作中發(fā)現(xiàn),冰凍單采血小板融化后需用保溫設(shè)備運(yùn)輸并盡快輸注,特別是在冬季,復(fù)融后的機(jī)采血小板不要和溫度低的金屬桌面、器皿等物品接觸,否則易出現(xiàn)絮狀物;制備冰凍血小板的血袋規(guī)格,用容量為600 ml和1000 ml的血袋制備的冰凍單采血小板,復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的比例分別為7/50和1/60。這可能是由于血袋的容量大,在冰凍過程中表面積大,降溫速率快,使血小板順利通過其敏感溫度區(qū)域,而在復(fù)融時(shí)接觸水浴面積亦大,融化時(shí)間短,對血小板的損傷小,因此復(fù)融后不易出現(xiàn)絮狀物;低溫冰箱存貯量大和冰箱周圍溫度高、空氣不流暢時(shí),低溫冰箱降溫速率慢,出現(xiàn)絮狀物幾率亦會(huì)增加。

    總之,制備高質(zhì)量的冰凍單采血小板,血源的篩選、血小板的采集是基礎(chǔ),DMSO的加入技術(shù)、血小板冰凍時(shí)間的選擇、冰凍保存和融化血小板的溫度是關(guān)鍵,復(fù)融是否成功是結(jié)果。

    1 丁國良,趙樹華,伍珍,等.冰凍血小板中出現(xiàn)絮狀物的原因分析.臨床輸血與檢驗(yàn),2004,6:114-116.

    2 賴東生,陳岑.二甲基亞砜(DMSO)對血小板體外聚集功能的影響.中國輸血雜志,2004,17:446.

    3 聶詠梅,付涌水,江朝富,等.云南昆明血液中心常溫保存期血小板的數(shù)量及功能變化.中國輸血雜志,2005,18:209-210.

    4 紀(jì)云鵬,唐榮才,蔡莉,等.冰凍機(jī)采血小板的質(zhì)量觀察.臨床輸血與檢驗(yàn),2005,17:278-279.

    5 劉小雯.溫度波動(dòng)對血小板冰凍質(zhì)量的影響.臨床輸血與檢驗(yàn),2003,5:129.

    6 劉景漢,歐陽錫林,等.低溫保存的血小板胞內(nèi)冰晶形成溫度測定.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2002,10:574.

    7 張燕愛,王長今.冰凍單采血小板復(fù)融出現(xiàn)絮狀物凝塊情況分析.鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,6,25:160.

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