楊黃菌絲體純培養(yǎng)條件優(yōu)化模式的研究1）

張躍新，胡偉，閆寶松，馬鳳

（黑龍江省林副特產研究所，黑龍江省非木質林產品研發(fā)重點實驗室，黑龍江 牡丹江 157011）

楊黃（PhellinusvaniniiLjup），隸屬擔子菌綱、非褶菌目、銹革孔菌科、木層孔菌屬。楊黃是兼性腐生菌，自然界中只生長在山楊（Populusdavidiana）和香楊（Populuskoreana）活立木、樹樁或倒木上。由于市場需求緊俏，產地進行掠奪性開采，目前野生資源破壞嚴重，自然恢復面臨困難，而且因其對生長環(huán)境的特定要求，現人工培育尚未取得突破性進展。楊黃生物學特性的研究顯得尤為重要。本文對楊黃純培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，為楊黃生物學特性的研究打下前期基礎。

1 供試材料

供試培養(yǎng)基：葡萄糖20g，馬鈴薯20g，瓊脂粉20g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，水1000mL；

供試菌株：楊黃8號菌株（野生）。

2 試驗方法

2.1 不同碳源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

用乳糖、木糖、可溶性淀粉、甘露糖、果糖、甘露醇、山梨醇、麥芽糖、蔗糖替代培養(yǎng)基中的葡萄糖，制作培養(yǎng)皿，每組重復5次，在28℃下暗光培養(yǎng)，測量菌絲生長速度及生長10天后的菌絲干重。

2.2 不同氮源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

用麥麩、谷氨酸、硫酸銨、酵母、玉米、天門氨酸、甘氨酸、酒、豆餅粉、硝酸銨替代培養(yǎng)基中的馬鈴薯，制作培養(yǎng)皿，每組重復5次，在28℃下暗光培養(yǎng)，測量菌絲生長速度及生長10天后的菌絲干重。

2.3 不同無機鹽對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

用氯化鈣、硫酸銅、硫酸鋅、氯化錳替代培養(yǎng)基中的硫酸鎂，制作培養(yǎng)皿，每組重復5次，在28℃下暗光培養(yǎng)，測量菌絲生長速度及生長10天后的菌絲干重。

2.4 三元二次通用旋轉組合實驗設計

采用三元二次通用旋轉組合設計，以最佳碳源、最佳氮源、最佳無機鹽為因素，以菌絲干重（Y）為目標函數，三元二次通用旋轉組合試驗設計因素編碼見表1，試驗設計如表2，數據分析采用dPs軟件中的回歸分析法。

表1 編碼水平

3 結果分析

3.1 不同碳源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

圖1 不同碳源對楊黃菌絲生長速度的影響

圖2 不同碳源對菌絲體干重的影響

由圖1可知，楊黃8號在10種培養(yǎng)基上均可生長，但在添加甘露糖的培養(yǎng)基上生長速度最快，在添加山梨醇、果糖、葡萄糖、甘露醇、可溶性淀粉的培養(yǎng)基上生長速度其次，在添加麥芽糖、蔗糖、木糖、乳糖的培養(yǎng)基上生長速度最慢；由圖2可知，楊黃8號在添加葡萄糖的培養(yǎng)基上菌絲干重最大，在添加甘露糖、麥芽糖的培養(yǎng)基上菌絲干重其次，在添加其余碳源的培養(yǎng)基上菌絲干重最小。綜合圖1與圖2可知，楊黃在添加甘露糖的培養(yǎng)基上菌絲生長速度最快，但菌絲干重不是最大；楊黃在添加葡萄糖的培養(yǎng)基上菌絲生長速度較快，菌絲干重最大。以菌絲干重為選擇條件，則葡萄糖為楊黃菌絲生長的最佳碳源。

3.2 不同氮源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

圖3 不同氮源對楊黃菌絲生長速度的影響

圖4 不同氮源對菌絲體干重的影響

由圖3可知，楊黃8號在10種培養(yǎng)基上均可生長，但在添加天門氨酸的培養(yǎng)基上生長速度最快，在添加玉米、豆餅粉、谷氨酸、酵母、麥麩的培養(yǎng)基上生長速度其次，在添加酒、硝酸銨、硫酸銨、甘氨酸的培養(yǎng)基上生長速度最慢；由圖4可知，楊黃8號在添加麥麩的培養(yǎng)基上菌絲干重最大，在添加豆餅粉的培養(yǎng)基上菌絲干重其次，在添加天門氨酸的培養(yǎng)基上菌絲干重較添加豆餅粉的培養(yǎng)基上菌絲干重小，在添加其余氮源的培養(yǎng)基上菌絲干重最小。綜合圖3與圖4可知，楊黃的最佳氮源為麥麩，楊黃在添加麥麩的培養(yǎng)基上菌絲生長速度較快，菌絲干重最大。

3.3 不同無機鹽對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

圖5 不同無機鹽對楊黃菌絲生長速度的影響

圖6 不同無機鹽對菌絲體干重的影響

由圖5可知，楊黃8號在10種培養(yǎng)基上均可生長，但在添加氯化錳、硫酸鎂、氯化鈣的培養(yǎng)基上生長速度最快，在添加硫酸鋅、硫酸銅的培養(yǎng)基上生長速度最慢；由圖6可知，楊黃8號在添加硫酸鎂的培養(yǎng)基上菌絲干重最大，在添加氯化鈣的培養(yǎng)基上菌絲干重其次，在添加氯化錳的培養(yǎng)基上菌絲干重較添加氯化鈣的培養(yǎng)基上菌絲干重小，在添加其余無機鹽的培養(yǎng)基上菌絲干重最小。綜合圖5與圖6可知，楊黃的最佳無機鹽為硫酸鎂，楊黃在添加硫酸鎂的培養(yǎng)基上菌絲生長速度最快，菌絲干重最大。

由試驗可知，楊黃的最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為麥麩，最佳無機鹽為硫酸鎂。

3.4 三元二次通用旋轉組合實驗結果

表2 三元二次通用旋轉組合菌絲干重

以最佳碳源、最佳氮源、最佳無機鹽為因素，X1、X2、X3分別表示葡萄糖、麥麩、硫酸鎂，以菌絲干重（Y）為目標函數，數據分析采用dPs軟件中的回歸分析法，經數據分析建立它們的關系模型：

表3 大于0.54的64個方案中各變量取值的頻率分布

表4 最高值的各個因素組合

由表3、表4可知，最佳培養(yǎng)基配方應為：馬鈴薯2g／100mL，瓊脂粉2g／100mL，葡萄糖3.0g／100mL，麥麩1.5g／100mL，硫酸鎂0.2g／100mL，磷酸二氫鉀0.3 g／100mL，可得楊黃菌絲體干重1.29g／100mL。

4 結論

通過不同碳源、氮源、無機鹽對楊黃菌絲體的影響實驗得到最佳碳源、氮源、無機鹽，通過三元二次通用旋轉組合實驗進行了純培養(yǎng)模式條件的優(yōu)化實驗，得到了楊黃純培養(yǎng)模式條件下的最佳培養(yǎng)基配方，在此配方下可得楊黃菌絲體干重1.29g／100mL。

[1]胡偉，王春生，張晶.楊黃代用料栽培初探[J].中國林副特產，2007（01）.

[2]戴玉成.一種新的藥用真菌——瓦尼木層孔菌（楊黃）[J].中國食用菌，2003（05）.1）黑龍江省森林工業(yè)總局青年基金項目（sgzJQ201003）