豬鼠傷寒沙門氏菌的分離與鑒定

張 琦 付明哲 陳曉霖

（1.陜西出入境檢驗檢疫局，西安 710068；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)，楊凌 712100）

1 材料與方法

1.1 實驗材料

普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊脫纖鮮血瓊脂平板、普通肉湯、三糖鐵斜面、各種糖發(fā)酵管均按《獸醫(yī)微生物學(xué)實驗實習(xí)指導(dǎo)》制備；藥敏紙片購自杭州某微生物試劑有限公司；新潔爾滅、84消毒液均購自市場；小白鼠由西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.2 細菌分離和培養(yǎng)

無菌采取病死豬的肺臟、肝臟、脾臟等病料涂片，革蘭染色鏡檢。然后用采集的病料無菌操作連續(xù)劃線接種普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊脫纖鮮血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24 h，從中分離到1株可疑細菌，再接種到普通平板、麥康凱瓊脂平板，以進一步純化細菌，經(jīng)過涂片和革蘭染色鏡檢后接種到普通斜面，37℃培養(yǎng)24 h，4℃保存菌株待用。

1.3 生化和生物學(xué)特性試驗

生化試驗和生物學(xué)特性的的測定按參考文獻［1，2，3］介紹的方法進行。將普通斜面上的純細菌分別接種到各種生化試驗管及普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊脫纖鮮血瓊脂平板、普通肉湯。

1.4 抗生素敏感性試驗

將37 ℃，24 h肉湯培養(yǎng)物計數(shù)，其菌量（含3億個/ml）；鏡檢革蘭染色觀察純度，再用滅菌棉簽將普通肉湯培養(yǎng)物涂抹于普通瓊脂平板，將藥敏紙片壓貼于普通瓊脂平板上，4 ℃放置2 h，然后在37 ℃下培養(yǎng)24 h，最后通過測定抑菌圈的大小來判斷細菌對藥物的敏感性。

1.5 動物致病性試驗

將37℃，24h肉湯培養(yǎng)物計數(shù)，其菌量（含3億個/毫升）；鏡檢革蘭染色觀察純度，用純菌給實驗組小白鼠腹腔注射0.2ml/只；對照組小白鼠注射等量肉湯。

1.6 消毒劑滅活試驗

分別將新潔爾滅和84消毒液配成1%、3%、5%濃度溶液，再將37 ℃，24 h肉湯培養(yǎng)物計數(shù)，其菌量（含3×108億個/ml）；鏡檢革蘭染色觀察純度，經(jīng)稀釋（含3×107個/ml），接0.1 ml肉湯培養(yǎng)物分別于不同濃度的消毒液溶液中，在25 ℃下作用3 min、5 min、10 min，最后將各濃度消毒劑溶液的細菌接種到普通瓊脂平板于37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。

2 試驗結(jié)果

2.1 分離菌的生物學(xué)特性

革蘭陰性，小球桿菌，散在排列，無芽孢，無莢膜，周生鞭毛。普通瓊脂平板、麥康凱平板上生長良好。普通瓊脂平板上菌落中等大小、圓形、邊緣整齊、微凸起、濕潤、表面光滑、乳白色；麥康凱平板上菌落中等大小，無色透明，圓形、微凸起、濕潤、表面光滑，邊緣整齊；綿羊脫纖鮮血瓊脂平板上菌落中等大小、白色凸起、不溶血、邊緣整齊；在普通肉湯中呈一致混濁性生長；三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基斜面變紅，底層產(chǎn)酸產(chǎn)氣，沿穿刺線生長，H2S陽性。

2.2 生化試驗

詳見表1。

表1 分離菌生化試驗

2.3 藥敏試驗

詳見表2。從表2可以看出，分離菌對抗生素高度敏感（抑菌環(huán)直徑≥16 mm）：先鋒噻肟、菌必治、呋喃妥因、頭孢呋肟、復(fù)達欣、環(huán)丙沙星、先鋒必、阿米卡星、氧氟沙星、氟哌酸、妥布霉素；中度敏感（16 mm＞抑菌圈直徑≥3 mm）：頭孢拉定、利福平、氯霉素、頭孢唑林、卡那霉素、四環(huán)素；不敏感（沒有抑菌圈或抑菌圈直徑＜2 mm）：萬古霉素、青霉素G、鏈霉素、復(fù)方新諾明、紅霉素、氨芐青霉素、慶大霉素、苯唑青霉素。

表2 分離菌藥敏試驗

2.4 動物致病試驗

實驗組小白鼠注射后24 h后活動減慢，呼吸變快，毛直立，36 h后死亡。從死鼠肝臟分離到感染菌，對照組無死亡。

2.5 消毒劑滅活試驗

接0.1 ml稀釋肉湯培養(yǎng)物（3×107個/毫升）分別于不同濃度等量的消毒液溶液中，在25 ℃下作用3 min、5 min、10 min后，鼠傷寒沙門氏菌失去活性。

3 小結(jié)與討論

（1）經(jīng)生化試驗、生物學(xué)特性觀察證實所分離的細菌為鼠傷寒沙門氏菌。先鋒噻肟、菌必治、呋喃妥因、頭孢呋肟等抗生素臨床首選對該菌所引起的豬病進行治療?；瘜W(xué)消毒劑可以在短時間內(nèi)可以殺死鼠傷寒沙門氏菌。

（2）從此病料還分離出表皮葡萄球菌和革蘭陽性芽孢桿菌，再未分離出其他細菌。本實驗室未進行厭氧菌的分離培養(yǎng)、病毒的分離培養(yǎng)及寄生蟲的檢驗。是否有其他病原微生物及其他原因引起豬發(fā)病死亡，還有待進一步研究。

（3）豬鼠傷寒沙門氏菌通常寄生在動物消化道內(nèi)，形成健康動物的帶菌現(xiàn)象，豬在生長過程中受到其他不利因素的影響，造成抵抗力降低可以發(fā)病。沙門菌血清型有2020種以上[4]，用弱毒活苗預(yù)防存在著一定的難度且預(yù)防效果不理想。建議有條件的研究室用本場分離菌株制成“自家菌”滅活疫苗，如鋁膠佐劑滅活疫苗、油佐劑滅活疫苗和蜂膠佐劑滅活疫苗等來預(yù)防豬傷寒沙門氏菌病。

（4）豬鼠傷寒沙門氏菌病是人獸共患病，可以引起人類食物中毒[5]，該菌的檢出具有流行病學(xué)的重要意義。

[1]陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009

[2]李六金，李健強.獸醫(yī)微生物學(xué)實驗實習(xí)指導(dǎo).西安：陜西科技出版社，1999

[3]陶天申等.原核生物系統(tǒng)學(xué).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，生物·醫(yī)藥出版分社，2007

[4]張耀相等.豬傷寒沙門氏菌的分離與鑒定.黑龍江畜牧獸醫(yī).2003

[5]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2008