西替?zhèn)温榫忈屍谥袊?guó)志愿者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

胡岳江，張志濤，蔣志文

(1.浙江省永康市第一人民醫(yī)院，浙江 金華 321300; 2.蚌埠醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，安徽 蚌埠 233030)

西替?zhèn)温榫忈屍怯晌魈胬?cetirizine)和偽麻黃堿(pseudoephedrine)組成的復(fù)方緩釋制劑，用于治療過敏性鼻炎。西替利嗪和偽麻黃堿聯(lián)合應(yīng)用，療效明顯優(yōu)于單獨(dú)給藥，且耐受性良好[1-3]。本品為雙層片，西替利嗪(5 mg/片)在速釋層，常規(guī)釋放;偽麻黃堿(120 mg/片)在緩釋層，緩慢釋放;這種新型制劑可有效增加臨床治療的依從性，但人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的系統(tǒng)研究尚未深入進(jìn)行。筆者采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的濃度，在單次口服中、高劑量和多次給藥后，對(duì)西替?zhèn)温榫忈屍谥袊?guó)健康志愿者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行研究，為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

TSQ Quantum Ultra AM型液質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)Thermo Finnigan公司)，ESI離子源，Xcalibur 1.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。西替?zhèn)温榫忈屍?批號(hào)為040618，每片含鹽酸西替利嗪5 mg、鹽酸偽麻黃堿120 mg)，鹽酸西替利嗪對(duì)照品(批號(hào)為040618)由蘇州東瑞制藥有限公司提供;鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)為1237-200002)和卡馬西平對(duì)照品(批號(hào)為0142-9503)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;甲醇為色譜純，乙酸銨為分析純，水為自制重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 受試者選擇

選擇24名健康受試者，男女各半，年齡(20.6±1.8)歲，身高(164±5)cm，體重(60±7)kg，無煙酒嗜好，試驗(yàn)前2周未服用任何藥物，試驗(yàn)前經(jīng)詢問病史、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。試驗(yàn)方案經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均自愿簽署知情同意書。

2.2 樣品采集

單次給藥∶設(shè)中、高劑量試驗(yàn)組，選定的24名健康志愿者隨機(jī)入組，每組12名，采用平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別口服樣品1片或2片。服藥前受試者禁食過夜(10 h以上)，于次日早晨7:30空腹給予樣品，用 200 mL溫開水送服。分別于服藥前和服藥后0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，5，6，8，10，12，14，16，24，36 h 時(shí)從肘靜脈采血 3 mL，置含有肝素的離心管中，立即離心，分離出血漿，置-20℃冰箱中保存至測(cè)定。

多次給藥∶單次給藥結(jié)束1周后，中劑量組12名受試者經(jīng)體格檢查證明正常，繼續(xù)進(jìn)行多次連續(xù)給藥研究。志愿者試驗(yàn)期間統(tǒng)一入住Ⅰ期病房，于每日7:30和19:30，分別口服樣品1片，服藥后2 h可適量飲水，4 h統(tǒng)一進(jìn)清淡飲食，連續(xù)給藥5 d。從第3天起，于每日清晨服藥前采集血樣，連續(xù)3次，確認(rèn)達(dá)到穩(wěn)態(tài)，于次日早上7:30服藥后從肘靜脈采血3 mL，取血時(shí)間同單次給藥。血樣置含有肝素的離心管中，離心，取血漿于-20℃儲(chǔ)存待測(cè)。

2.3 血漿樣品檢測(cè)

2.3.1 色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱∶Phenomenex苯基柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相∶甲醇-0.01 mol/L乙酸銨溶液(75∶25);流速∶1.0 mL/min;柱溫∶25℃;電噴霧離子化正離子SRM方式檢測(cè)，噴霧電壓為5.0 kV，毛細(xì)管溫度為350℃，源內(nèi)碰撞電壓(CID)為10 V，霧化氣流速為35 mL/min。用于定量的離子分別為西替利嗪 m/z∶母離子(M+H+)388.9→子離子 200.9;偽麻黃堿 m/z∶母離子(M+H+)166.0→子離子 147.9;內(nèi)標(biāo)卡馬西平 m/z∶母離子(M+H+)237.0→子離子194.0。在此條件下，西替利嗪、偽麻黃堿與內(nèi)標(biāo)及血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)分離良好(圖1)。

2.3.2 樣品處理

取血漿0.2 mL，置離心管中，加入1 000 μg/L內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，混勻;加入甲醇0.8 mL，渦旋混勻，以12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，吸取上清液20 μL進(jìn)樣。

2.3.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線∶分別配制含西替利嗪 0.4，2.0，4.0，8.0，20.0，40.0，80.0，150.0，300.0，600.0 μg/L，含偽麻黃堿 1，5，10，20，50，100，200，400，800，1 600 μg/L 的系列血漿樣品，按 2.3.2 項(xiàng)操作并測(cè)定。以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值(R)對(duì)血藥濃度(C)用加權(quán)法(W=1/C2)進(jìn)行線性回歸，得西利替嗪和偽麻黃堿的回歸方程分別為 R=0.004 95C+0.000666(r=0.999)和 R=0.002 60C-0.000 013(r=0.999)。

精密度與準(zhǔn)確度∶分別配制含西替利嗪2，40，300 μg/L和含偽麻黃堿 5，100，800 μg/L 的血漿樣品(低、中、高質(zhì)量濃度)，按2.3.2項(xiàng)下操作，記錄色譜圖，計(jì)算西替利嗪、偽麻黃堿峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值 R，代入當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求得實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，由實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度計(jì)算批內(nèi)與批間精密度。結(jié)果見表1。

回收率∶分別取含西替利嗪和偽麻黃堿高、中、低質(zhì)量濃度的樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)行5個(gè)樣本分析。同時(shí)另取相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，以空白血漿經(jīng)甲醇沉淀蛋白處理后的上清液稀釋至相應(yīng)濃度，渦旋混勻后進(jìn)樣分析，以每個(gè)質(zhì)量濃度兩種處理方法的峰面積比值計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 精密度與準(zhǔn)確度、回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=15)

穩(wěn)定性∶取空白血漿0.2 mL，分別配制高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品，考察西替利嗪和偽麻黃堿血漿樣品室溫放置12 h、-20℃放置1周、經(jīng)歷3次冷凍解凍循環(huán)以及經(jīng)沉淀蛋白處理后的血漿樣品室溫放置5 h的穩(wěn)定性，測(cè)得值與新配制的QC樣品值進(jìn)行比較。結(jié)果顯示 RSD均小于15%，表明西替利嗪和偽麻黃堿在上述條件下均穩(wěn)定。

2.4 血藥濃度－時(shí)間曲線

采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分別測(cè)定口服西替?zhèn)温榫忈屍?片、2片和每天2片連續(xù)給藥5 d后各組的平均血藥濃度-時(shí)間曲線，見圖2。

圖2 口服給藥后平均血藥濃度-時(shí)間曲線(n=12)

2.5 數(shù)據(jù)處理與藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

將志愿者單次給藥和多次給藥后的血藥濃度列表，計(jì)算均值及標(biāo)準(zhǔn)差，繪制平均血藥濃度-時(shí)間曲線，計(jì)算主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。峰濃度(Cmax)和達(dá)峰時(shí)間(Tmax)用實(shí)測(cè)值表示;藥時(shí)曲線下面積 AUCss，AUC0－t用梯形法計(jì)算，AUC0-∞按公式計(jì)算，AUC0-∞=AUC0－t+Ct/λz，其中 t是最后一次可測(cè)濃度的取樣時(shí)間，Ct是測(cè)定的最后時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，λz是末端消除速率常數(shù);平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度(Cav)可按公式計(jì)算，Cav=AUCss/τ，其中 τ是給藥間隔時(shí)間(12 h);消除速率常數(shù)(ke)和半衰期(t1/2)、清除率(CL)、表觀分布容積(Vd)等其他藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)均由DAS 2.0軟件處理而得。采用方差分析比較多次給藥組與單次給藥組藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，評(píng)價(jià)西替利嗪和偽麻黃堿在該制劑中的藥代動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果見表2。多次給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)后，西替利嗪和偽麻黃堿的 Cav分別為(135.6±23.4)μg/L和(417.9±126.0)μg/L，穩(wěn)態(tài)血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUCss)分別為(1 626.7±280.8)μg·h/L和(5 015.0±1 511.8)μg·h/L，蓄積系數(shù)(R)分別為 1.3±0.1和 1.2±0.1，波動(dòng)度(DF)分別為1.3±0.2和0.7±0.2。

3 討論

目前，同時(shí)測(cè)定人血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的方法報(bào)道較少，最近的兩篇文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道了直接沉淀蛋白后的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，但文獻(xiàn)[4]中樣品分析時(shí)間長(zhǎng)達(dá)12 min，而文獻(xiàn)[5]中采用梯度洗脫影響了方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。本試驗(yàn)建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定受試者服用西替?zhèn)温榫忈屍蟛煌瑫r(shí)間血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的質(zhì)量濃度，與已報(bào)道方法[4-5]相比，靈敏度更高，西替利嗪和偽麻黃堿的最低定量質(zhì)量濃度分別為0.4 μg/L和1 μg/L，并且將分析時(shí)間縮短為6 min左右，提高了分析效率。

表2 口服給藥后西替利嗪和偽麻黃堿的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(X ± s，n=12)

本品臨床用量為每天2次、每次1片，其中西替利嗪在速釋層，偽麻黃堿在緩釋層，如拆分后給藥，影響緩釋部分的吸收特征，不易設(shè)計(jì)低于臨床劑量的劑量組。因此，本臨床試驗(yàn)方案中單次給藥設(shè)中、高劑量試驗(yàn)組，分別口服西替?zhèn)温榫忈屍?片或2片。結(jié)果表明，單次給藥后西替利嗪和偽麻黃堿的 Cmax和 AUC隨給藥劑量的增加而成比例增大，ke，t1/2，Tmax，CL等經(jīng)DAS 2.0軟件分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。多次給藥與單次給藥(中劑量組)比較，西替利嗪和偽麻黃堿的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)基本一致，蓄積系數(shù) R接近1，說明藥物在健康受試者體內(nèi)基本無蓄積現(xiàn)象。與鹽酸偽麻黃堿的普通復(fù)方制劑[6-7]的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較，受試制劑中鹽酸偽麻黃堿的 Tmax延長(zhǎng)，Cmax降低，波動(dòng)度 DF減小，表明西替?zhèn)温榫忈屍袀温辄S堿具有明顯的緩釋特征。

毛金銀等[8]曾報(bào)道，進(jìn)食高脂肪、高蛋白食物會(huì)影響西替利嗪的 Cmax和 Tmax，而對(duì)偽麻黃堿的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)基本無影響。本試驗(yàn)單、多次給藥所得的西替利嗪藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與該文獻(xiàn)中禁食狀態(tài)下的參數(shù)基本一致，而偽麻黃堿的 Cmax和 AUC偏大，可能與制劑的制備技術(shù)有關(guān)。

西替?zhèn)温榫忈屍某Ｒ姴涣挤磻?yīng)為口干、失眠、頭痛、嗜睡、無力和神經(jīng)過敏[3]。整個(gè)試驗(yàn)期間，24名受試者無一例因不良反應(yīng)終止試驗(yàn)，所有的實(shí)驗(yàn)室及心電圖檢查均無異常，說明受試制劑在試驗(yàn)劑量下具有良好的耐受性和安全性。

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