久積膏的定性定量方法研究

黃愛群 何德志

久積膏系由芥子、桂枝、石菖莆、防風(fēng)、獨(dú)活、生川烏、生草烏等藥研制而成的外用軟膏，為醫(yī)院新制劑。功能祛濕散寒、活絡(luò)舒筋、行瘀止痛。主治關(guān)節(jié)腫痛、筋骨不利、寒濕瘀聚。為了有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，采用薄層層析法對(duì)本品中的芥子、桂枝、石菖蒲進(jìn)行了薄層鑒別和烏頭堿的限量檢查;采用水蒸氣蒸餾法測(cè)定了本品揮發(fā)油的含量［1，2］。

1 儀器與試液

ZF-2 g型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠);桂皮醛對(duì)照品(批號(hào):111710-200513)、石菖蒲對(duì)照藥材(批號(hào):121098-200403)、芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品(批號(hào):111702-200501)、烏頭堿對(duì)照品(批號(hào):110720-200410)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;化學(xué)試劑均為分析純;久積膏由本院制劑室提供，批號(hào):090315、090318、090321。

2 薄層鑒別［3，4］

2.1 桂枝 取本品50 g，照揮發(fā)油測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄X D甲法)蒸餾，自測(cè)定器上端加入乙酸乙酯1 ml，緩緩加熱至沸，并保持微沸約2 h，放冷，分取乙酸乙酯層，作為供試品溶液。按處方量稱取除芥子外的其他藥材，另取桂皮醛對(duì)照品加乙酸乙酯制成每1 ml含1μl的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方量稱取除桂枝外的其他藥材，照制備工藝的方法制成缺桂枝的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成缺桂枝的陰性溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液2μl，供試品溶液及陰性樣品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。

2.2 石菖蒲 取石菖蒲對(duì)照藥材0.5 g，按桂枝供試品方法制備成對(duì)照藥材溶液。按處方量稱取除石菖蒲外的其他藥材，照制備工藝的方法制成缺石菖蒲的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成缺石菖蒲的陰性溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取桂枝鑒別項(xiàng)下的供試品溶液及石菖蒲陰性樣品溶液各10μl，對(duì)照藥材溶液3～5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60℃ ～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾。

2.3 芥子 取本品20 g加50%乙醇50 ml，加熱回流30 min，取出，立刻冷卻，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方量稱取除芥子外的其他藥材，按照制備工藝的方法制成缺芥子的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成缺芥子的陰性溶液。按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10～15μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性無干擾。

3 烏頭堿的限量檢查

3.1 展開劑的選擇 選用4種展開系統(tǒng)分別對(duì)烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品和久積膏進(jìn)行展開，展開系統(tǒng)分別為:①乙醚-氯仿-甲醇(1∶2∶1)。②氯仿-甲醇-水(65∶15∶10)下層。③甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(5∶2∶1)。④甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)。以上4種展開系統(tǒng)展開后均噴以稀碘化鉍鉀試液，觀察圖譜可知，4種展開劑對(duì)烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品均可順利展開，但展開劑①、展開劑②、展開劑③中久積膏分離效果不好，展開劑④的分離效果好。

3.2 烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)檢出限量的確定 照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取烏頭堿對(duì)照品溶液 1、3、5、7、9 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。3μl橘紅色斑點(diǎn)較淺，7μl橘紅色斑點(diǎn)較深，所以烏頭堿對(duì)照品溶液點(diǎn)樣量確定為5μl。

3.3 烏頭堿限量的確定 取供試品(15 g→2 ml)1、3、5、7、9 μl，與標(biāo)準(zhǔn)品5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:當(dāng)點(diǎn)樣量增至5μl時(shí)，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)，小于對(duì)照品的斑點(diǎn)，即檢出限量在5μg以下。

3.4 烏頭堿的限量檢查 取本品15 g，加濃氨試液10 ml，攪勻，加甲醇100 ml，加熱回流30 min，取出，立即冷卻，濾過，容器及濾渣用甲醇30 ml洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘?jiān)欲}酸溶液(4→100)50 ml分次溶解，合并鹽酸提取液，濾入分液漏斗中，容器及濾渣用鹽酸(4→100)30 ml洗滌，洗液與濾液合并，用濃氨試液調(diào)pH至9～10，加入無水乙醚振搖提取3次，20 ml/次，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)訜o水乙醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取烏頭堿對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)，應(yīng)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)，或不出現(xiàn)斑點(diǎn)。

4 揮發(fā)油含量測(cè)定

按(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄X D甲法)測(cè)定，取本品60 g，加水300 ml，蒸餾5 h，計(jì)算揮發(fā)油的含量，并依法對(duì)三批產(chǎn)品進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果如下。

表1 久積膏中揮發(fā)油的測(cè)定

5 討論

5.1 本品為外用軟膏劑，含基質(zhì)約為80%，所以鑒別時(shí)，取樣量較大;桂枝、石菖蒲鑒別中采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油制備供試品，芥子鑒別中用50%乙醇提取制備供試品，能較好的將基質(zhì)與被鑒定的物質(zhì)分離。

5.2 本品中有生草烏、生川烏，所含的烏頭堿有極強(qiáng)的毒性，口服0.2 mg即出現(xiàn)中毒反應(yīng)［5］，為有效控制本品的質(zhì)量并確保其安全用藥，我們采用薄層層析法控制成品中烏頭堿的限量，經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定了最佳的提取方法和薄層展開系統(tǒng)，結(jié)果表明方法靈敏，重現(xiàn)性好，無干擾，可以用于控制本品中的烏頭堿限量檢查。烏頭堿屬雙酯類結(jié)構(gòu)的生物堿不穩(wěn)定，極易水解，所以烏頭堿對(duì)照品宜新鮮配制。

5.3 本品為外用制劑，處方中的防風(fēng)、石菖蒲、丁香、羌活、白芷、獨(dú)活、乳香、荊芥、桂枝所含揮發(fā)油在鎮(zhèn)痛、抗炎方面發(fā)揮了重要的作用，所以建立了本品揮發(fā)油的含量測(cè)定方法，經(jīng)三批樣品測(cè)定，質(zhì)量穩(wěn)定。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.1部.化學(xué)工業(yè)出版社，2005．

［2］ 王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994:202．

［3］ 陳德昌，魯靜，王寶琴.中藥化學(xué)對(duì)照品工作手冊(cè).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2000:117．

［4］ 呂武清.中成藥藥材薄層色譜鑒別.人民衛(wèi)生出版社，1997:98-151，356．

［5］ 王曉暉.關(guān)于《中國(guó)藥典》中烏頭堿限量檢查法改進(jìn).中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006，8(12):11.