肛愈寧軟膏對(duì)大鼠膿腫創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用

羅京藝，尚 毅，王 敏，朱東華

創(chuàng)面愈合是組織修復(fù)中的一個(gè)重要問(wèn)題。隨著對(duì)肛腸疾病治療手段的不斷完善，肛周膿腫大多能一期治愈，因此肛瘺的發(fā)病率大大降低。由于肛周膿腫術(shù)后創(chuàng)面處于開(kāi)放狀態(tài)，且經(jīng)常受糞便的污染，導(dǎo)致術(shù)后創(chuàng)面愈合緩慢。我們應(yīng)用肛愈寧軟膏對(duì)肛周膿腫術(shù)后創(chuàng)面進(jìn)行換藥，可明顯縮短創(chuàng)面的愈合時(shí)間。本研究旨在通過(guò)觀(guān)察大鼠膿腫模型創(chuàng)面的組織學(xué)變化，探討該中藥制劑促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 清潔級(jí)Wistar大鼠80只，雌雄各半，體質(zhì)量（220±20）g。隨機(jī)分為肛愈寧組、馬應(yīng)龍痔瘡膏組。每組40只。

1.2 主要儀器 MPIAS-500彩色病理圖文分析系統(tǒng)；自動(dòng)石蠟包埋機(jī)（德國(guó)Leitz公司）；石蠟切片機(jī)（德國(guó)Leitz公司）；光學(xué)顯微鏡及照相系統(tǒng)（日本Olympus公司）。

1.3 藥物 肛愈寧軟膏（聊城市第二人民醫(yī)院制劑室提供）配制:將白礬15 g，冰片15 g，麝香1 g，沒(méi)藥30g，乳香30g，樸硝60g，在-40℃狀態(tài)下粉碎成300目極細(xì)粉。將黃連45 g，白芨20g，白芷30g，置50g麻油中浸泡4 h，直火加熱，炸至外表枯黃，濾去藥渣。將凡士林40g在溫控80～100℃完全熔化，控溫120℃左右滅菌1 h，放冷至70～80℃，加入藥油中溶融，再加入粉碎的藥粉，不斷攪拌成軟膏狀。馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏由武漢馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供（10g/支；產(chǎn)品批號(hào):100471；藥準(zhǔn)字:Z42021920）。

1.4 動(dòng)物造模 參照有關(guān)文獻(xiàn)[1]的方法加以改進(jìn)，制造大鼠膿腫的動(dòng)物創(chuàng)面模型。創(chuàng)面造模:用1%鹽酸氯胺酮（3mL/kg）腹腔注射麻醉。局部備皮，常規(guī)消毒，于大鼠背部取直徑為2cm的圓形切口1個(gè)，剪開(kāi)皮膚全層、皮下淺筋膜直至肌層，止血后在創(chuàng)面上加糞液1mL（正常人新鮮糞便10g，加生理鹽水5mL，混勻，離心，取上清液，現(xiàn)配現(xiàn)用），以油紗、敷料、膠帶固定，48 h后去除覆蓋物，見(jiàn)傷口有膿性分泌物、有糞臭味者為造模成功。以后每次換藥前0.5 h均在創(chuàng)面上滴加糞液1mL。

1.5 用藥方法 肛愈寧組:造模后第1 d清晨起換藥，1次/d。先后用生理鹽水棉球、碘伏棉球擦拭創(chuàng)面，外敷肛愈寧軟膏紗條，再蓋以醫(yī)用敷料。馬應(yīng)龍痔瘡膏組:換藥方法同上，創(chuàng)面外敷馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏紗條。兩組分別持續(xù)換藥18次，1次/d。

1.6 觀(guān)察指標(biāo) 在造模后第3、7、10、14、18 d，分5批（每批每組8只大鼠）處死大鼠,在創(chuàng)緣切取0.5cm×0.5cm肉芽組織，置卡諾液中固定45min，石蠟包埋、切片，行常規(guī)HE染色，采用光鏡及MPIAS-500彩色病理圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行觀(guān)察。觀(guān)察指標(biāo):⑴創(chuàng)面閉合指數(shù)。計(jì)算公式:創(chuàng)面閉合指數(shù)=（1-治療后創(chuàng)面面積/原始創(chuàng)面面積）×100%。⑵每個(gè)標(biāo)本觀(guān)察3個(gè)視野，計(jì)數(shù)毛細(xì)血管數(shù)，并求其均值（新生毛細(xì)血管數(shù)/每個(gè)視野）。⑶每個(gè)標(biāo)本觀(guān)察5個(gè)視野，計(jì)數(shù)肉芽組織中成纖維細(xì)胞數(shù)，并求其均值（成纖維細(xì)胞數(shù)/每個(gè)視野）。⑷觀(guān)察肉芽組織中的炎性細(xì)胞數(shù)。（炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度半定量標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)[2]的方法略作調(diào)整:++:多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；+:少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；±偶見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。）

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 創(chuàng)面愈合時(shí)間 肛愈寧組大鼠創(chuàng)面閉合指數(shù)高于馬應(yīng)龍痔瘡膏組，18 d時(shí)肛愈寧組大鼠創(chuàng)面已全部愈合。見(jiàn)表1。

2.2 創(chuàng)面肉芽組織中毛細(xì)血管數(shù) 肛愈寧組肉芽組織中毛細(xì)血管在創(chuàng)面愈合早期（造模后3～7 d）較馬應(yīng)龍痔瘡膏組多（P＜0.05），10 d后兩組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

2.3 創(chuàng)面肉芽組織中成纖維細(xì)胞數(shù) 肛愈寧組肉芽組織中成纖維細(xì)胞在創(chuàng)面愈合早期（造模后3～7 d）較馬應(yīng)龍痔瘡膏組多（P＜0.05），10 d時(shí)馬應(yīng)龍痔瘡膏組創(chuàng)面中成纖維細(xì)胞較肛愈寧組多，14d時(shí)兩組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

2.4 肉芽組織中炎性細(xì)胞數(shù) 在造模后第3d，肛愈寧組（肛組）創(chuàng)面的炎性細(xì)胞數(shù)與馬應(yīng)龍痔瘡膏組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7 d以后，肛愈寧組炎性細(xì)胞，較馬應(yīng)龍痔瘡膏組（馬組）少，見(jiàn)表4。

表1 兩組大鼠創(chuàng)面閉合指數(shù)比較（,%）

表1 兩組大鼠創(chuàng)面閉合指數(shù)比較（,%）

注:與馬應(yīng)龍痔瘡膏組比較，*P＜0.05；△P＜0.01

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表2 兩組大鼠創(chuàng)面肉芽組織中毛細(xì)血管數(shù)比較（）

表2 兩組大鼠創(chuàng)面肉芽組織中毛細(xì)血管數(shù)比較（）

注:與馬應(yīng)龍痔瘡膏組比較，*P＜0.05；△P＜0.01

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表3 兩組創(chuàng)面肉芽組織中成纖維細(xì)胞數(shù)比較（）

表3 兩組創(chuàng)面肉芽組織中成纖維細(xì)胞數(shù)比較（）

注:與馬應(yīng)龍痔瘡膏組比較，*P＜0.05；△P＜0.01

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表4 兩組大鼠創(chuàng)面肉芽組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)比較

2.5 病理組織學(xué)觀(guān)察 造模后第3d時(shí)肛愈寧組創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)良好，滲出壞死層較薄，肉芽層明顯；此時(shí)馬應(yīng)龍痔瘡膏組創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)緩慢，滲出壞死層較厚，肉芽層不明顯。造模后第7 d時(shí)肛愈寧組創(chuàng)面邊緣有成熟的鱗狀上皮組織長(zhǎng)入，基底細(xì)胞增生活躍，并見(jiàn)核分裂像；此時(shí)馬應(yīng)龍痔瘡膏組邊緣上皮組織的基底細(xì)胞增生，但無(wú)成熟的鱗狀上皮形成（見(jiàn)圖1～圖4）。

圖1 3d肛愈寧組HE（×100）

圖2 3d馬應(yīng)龍痔瘡膏組HE（×100）

圖3 7d肛愈寧組HE（×400）

3 討論

肉芽組織由大量的毛細(xì)血管、微小血管及豐富的成纖維細(xì)胞組成，成纖維細(xì)胞是創(chuàng)傷修復(fù)最主要的細(xì)胞[3]。在細(xì)胞增殖和修復(fù)期，最關(guān)鍵的步驟之一是肉芽組織的形成。創(chuàng)傷形成后，成纖維細(xì)胞發(fā)生增殖、遷移，并合成、分泌膠原和胞外基質(zhì)（蛋白質(zhì)）成分，參與肉芽組織形成、創(chuàng)口收縮及組織重建的過(guò)程，其數(shù)量變化會(huì)對(duì)創(chuàng)傷愈合產(chǎn)生巨大影響[4]。

肛愈寧軟膏的組方是通過(guò)檢索古代文獻(xiàn)結(jié)合臨床實(shí)踐而得，由白礬、冰片、麝香、沒(méi)藥、乳香、樸硝、黃連、白芨和白芷組成，以麻油、凡士林為基質(zhì)，具有活血行氣、散瘀止痛、斂瘡生肌的功效，在臨床促進(jìn)難愈性創(chuàng)面愈合治療上取得了一定的療效。

本研究對(duì)兩組不同時(shí)限創(chuàng)面組織進(jìn)行了顯微鏡下觀(guān)察，于造模后第3d見(jiàn)肉芽組織由創(chuàng)面底部及邊緣部向創(chuàng)面長(zhǎng)入，毛細(xì)血管多與創(chuàng)面呈垂直生長(zhǎng)，血管內(nèi)皮細(xì)胞肥大，血管擴(kuò)張、淤血，纖維母細(xì)胞數(shù)量日漸增多。第7～10 d，肉芽組織形成更成熟，纖維母細(xì)胞產(chǎn)生膠原纖維活躍，疤痕底開(kāi)始形成，創(chuàng)面逐漸變淺，創(chuàng)面邊緣的基底細(xì)胞增生，向創(chuàng)面中心部移動(dòng)，逐漸發(fā)展為復(fù)層鱗狀上皮，逐漸覆蓋于肉芽組織表面。在愈合過(guò)程中，肛愈寧組在第7 d時(shí)毛細(xì)血管數(shù)、成纖維細(xì)胞數(shù)達(dá)到峰值，馬應(yīng)龍痔瘡膏組在第10 d時(shí)新生毛細(xì)血管數(shù)、成纖維細(xì)胞數(shù)達(dá)到峰值，兩峰之比，差異性顯著（P＜0.05）。本研究結(jié)果提示:肛愈寧軟膏在創(chuàng)面愈合早期（3～7 d）能顯著增加創(chuàng)面肉芽組織成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管的數(shù)量，從而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。

糞污染所致的腸道桿菌感染是肛門(mén)部切口延遲愈合的主要因素之一。在造模后第3d，肛愈寧組創(chuàng)面的炎性細(xì)胞數(shù)與馬應(yīng)龍痔瘡膏組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在7 d以后肛愈寧組創(chuàng)面炎性細(xì)胞少于馬應(yīng)龍痔瘡膏組，提示肛愈寧軟膏抑制了糞液污染創(chuàng)面所致的炎癥反應(yīng)。我們據(jù)此認(rèn)為:抑制創(chuàng)面細(xì)菌生長(zhǎng)、減輕創(chuàng)面炎癥反應(yīng)，也可能是肛愈寧軟膏促進(jìn)肛周膿腫術(shù)后創(chuàng)面愈合的作用機(jī)理之一。

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